大鼠三叉-小脑投射神经元表达磷酸激活的谷氨酰胺酶——双标法研究(英文)

磷酸激活的谷氨酰胺酶 (phosphateactivatedglutaminase,PAG)可作为谷氨酸能神经元的标志物。采用逆行束路追踪技术和PAG免疫荧光组织化学法 ,研究脑干三叉核团复合体中向小脑袢状小叶Crus1区投射神经元是否呈PAG样免疫反应阳性。结果表明 :将荧光金 (Fluoro Gold ,FG)注入小脑袢状小叶Crus1区后 ,在三叉神经感觉主核 (Pr5 )、三叉神经脊束核极间亚核 (Sp5I)和吻侧亚核背内侧部 (Sp5DM)、三叉间核 (I5 )以及三叉神经运动核与上橄榄核之间的一个小区域 (nucleusJ)中均可见到FG逆行标记细胞。标记细胞出现在上述核团的双侧 ,但以同侧为主。PAG免疫荧光组织化学反应结果显示 :许多FG标记神经元呈强PAG样免疫阳性 ,其中FG/PAG双标神经元占FG逆行标记神经元总数的 73%～ 94 %。结果提示 :脑干三叉神经核团中的谷氨酸能神经元可能参与触觉信息从面口部向小脑的传递。

福尔马林皮下注入引起大鼠脊髓背角表层神经元Fos蛋白和蛋白激酶Cβ亚型的共同表达 :免疫细胞化学双标法研究(英文)

目的 :研究慢性伤害性模型大鼠脊髓背角表层神经元中Fos蛋白和蛋白激酶Cβ亚型的表达间的关系。方法 :用免疫细胞化学双标技术 ,观察了大鼠一侧后脚掌注射福尔马林 1h后 ,脊髓腰段背角神经元中Fos蛋白和蛋白激酶Cβ亚型 (PKCβ)的表达及二者的共存情况。结果 :1)注射侧背角表层中有大量Fos蛋白样免疫组化染色阳性神经元出现 ,且其中一半以上同时有PKCβ样免疫反应的增强 ,而背角表层中有PKCβ样免疫反应增强的神经元中 ,只有 1/5同时有Fos蛋白样阳性反应出现 ;2 )在注射侧背角Ⅴ～Ⅶ层中也有少量Fos蛋白样阳性反应神经元出现 ,但它们都不出现PKCβ LI反应的增强。结论 :背角表层中的双标免疫阳性神经元可能与慢性伤害性输入引起的脊髓过敏状态的形成有关。

CFSE/PI双标法检测CIK细胞对顺铂预处理肿瘤细胞的杀伤活性

细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer,CIK）是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得的一群异质细胞,具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广等优点。如何对CIK细胞的效应功能进行客观准确的评价,如何使CIK和化疗有机地结合在一起,对CIK的临床应用具有重要的意义。本实验建立并优化了CFSE／PI双标法检测CIK细胞及联合顺铂（DDP，DS platin）对肺癌A549细胞的杀伤功能，方法简便易行、灵敏度高，对CIK细胞的临床应用具有重要的借鉴意义。

CK19联合人乳腺珠蛋白-量子点双标法检测乳腺癌循环肿瘤细胞及其初步临床研究

近年来,乳腺癌是中国女性发病率最高的癌症,导致乳腺癌主要死亡原因是远处转移,因此早期发现乳腺癌微转移将可能成为临床指导乳腺癌的治疗的有力依据[1]。本文探讨改良细胞角蛋白CK19单标法,应用CK19联合人乳腺珠蛋白-量子点(human mammaglobin quantum dot,hMAM-QDs)双标法检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs),并分析比较两者的检测效果。

微量淋巴细胞毒法及流式细胞术B27/B7双标法检测HLA-B27的对比

目的探讨微量淋巴细胞毒法与流式细胞术B27/B7双标法两种HLA-B27检测方法的优缺点，为临床诊断提供可靠的实验室数据.方法选择2〇15年10月至2〇16年10月该院就诊患者U4例，分为脊柱关节病组I27例、强直性脊柱炎组47例，同时选取体检健康者50例作为对照组，分别采用微量淋巴细胞毒法及流式细胞术B27/B7双标法检测HLA-B27抗原，对结果进行比较分析.结果微量淋巴细胞毒法检测出HLA-B27阳性102例：脊柱关节病组67例，阳性率为52.7%;强直性脊柱炎组30例，阳性率为63.8%;对照组阳性5例，阳性率为10.0%?流式细胞术B27/B7双标法检测出HLA-B27阳性123例：脊柱关节病组81例，阳性率66.1%;强直性脊柱炎组41例，阳性率87.2%;对照组1例，阳性率为2.0%^3组间比较差异有统计学意义（P<0.05h结论流式细胞术HLA-B27/B7双标法的特异度和敏感度较高，明显优于传统微量淋巴细胞毒法。

猴耳环双标多测法及抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性成分快速筛选法的建立

目的:建立猴耳环中5个成分的双标多测法及其抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性成分的快速筛选法。方法:采用HPLC法,以双标线性校正法准确定位猴耳环中5个成分色谱峰,以没食子酸为参照物,计算没食子酸与其余4个成分的相对校正因子,对各成分进行定量,将所得结果与外标法进行比较。采用离线DPPH-HPLC法及亲和超滤液相联用法快速筛选猴耳环中具有抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性成分。结果:双标线性校正法相比于相对保留时间更能准确地预测待测组分在未知色谱柱上的保留时间;相对校正因子法和外标法结果的RSD<2.00%。采用离线DPPH-HPLC法及亲和超滤液相联用法可以快速筛选出猴耳环中7-没食子酰基特利色黄烷、杨梅苷等不同程度抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物。结论:该研究建立的双标多测同时测定猴耳环中5个成分的方法准确可行,采用离线DPPH-HPLC法及亲和超滤液相联用法能快速、灵敏、高通量筛选猴耳环中的抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性成分。

双标多测法在枣仁安神颗粒6个成分含量测定中的应用

目的建立枣仁安神颗粒中斯皮诺素、6'''-阿魏酰斯皮诺素、迷迭香酸、五味子醇甲、五味子乙素和丹酚酸B 6个成分的双标多测法,验证该方法在枣仁安神颗粒质量评价中应用的准确性和可行性。方法采用HPLC法,以乙腈为流动相A,0.2%冰醋酸溶液为流动相B,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),切换波长320 nm(斯皮诺素、6'''-阿魏酰斯皮诺素、迷迭香酸、丹酚酸B)、250 nm(五味子醇甲、五味子乙素),柱温28℃。采用5根不同的C_(18)色谱柱,测定枣仁安神颗粒6个成分的实际保留时间,计算各成分在各色谱柱保留时间的平均值,得到各成分的标准保留时间,选取斯皮诺素(峰1)、五味子乙素(峰6)作为双标化合物,使用双标线性校正法准确定位各成分色谱峰,预测成分在未知色谱柱的保留时间并进行方法学验证。以五味子乙素为参照物,计算其余各成分的相对校正因子,对各成分进行定量。结果双标线性校正法能够准确地预测待测组分在未知色谱柱上的保留时间;斯皮诺素、6'''-阿魏酰斯皮诺素、迷迭香酸、五味子醇甲和丹酚酸B相对于五味子乙素的相对校正因子分别为0.7342、0.6063、0.5664、0.9975及0.7773,其RSD均小于1%;各成分含量计算值和实测值无显著差异。结论双标多测法同时测定枣仁安神颗粒中6个成分可行且准确。

八珍汤指纹图谱建立及双标多测法对多指标成分含量的测定

目的:建立八珍汤程序波长变换HPLC指纹图谱,采用双标多测法同时检测八珍汤中9个成分的含量。方法:采用Agilent EC-C_(18)(100 mm×4.6 mm,2.7μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;变波长检测。结果:建立的八珍汤指纹图谱中共确定31个共有峰,各批样品相似度均大于0.900,聚类分析和主成分分析结果一致,均可将30批八珍汤分为2类;含量测定结果表明9个成分在一定的浓度范围内与峰面积的线性关系良好,精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3.00%,平均加样回收率为91.89%~99.91%。定量结果经t检验分析确定与外标法结果无显著性差异。结论:该研究建立的程序波长变换HPLC指纹图谱并结合双标多测法同时测定八珍汤9个成分含量的方法稳定、可靠,可为其质量控制提供参考。

骨髓活检塑料包埋切片免疫双标法的建立

双重免疫染色用于恶性血液病骨髓活检的研究国内外报道甚少，我们借鉴了非洗脱法中的间接法一异种动物抗体法，对多发性骨髓瘤患者选用了浆细胞抗体CD38和增殖细胞抗体Ki-67抗体的配对，建立了重复性和稳定性好的双标记法。

程序可变波长双标法同时测定参益安神片中5种有效成分的含量

目的:利用HPLC-DAD程序可变波长功能,建立一种同时测定参益安神片中人参皂苷Rb_1、酸枣仁皂苷A、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素5种有效成分含量的双标检测法。方法:采用Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温30℃;乙腈(A)-水(B)为流动相,流速为1 mL·min^(-1),梯度洗脱;检测波长:203 nm(检测人参皂苷Rb_1,酸枣仁皂苷A)、217 nm(检测五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素);建立酸枣仁皂苷A和内参物人参皂苷Rb_1之间的相对校正因子;建立五味子甲素和五味子乙素与内参物五味子醇甲之间的相对校正因子。结果:在90 min内参益安神片中人参皂苷Rb_1、酸枣仁皂苷A、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素5种有效成分可完全分离;峰面积与其浓度呈良好的线性关系;双标法计算结果与外标法实测值之间没有显著性差异,实验所得相对校正因子可信。结论:利用程序可变波长高效液相色谱法,结合一测多评技术建立了一种可靠的同时测定参益安神片中5种有效成分含量的检测方法。

“双标法”在班级量化考核中的应用

现行班级量化考核中存在的问题竞争机制进入校园后，对班级工作的科学评估就成了学校管理中的重中之重。人们经过一段时间的探索后，普遍接受了量化考核机制。但现行量化考核在定量与定性的转化中仍存在着许多问题：１．把被考核班级按量化成绩由高到低排队，盲目地取前几...

西洋参破壁饮片中8种人参皂苷类成分双标多测法的建立

目的:建立同时测定西洋参破壁饮片中8种人参皂苷类成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱-二极管阵列检测器法(HPLC-DAD)测定西洋参破壁饮片中人参皂苷Rg_(1)、Re、Rb_(1)、Rc、Ro、Rb_(2)、Rb_3、Rd的含量。色谱柱为Agilent5 TC-C_(18)柱;流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液(梯度洗脱);柱温为30℃;流速为1.0 mL/min;检测波长为203 nm;进样量为10μL。以人参皂苷Re和人参皂苷Rb_(2)为参照物,采用双标线性校正法预测其余6种成分的保留时间以对其进行定性,并比较该方法与相对保留时间法的差异;以人参皂苷Re为参照物,采用相对校正因子法对上述成分进行定量,并与外标法定量结果进行比较。结果:西洋参破壁饮片中人参皂苷Rg_(1)、Re、Rb_(1)、Rc、Ro、Rb_(2)、Rb_3、Rd的含量分别为10.59~12.78、2.160~2.768、27.492~38.880、3.154~4.018、3.368~4.080、0.343~0.755、0.961~1.415、5.857~6.923 mg/g。采用双标线性校正法预测成分保留时间的准确性更高,且预测保留时间的绝对偏差均低于相对保留时间法;采用相对校正因子法和外标法的定量结果差异不大,相对误差(RE)均小于3%。结论:所建立的双标多测法可同时对西洋参破壁饮片中8种人参皂苷类成分进行准确定性和定量。

基于UPLC及一测多评,双标多测法测定麸炒泽泻中4种三萜类成分的含量

目的:采用一测多评法(QAMS),利用UPLC同时测定麸炒泽泻中4种三萜类成分的含量,同时与HPLC所用校正因子进行比较;并比较相对保留时间法和双标线性校正法在色谱峰定性上的差异。方法:以23-乙酰泽泻醇B为内参物,建立其与泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇B的相对校正因子,比较在UPLC和HPLC上校正因子的差异。同时选择青蒿素为外参物,利用双标线性校正法预测色谱峰的保留时间,比较其与相对保留时间法的预测结果。结果:使用UPLC系统,一个样品的分析仅需要5 min。不同厂家、不同炒制温度下所制麸炒泽泻中化学成分差异较大。UPLC和HPLC的相对校正因子差异不大。相对保留时间法在UPLC上某些预测结果与真实值比较相差较大,而双标线性校正法无论是在HPLC还是在UPLC上,色谱峰的保留时间预测值都较为准确。结论:受温度影响,泽泻中三萜类成分含量变化较大,泽泻炮制工艺亟待统一。一测多评的相对校正因子在不同的液相系统具有一定的通用性。色谱峰保留时间的预测,双标线性校正法优于相对保留时间法。

HPLC双标多测法测定银黄口服液中7个成分的含量

目的建立高效液相色谱(HPLC)双标多测法,测定银黄口服液中7个成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、黄芩苷)的含量。方法采用HPLC,借助DRS Origin软件,以绿原酸(峰2)和黄芩苷(峰7)为双标化合物,采用双标线性校正法进行色谱峰定性;以双标化合物中的绿原酸为参照物,用相对校正因子法对其他6种成分进行定量。同时,分别采用相对校正因子法和外标法对20批不同企业生产的银黄口服液样品中上述7个成分进行含量测定。结果使用DRS Origin软件可准确定性色谱峰。新绿原酸、隐绿原酸、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸和黄芩苷对绿原酸的相对校正因子分别为0.9606,09612,1.0243,1.2603,1.2394,1.0872,使用该相对校正因子计算的含量和外标法结果的绝对偏差均小于0.1 mg/ml,且建立的方法符合方法学验证要求,平均回收率分别为98.62%,102.58%,100.41%,104.76%,103.17%,102.95%,97.39%(n=6),RSD分别为1.93%,1.08%,1.10%,0.74%,0.92%,0.78%,1.13%。结论双标多测法作为一种新的替代对照品方法,可用于银黄口服液中7个成分的质量评价,方法可行、准确且经济实用,值得应用和推广。

标准物质替代测定法在中药质量评价中的应用与发展

标准物质替代测定法是采用一种或多种中药对照品来实现对多个待测组分进行分析的方法,是近年来中药质量评价的新方法。本文就标准物质替代测定法中一测多评法及双标多测法的近年研究进展及其在中药质量评价中的应用进行概述,为其在中药色谱分析技术中的进一步研究和应用提供思路与参考。

双标线性校正法用于川黄芩的多成分定性分析

目的 建立测定川黄芩中5个成分(黄芩苷、未知峰2、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素)的高效液相色谱(HPLC)方法,并比较双标线性校正法和相对保留时间法的优劣。方法 采用20根不同品牌的C_(18)色谱柱,测定川黄芩中5个成分的实际保留时间,并计算标准保留时间(SRT)。借助DRS Origin软件,以黄芩苷(峰1)和黄芩素(峰5)为双标化合物,采用双标线性校正法预测其他3个成分的保留时间,并在另外两根C_(18)色谱柱上进行方法验证。同时以千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(峰3)为参照物,使用相对保留时间法预测其他4个成分的保留时间。结果 双标线性校正法可用于川黄芩的多成分定性分析,且建立的方法符合方法学验证要求。与相对保留时间法相比,双标线性校正法预测保留时间的准确度更高,色谱柱的适用范围更广。结论 双标线性校正法具有更好的辅助色谱峰定性的作用,方法可行、准确且经济实用。

双标线性校正法应用于西洋参破壁饮片的指纹图谱研究

目的:建立西洋参破壁粉碎前后高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱,并采用双标线性校正法进行定性。方法:采用高效液相色谱-电雾式检测器法(HPLC-CAD),以西洋参破壁饮片与传统饮片为研究对象,使用相似度分析进行质量评价。另以人参皂苷Re和人参皂苷Rb2为双标化合物,使用DRSOrigin软件进行双标线性校正,预测特征峰的保留时间,并比较其与相对保留时间法的差别,以辅助色谱峰定性分析。结果:所选10批西洋参破壁饮片与传统饮片指纹图谱相似度均在0.939以上,共确定17个共有峰,并建立了以人参皂苷Rg_(1)、Re、Rb_(1)、Rc、Rb_(2)、Rb_(3)、Rd及拟人参皂苷F_(11)为特征峰的对照特征图谱。双标线性校正法预测保留时间的精度优于相对保留时间法。结论:所建立的方法简便、准确,可为该品种的质量评价与控制提供有力的技术支持。同时,可为其他破壁饮片质量标准研究提供参考。

双标多测法在脑心通胶囊5个成分含量测定中的应用

目的 建立脑心通胶囊中羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B和藁本内酯5个成分的双标多测法,验证该方法在脑心通胶囊质量评价中应用的准确性和可行性。方法 采用高效液相色谱(HPLC)法,以乙腈为流动相A,0.5%甲酸溶液为流动相B,梯度洗脱,流速为1 ml/min,检测波长403 nm(羟基红花黄色素A)、240 nm(芍药苷)、280 nm(丹酚酸B)、324 nm(阿魏酸和藁本内酯),柱温35℃。采用6根不同型号的C18色谱柱,测定脑心通胶囊5个成分的实际保留时间,计算各成分在各色谱柱保留时间的平均值,得到各成分的标准保留时间,选取羟基红花黄色素A(峰1)、藁本内酯(峰5)作为双标化合物,使用双标线性校正法准确定位各成分色谱峰,预测各成分在未知色谱柱的保留时间并进行方法学验证。以阿魏酸为参照物,计算其余各成分的相对校正因子,对各成分进行定量。结果 双标线性校正法能准确地预测待测组分在未知色谱柱上的保留时间。羟基红花黄色素A、芍药苷、丹酚酸B和藁本内酯对于阿魏酸的相对校正因子分别为0.728,1.094,1.553和1.339,其RSD均小于1%。各成分含量计算值和实测值无显著差异。结论 双标多测法同时测定脑心通胶囊中5个成分可行且准确。

基于双标分析法的风险管理体系合理性审计

随着竞争的多元化及大数据时代的到来,风险管理成为越来越多企业赖以生存与发展的重要基石,内审在评价风险控制活动的设计及执行有效性方面已发挥了较大作用,并形成较为成熟的方法论。大数据模式下的双标分析法是实施风险管理体系合理性审计的一种方案,既为如何开展企业风险管理体系合理性审计提供思路,也为企业风险管理体系的发展提供方向性建议。