H^+对非洲爪蟾卵母细胞ATP-激活电流的调制作用

研究H+对非洲爪蟾卵母细胞内源性ATP受体的调制作用。采用双极电压钳技术记录卵母细胞膜ATP受体介导的电流。实验检测的细胞全部对ATP敏感,应用pH为7.4的ATP(10-3mol/L)后引起一特征性电流,呈浓度依赖性。改用pH为6.5,6.0,5.5的ATP(10-3mol/L)后,电流幅值明显减弱。结果表明,pH值降低,可抑制ATP诱导的卵母细胞膜电流。

镉对P2X4受体介导的ATP-激活电流的影响及其特征

目的:研究镉对P2X4嘌呤受体介导的ATP-激活电流的影响及其特征。方法:将编码大鼠P2X4受体的cDNA在体外转录成cRNA,通过显微注射技术将该cRNA注入非洲爪蟾卵母细胞中进行表达。应用全细胞双极电压钳技术研究镉对P2X4受体介导的ATP-激活电流(IATP)的影响。结果:①在一定浓度范围内,镉可逆性地增强爪蟾卵母细胞表达的P2X4受体介导的ATP-激活电流。当镉的浓度为30μmol/L时,对ATP-激活电流的增强作用最大,超过30μmol/L时,随着镉浓度的增加,ATP-激活电流反而呈现抑制效应。②10μmol/L镉可使ATP量-效曲线左移,EC50从(17.1±1.5)μmol/L降低到(9.8±1.8)μmol/L(n=6,P<0.01),Hill系数从1.14±0.13提高到1.57±0.36;③镉对ATP-激活电流的增强作用没有电压依赖性;④当镉的孵育时间为120 s时,对ATP-激活电流增强作用最大。结论:镉增强P2X4受体介导的ATP-激活电流是可逆的,具有浓度依赖性、时间依赖性、无电压依赖性。这种作用可能是通过对P2X4受体的变构调节引起的。

乙酰胆碱对非洲爪蟾卵母细胞ATP-激活电流的调制作用

研究乙酰胆碱对爪蟾卵母细胞上ATP激活电流的影响及其机理。用双电极电压钳技术记录爪蟾卵母细胞的细胞外液加入乙酰胆碱对ATP激活电流(IATP)的影响。结果显示,乙酰胆碱对大多数细胞IATP具有增强作用,而对少数细胞IATP具有抑制作用,且均呈现浓度依赖性;乙酰胆碱对IATP的调制作用是通过毒蕈碱样乙酰胆碱受体(M受体)激活实现的。

钴对表达在爪蟾卵母细胞上P2X_4受体介导的ATP-激活电流的调制

目的研究钴对P2X4受体介导的ATP-激活电流(IATP)的调制作用。方法应用双微电极电压钳技术,记录细胞外液加CoCl2对表达在爪蟾卵母细胞上的大鼠颈上神经节P2X4受体介导的IATP的调制作用。结果 0.1～30μmol/L浓度范围的钴离子对P2X4受体介导的IATP呈明显的增强效应,钴浓度越高,IATP幅值越大,0.1μmol/L、0.3μmol/L、1μmol/L、3μmol/L、10μmol/L、30μmol/L的钴离子使IATP增加的百分比分别为:12.1±4.6,30.4±5.1,49.3±6.8,70.9±7.2,104.2±16.7,145.8±20.1(P<0.01);IATP的量-效曲线在钴离子的作用下向左上移位;应用1μmol/L钴离子加ATP的混合液同时灌流细胞,可导致ATP的EC50从(15.6±1.9)μmol/L降低到(8.1±0.6)μmol/L(P<0.01);即使是高浓度的钴,仍然对IATP表现出明显的增强作用;当ATP浓度不变,钳制电位变化(-140～60mV)时,钴离子对P2X4受体介导的IATP的增强作用无明显变化。结论钴对P2X4受体介导的IATP的增强效应呈浓度依赖性而非电压依赖性。钴与通道蛋白胞外环的作用位点可能与锌和镉不同。