酵母双杂交法筛检酚类物质的内分泌干扰作用

利用酵母双杂交系统对4种天然和合成的雌激素,4种植物性激素以及14种常用于自来水供水系统中的酚类物质进行了内分泌干扰作用的筛检测定.结果表明,这些物质的作用强度与其结构有很大的关系.14种人工合成的化学物质中,有8种显示出b-半乳糖甘酶诱导活性.从与雌激素受体结合活性值的比较结果可以推测,没有显示出b-半乳糖甘酶诱导活性的物质可能具有抗雌激素(antagonist)作用.

原位双杂交法研究Rb、p16^(ink4)基因在非小细胞肺癌中的转录

目的 :探讨非小细胞肺癌组织中Rb、p1 6INK4 基因的转录。方法 :分别以Bio标记RbcDNA探针、Dig标记p1 6INK4 cDNA探针 ,进行mRNA原位双杂交。结果 :以Bio 辣根过氧化物酶 AEC系统检测Rb基因转录 ,阳性结果为红色 ,阳性率为 83 9% (2 6/3 1 ) ;以Dig 碱性磷酸酸酶 NBT/BCIP系统检测 p1 6INK4 基因转录 ,阳性结果呈蓝色 ,阳性杂交率为 77 4% (2 4/3 1 )。结论 :mRNA原位双杂交法具直观、适合少量细胞、能排除癌组织中混有间质细胞的影响、过程简便等优点 ,Rb、p1 6INK4

污水处理工艺中雌激素活性分布与去除途径分析

针对内分泌干扰物在水中质量浓度低、危害大、去除困难的现状,采用固相萃取/重组酵母法调查了城市污水厂各工艺过程中雌激素活性的分布并对其去除途径进行分析.结果表明:雌激素活性主要存在于液相中,悬浮态中只占7.7%±5.5%;雌激素活性的去除主要发生在二级生物处理过程,通过对二级生物处理过程进行质量衡算发现,吸附到剩余污泥中的雌激素活性占进水中的1.2%,对雌激素活性的去除主要依靠微生物降解(占73.9%).通过理论计算证实雌激素活性的去除途径主要是依靠微生物降解作用,通过污泥吸附和挥发去除非常有限(小于15%).总之,城市污水厂出水中雌激素活性仍然较高(3.37～6.76 ng.L-1),强化二级生物处理或者对污水深度处理迫在眉睫.

拟南芥H^+_-焦磷酸化酶AVP1互作小GTP结合蛋白AtRAB的特性鉴定与功能分析

以拟南芥AVP1为诱饵,采用膜蛋白酵母双杂交系统筛选拟南芥cDNA文库,获得一个与AVP1互作的小GTP结合蛋白AtRAB。酵母互作试验表明,AVP1和AtRAB存在互作;双分子荧光互补实验(BiFC)证明,AVP1和AtRAB能在质膜和细胞核上发生相互作用。野生型拟南芥(WT)、AtRAB和AVP1的拟南芥突变体rab和avp1在高盐胁迫条件下,随着NaCl浓度的加大,突变体rab和avp1的表型变化相似,相对于WT都表现为根长缩短,侧根数减少;在低磷处理条件下,随着磷浓度的逐渐降低,2个突变体的表型相似,相对于WT同样表现为根长缩短,总根面积减少,侧根数减少;在相同磷浓度条件下,突变体rab对胁迫的反应比avp1强;在低钾处理条件下,随着钾浓度的降低,2个突变体的表型与在低磷胁迫处理条件下的表型相似。结果说明,AVP1和AtRAB可以在细胞膜和细胞核上相互作用,AtRAB能够影响植物对离子的吸收,AVP1和AtRAB的突变体在高盐、低磷和低钾等胁迫条件下表型变化相似,证明了2个基因都正向调控植物对高盐、低磷和低钾胁迫的反应,它们属于同一信号途径。

CDK5/p39i抑制酵母细胞生长的观察

双杂交分析法是一种以酵母为基础的在活体条件下探测蛋白质-蛋白质相互作用的基因分析方法[1], 是寻找未知蛋白质的常用实验手段 .2000年1～4月在酵母双杂交实验中观察到转化细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5, CDK5)及其激活物异型体 (p39 isoform, p39i)[2]对酵母细胞L40生长产生的抑制性效应.现将实验结果报道如下.