TNF-α/hs-CRP双标记时间分辨荧光免疫法用于脓毒症早期筛查诊断的研究

目的建立一种双标记时间分辨荧光免疫法(TRFIA)用于定量检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平。方法将抗TNF-α和hs-CRP单克隆抗体包被在96孔板,制备铕(Eu3+)和钐(Sm3+)检测抗体偶联物,建立双抗体夹心TRFIA法并组装成试剂盒,评价此试剂盒的灵敏度、线性范围、加标回收率和各项检测性能。结果建立了TRFIA检测血清TNF-α和hs-CRP水平的新方法并组装成试剂盒,此试剂盒对TNF-α检测的线性范围为0~100 ng/L,灵敏度为0.05 ng/L,对hs-CRP检测的线性范围为0~100 mg/L,灵敏度为0.02 mg/L;对TNF-α检测的加标回收率92.00%~107.00%,对hs-CRP检测的加标回收率95.00%~106.82%,与其他常见的血清干扰物质无明显的交叉反应;对TNF-α检测的批内CV 4.57%~9.24%,批间CV 5.13%~9.27%;对hs-CRP检测的批内CV 3.57%~7.69%,批间CV 6.07%~10.00%;试剂盒能够在4℃稳定保存6个月,37℃下可稳定保存7 d以上。TNF-α的检测阈值为0.44 ng/L,hs-CRP的检测阈值为1.41 mg/L。该试剂盒检测判定结果与临床情况相一致,符合率100%。结论双标记TRFIA法可定量检测TNF-α和hs-CRP水平,具有灵敏度和准确度高、特异性强、方便快捷等优点,可为脓毒症临床样品的早期筛查、疗效评价和预后评估提供一种新的检测方法。

BNP和IL-6双标记时间分辨免疫荧光检测方法的建立及初步应用

目的研制一种脑钠肽(BNP)、白细胞介素-6(IL-6)的双标记时间分辨免疫荧光分析方法(TRFIA)并对其性能进行初步评价。方法将抗BNP和IL-6单克隆抗体(MAb)作为包被抗体包被在96孔板,用Eu3+和Sm3+分别标记另一配对抗体作为检测抗体,建立双抗体夹心TRFIA分析法并制备成试剂盒。进行灵敏度、准确度、重复性、特异性、稳定性和临床样本比对等实验评价其检测性能。结果制备的双标记时间分辨免疫荧光试剂盒对BNP检测的线性范围为10 pg/mL~5000 pg/mL,灵敏度为8.65 pg/mL,对IL-6检测的线性范围为1 pg/mL~1000 pg/mL,灵敏度为5.36 pg/mL。BNP的回收率在91.49%~99.16%,批内CV在5.73%~8.96%,批间CV在8.42%~11.73%;IL-6的回收率在93.95%~111.50%,批内CV在7.32%~10.07%,批间CV在9.40%~11.30%。与血清中常见的脓毒血症检测指标均无明显的交叉反应。试剂盒能够在4℃稳定保存半年,37℃稳定保存7 d。对临床样本的检测发现,该方法参考区间Cut-off值BNP:46.01 pg/mL,IL-6:13.62 pg/mL;检测结果与临床诊断结果一致,准确性较好。结论建立的BNP和IL-6双标记TRFIA方法具有高灵敏度、高特异性、高准确率、方便快捷等优点,可作为预警脓毒症发生、预测脓毒症病情程度及临床预后的一种新的实验室检测方法。

乙肝肝炎病毒检测中荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光的对比分析

探析荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光在乙肝肝炎病毒检测中的应用效果。方法 选用96例疑似乙肝患者,均进行荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光病毒检测,以细菌培养作为金标准,比较不同检测手段的阳性检出率、检验结果及检测效能。结果 荧光定量PCR法的检测符合率、灵敏度,高于时间分辨免疫荧光法,而特异度低于时间分辨免疫荧光法。结论 荧光定量PCR法和时间分辨免疫荧光两种方法各有优缺点,适用于不同的检测环境和需求。在实际应用中,需要根据检测要求和实际情况进行选择,确保有效性和准确性。

C肽与胰岛素双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立及初步临床应用

建立钐(Sm3+)标记检测C肽(C-peptide)及铕(Eu3+)标记检测胰岛素(insulin)的双标记时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),并初步尝试检测人血C肽以及胰岛素含量.将抗C肽单克隆抗体(Biodesign No.E54094M)与抗insulin单克隆抗体(BiodesignNo.E86306M)混合包被96孔板,然后用Sm3+标记抗C肽单克隆抗体(Medix No.9103),Eu3+标记抗insulin单克隆抗体(Biodesign No.E86802M),运用双抗体夹心一步法建立C肽/胰岛素双标记时间分辨免疫荧光分析法.结果显示:C肽分析灵敏度为0.2μg/L,线性范围为0.5～22μg/L,平均回收率达到99.6%,分析内和分析间变异系数分别为4.6%～6.0%和5.1%～7.6%.胰岛素分析灵敏度为0.8 mU/L,线性范围为3.6～180 mU/L,平均回收率为99.4%,分析内和分析间变异系数分别为3.7%～6.0%和5.1%～8.0%.C肽/胰岛素双标记检测试剂与PerkinElmer公司对应的单标记进口试剂盒分别同时测定血清样本200份,检测结果高度相关,具有较好的一致性,相关系数分别为0.98与0.99.总之,自建C肽/胰岛素双标记时间分辨荧光免疫分析方法的性能均可以达到临床检测要求,有望替代现有国内外较为昂贵的单标记试剂,可用于胰岛素分泌不足导致的糖尿病诊断及糖尿病的大规模普查筛选.

甲胎蛋白与CA19-9双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立钐(Sm3+)标记抗甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(单抗)和铕(Eu3+)标记抗糖类抗原19-9(CA19-9)单抗的双标记时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)法。方法将抗AFP单抗与抗CA19-9单抗混合包被96孔板作为捕获抗体,用Sm3+标记抗AFP单抗、Eu3+标记抗CA19-9单抗作为检测抗体,建立同步检测AFP/CA19-9的TrFIA法。结果建立的TrFIA法检测AFP/CA19-9的灵敏度分别为0.3 ng/mL和2.5 U/mL。AFP分析内和分析间变异系数(CV)分别为2.6%～5.9%和4.3%～8.1%,CA19-9分析内和分析间CV分别为4.9%～5.6%和5.0%～6.3%。分别用建立的TrFIA法与Perkin-Elmer公司解离增强镧系荧光免疫分析(DELFIA)法同时测定血清样本,两法AFP与CA19-9的相关系数分别为0.99与0.98。结论建立的同步检测AFP与CA19-9的TrFIA法灵敏、简便、准确,有助于消化道肿瘤和睾丸癌等的辅助诊断。

双标记AFP及Free-β-HCG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的:研制能同时检测人血清AFP和Free-β-HCG的双标记时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)试剂盒。方法:铕(Eu3+)标记抗AFP单克隆抗体,用钐(Sm3+)标记抗Free-β-HCG单克隆抗体,采用双抗体夹心法建立AFP/Free-β-HCG双标记TrFIA试剂,对试剂的各项性能指标进行评价。结果:AFP分析灵敏度为0.1U/ml,分析内和分析间的精密度分别为1.2%～5.9%和2.8%～6.3%,检测试剂的测量范围为(0.1～500)U/ml;Free-β-HCG分析灵敏度为0.25ng/ml,分析内和分析间的精密度分别为1.5%～6.2%和3.5%～5.6%,检测试剂的测量范围为(0.25～200)ng/ml。孕妇血样用本试剂盒与进口的同类试剂盒同时检测,AFP和Free-β-HCG的相关系数分别为0.987、0.968,具有较好的一致性。结论:自制AFP/Free-β-HCG双标记TrFIA试剂盒的各项性能指标均能达到临床检测要求,可替代国外同类产品。

检测β-CTX和N-MID水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法的建立和评价

目的:研制一种检测β胶联降解产物(β-CTX)和骨钙素N端中分子片段(N-MID)水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法(TRFIA)并评价其检测性能。方法:将抗β-CTX和N-MID的4E5和2B7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体包被在96孔培养板,采用铕离子(Eu^(3+))和钐离子(Sm^(3+))分别标记2G6和5A3 MAb作为检测抗体,建立双抗体夹心TRFIA分析法并制备成试剂盒。通过试剂盒的灵敏度、准确度(稀释回收率)、特异性、精密度、稳定性和临床样本比对等实验评价其检测性能。结果:制备的双标记TRFIA试剂盒对β-CTX的检测灵敏度为0.025μg·L^(-1),线性范围为0.025~5.000μg·L^(-1),对N-MID的检测灵敏度为0.5μg·L^(-1),线性范围为0.5~200.0μg·L^(-1)。β-CTX平均稀释回收率为102.13%,N-MID平均稀释回收率为103.02%,与其他常见骨检测指标无明显交叉反应,特异性较强。β-CTX批内变异系数(CV)为5.81%~7.82%,批间CV为5.97%~8.02%;N-MID批内CV为6.05%~8.32%,批间CV为6.14%~8.56%;TRFIA试剂盒可在4℃稳定保存6个月,37℃稳定保存7 d。结论:建立的双标记TRFIA方法具有高灵敏度、高特异度、高准确率和方便快捷等优点,适用于大批量临床样品的检测。

抗心磷脂抗体IgG和IgM双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立和应用

目的 评价新建立的双标记时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA法）检测抗心磷脂抗体（ACA）IgG和IgM的临床应用价值。方法 以心磷脂抗原（含β2糖蛋白Ⅰ段）包板,以稀土元素铕离子（Eu3＋）和钐离子（Sm3＋）分别标记抗人IgG抗体和抗人IgM抗体建立双标记TRFIA法。收集510例自身免疫性疾病患者（硬皮病24例、肾病综合征36例、强直性脊柱炎16例、脑梗死117例、狼疮性肾炎33例、干燥综合征63例、系统性红斑狼疮153例、类风湿关节炎70例）和50名健康献血者的血清标本,采用双标记TRFIA法测定ACA-IgG型抗体和ACA-IgM型抗体的临床阳性率和特异度。评估双标记TRFIA法检测高、中、低值样本的精密度。将3份已知浓度血清标本作倍比稀释,计算ACA-IgM型抗体和ACA-IgM型抗体的回收率。与酶联免疫吸附试验（ELISA法）的结果进行比对,分析双标记TRFIA法与ELISA法检测结果的一致性和稳定性等。结果 双标记TRFIA法检测ACA-IgG型抗体和ACA-IgM型抗体标准曲线的R2值分别为0.999、0.993,荧光强度值与样本浓度呈线性相关。ACA-IgM型抗体高、中、低3个浓度的批内变异系数（CV）分别为1.31%、2.82%、4.14%,批间CV分别为2.29%、4.08%、6.97%;ACA-IgG型抗体高、中、低3个浓度的批内CV分别为1.21%、3.18%、4.61%,批间CV分别为2.26%、3.93%、7.34%。双标记TRFIA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的灵敏度均为0.1U/mL,特异度均为98.00%（49/50）。ACA-IgG型抗体回收率为95.11%~106.14%,ACA-IgM型抗体回收率为96.04%~106.54%。硬皮病、肾病综合征、强直性脊柱炎、脑梗死、狼疮性肾炎、干燥综合征、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎患者ACA-IgG型抗体阳性率依次为16.67%、2.78%、7.14%、3.42%、15.15%、4.76%、7.84%、8.57%,ACA-IgM型抗体阳性率依次为4.17%、11.11%、14.29%、3.42%、27.27%、3.17%、8.50%、10.00%。双标记TRFIA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的结果与ELISA法均呈正相关（R2值分别为0.928、0.924,P值均〈0.05）。双标记TRFIA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的荧光强度值分别下降14.7%和15.8%,ELISA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的光密度值分别下降37.6%和33.9%。结论 双标记TRFIA法同时检测ACA-IgG型抗体和ACAIgM型抗体具有效率高、灵敏度高、特异性强、检测范围宽和稳定的优点,其临床应用价值高,应用前景广阔。

S100B时间分辨荧光免疫检测试剂盒的制备及性能评价

目的:制备一种快捷、准确、定量检测血清中S100B蛋白浓度的时间分辨荧光免疫检测试剂盒,并对其进行性能评价。方法:使用时间分辨荧光微球标记的抗S100B多克隆抗体及兔IgG抗体、标记垫、样品垫、S100B硝酸纤维素膜板、吸水纸制备试纸条,组装卡壳得到S100B时间分辨荧光免疫层析试剂盒。通过标准曲线、准确度、最低检测限、线性区间、特异度、重复性、稳定性等检测对该试剂盒进行性能评估。采用该试剂盒对某地区199例健康者血清及血浆样本的参考区间进行研究,并采用同步盲法测试该试剂盒与罗氏Elecsys S100检测试剂盒的临床应用性能,评估2种试剂盒对于142例样本检测结果的一致性。结果:该试剂盒所得标准曲线方程为y=(1.13302+1.75224)/[1+(x/1.08220)×(-0.60352)]-1.75224,R2=0.99908,线性范围为[0.05,30]ng/mL。该试剂盒可满足准确度相对偏差在±15%内、最低检测限≤0.05 ng/mL、特异度相对偏差在±15%内、批内差和批间差的变异系数均<15%的产品设计要求。稳定性检测结果标明该试剂盒可在2~30℃条件下有效保存12个月。同时,通过该试剂盒测得血清及血浆样本参考区间均<0.3 ng/mL。临床验证结果表明该试剂盒与罗氏Elecsys S100检测试剂盒的测定结果具有高度一致性(Kappa=0.9061>0.80),符合标准。结论:该试剂盒可快捷、准确、定量检测血清中S100B蛋白浓度,为神经类疾病、自身免疫病性疾病、脑血管疾病等的诊断与治疗提供了参考。

时间分辨荧光免疫法检测胎盘生长因子的方法建立及性能评价

目的建立检测胎盘生长因子(placental growth factor,PLGF)的时间分辨荧光免疫分析法(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA),并对其性能进行评价。方法利用捕获PLGF单克隆抗体包被微孔板,铕标记检测PLGF单克隆抗体,建立一种双抗体夹心TRFIA定量测定孕妇血清中的PLGF浓度。对该方法的检测低限、生物检测限、功能灵敏度、精密度、线性、干扰试验、交叉反应试验和HOOK效应等性能指标进行评价。选择125例孕期在9~40周,无溶血、黄疸和脂血的孕妇血清剩余样本,用于方法学比对研究,比对试验结果的相关性采用线性回归分析。结果该方法的捕获抗体包被浓度为7.0μg/ml,铕标记物使用工作稀释度为1:500,样本最适反应时间为90 min,检测低限为1.00 pg/ml,生物检测限为8.00 pg/ml,功能灵敏度为10.00 pg/ml,批内CV和批间CV均在5.00%以内,线性范围为9.00~10500.00 pg/ml,分别在低浓度和高浓度质控品中添加有干扰物质的16种干扰样本与基础样本检测结果的相对偏倚在-3.49%~2.20%内;检测5000 pg/ml糖基化PLGF-1,5000 pg/ml糖基化PLGF-2,5000 pg/ml未糖基化PLGF-3,10000 pg/ml未糖基化血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)/PLGF-1异二聚体,50000pg/ml糖基化VEGF165和40000 pg/ml可溶性FMS样酪氨酸激酶-1,交叉反应率分别为41.82%,27.86%,19.68%,0.042%,0.063%和0.0045%;检测样品PLGF浓度高达115000 pg/ml时仍未出现HOOK效应;样本PLGF浓度在5.74~4197.00 pg/ml间,与电化学发光法(electrochemiluminescence,ECL)检测结果的线性回归方程为Y=1.0709X-30.192,(r=0.9806,tr=55.42,P<0.05)。结论该方法灵敏度高、精密度好、线性范围宽、抗干扰能力强、特异度好、检测范围宽,与参比方法检测结果的相关性良好,可以满足临床需要。

胃蛋白酶原双标记时间分辨荧光免疫分析及其初步临床应用

采用钐(Sm3+)标记抗胃蛋白酶原Ⅰ单克隆抗体(PGⅠ)及铕(Eu3+)标记抗胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体(PGⅡ),建立了双标记时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),同时检测人血清PGⅠ和PGⅡ.将抗PGⅠ单克隆抗体8003#、抗PGⅡ单克隆抗体8101#以一定比例共包被于96孔微孔板上,用Sm3+标记抗PGⅠ单抗8016#、Eu3+标记抗PGⅡ单抗8102#,采用双抗体夹心法建立PGⅠ/PGⅡ的双标记TRFIA.标准曲线由TRFIA检测仪自带的Log-LogB函数处理.PGⅠ可测范围为0.2～300μg/L,批内和批间变异系数(CV%)分别为5.2%和8.1%,平均回收率为96.9%;PGⅡ可测范围为0.05～55μg/L,批内和批间变异系数(CV%)分别为7.1%和11.7%,平均回收率为103.7%;双标记PGⅠ/PGⅡ-TRFIA与PGⅠ-ELISA法、PGⅡ-ELISA法的测定结果高度相关,具有较好的一致性,相关系数分别为0.9426和0.9396.检测300例健康人员的PGⅠ为(157.3±51.0)μg/L,PGⅡ为(10.6±5.9)μg/L,PGⅠ/PGⅡ比值为(14.8±4.3)μg/L.PGⅠ的正常参考值范围在55.3～259.3μg/L之间,PGⅡ正常参考值为<23μg/L,PGⅠ/PGⅡ>6.双标记PGⅠ/PGⅡ-TRFIA方法的研究在国内外尚未见报道,是一种灵敏、简便、快速、经济并可用于大批量样品筛查的方法,有利于各种胃病的大规模普查筛选及患者病程监测.

犬冠状病毒时间分辨免疫荧光分析方法的建立及初步应用

探索建立犬冠状病毒(CCV)的时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法并制备试剂盒,并对试剂盒的性能进行初步的评价。本研究将抗CCV的单克隆抗体(MAb)8D6作为包被抗体,用Eu^(3+)标记的7E10 mAb作为检测抗体,制备双抗体夹心法TRFIA试剂盒,并对试剂盒的准确度、特异性、重复性、稳定性、临床样本检测等性能进行评估。本研究制备的CCV时间分辨免疫荧光试剂盒灵敏度为0.68 ng/mL;各浓度CCV标准品在不同水平的稀释度回收率在94.6%~105.6%;同步检测CPV、CD、CPIV、CAV-1标准品均为阴性,特异性好;批内CV为1.91%~5.03%,批间CV为1.82%~6.03%,重复性好;试剂盒在4℃保存6个月,37℃保存7 d后,试剂盒各项性能均无明显变化;临床样本检测结果与RT-PCR方法结果一致。本研究制备的CCV TRFIA试剂盒具有灵敏度、准确度高,重复性、稳定性良好的优点,能够对CCV的临床样本进行大量的筛查,为CCV患病犬的早期确诊提供了一种全新的技术手段。

丙肝病毒抗体检测运用时间分辨荧光分析法和酶联免疫法的应用价值观察

研究分析时间分辨荧光分析法和酶联免疫法于丙肝病毒抗体检测中应用效果。方法 丙型肝炎行丙肝病毒抗体检测患者2022年1月至同年12月选取521例,运用时间分辨荧光分析法和酶联免疫法做丙肝病毒抗体检测,检测作用做比对分析。结果 时间分辨荧光分析法对于丙肝病毒抗体检出率与酶联免疫法丙肝病毒抗体检出率比对无差异(P>0.05),丙肝病毒抗体检出情况与金标准比对,时间分辨荧光分析法较酶联免疫法准确率、灵敏度较高,优于酶联免疫法(P<0.05)。结论 丙肝病毒抗体检测,时间分辨荧光分析法行检测,对于丙肝病毒抗体有较高,且检测精准度、灵敏度良好。

基于磁珠的胃蛋白酶原Ⅰ和Ⅱ双标记时间分辨荧光免疫分析试剂的研制

针对胃癌及胃病患者血清中胃蛋白酶原Ⅰ(pepsinogenⅠ,PGⅠ)和胃蛋白酶原Ⅱ(pepsinogenⅡ,PGⅡ),研制以磁珠为载体的基于镧系元素铕和钐双标记时间分辨荧光免疫分析技术的检测试剂,能够同时检测患者血清中的PGⅠ和PGⅡ.实验采用双抗体夹心一步法反应模式,铕和钐作为高灵敏的荧光示踪物分别标记抗PGⅠ及PGⅡ抗体,并利用磁珠作为抗原抗体反应的载体,建立双标记磁珠时间分辨荧光免疫分析试剂,并对试剂的各项指标进行评价.实验结果表明,该试剂检测PGⅠ和PGⅡ的分析灵敏度分别达到0.15 ng/m L和0.16 ng/m L,检测范围分别为0.15 500.00 ng/m L和0.16 50.00 ng/m L,准确度和精密性指标均达到临床检测要求,61份临床考核样本经本试剂和雅培化学发光试剂测定,结果一致性较高,无显著差异.实验阐明了磁珠作为固相载体结合经典的时间分辨荧光免疫分析技术在检测PGⅠ和PGⅡ方面的应用潜能,该研究将在多种胃病的诊断、监测及高通量血液筛查等领域发挥巨大的临床应用价值.

双抗原夹心时间分辨荧光免疫法检测梅毒螺旋体特异性总抗体的性能研究

目的对双抗原夹心时间分辨荧光免疫法(TRFIA)检测梅毒螺旋体(TP)特异性总抗体的性能进行研究。方法采用重组TP优势多表位嵌合抗原,应用双抗原夹心TRFIA检测TP特异性总抗体。评价该方法学的精密度、检测低限、准确度、线性、参考品符合率等分析性能指标,并进行临床比对试验研究,方法间结果差异比较采用χ~2检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果该方法的批内与批间的CV均不高于10%;检测低限可达0.05mIU/ml;检测国家标准物质的相对偏差不超过10%;在1.50~155.00mIU/ml内,线性相关系数可达0.999 9;检测国家参考品能达到检定要求;检测标化的血清盘结果符合率为100%;与梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)平行比对试验,总符合率为99.56%,Kappa指数为0.990 6。结论该方法精密度好、灵敏度高、准确性好、线性范围宽,临床符合率高,能满足临床检测需要。

时间分辨荧光免疫分析法间接测定雌二醇

以氯磺酰基噻吩甲酰三氟丙酮 ( CTTA)为铕 ( Eu)的螯合剂 ,羊抗鼠 ( SAM)的 Ig G为二抗 ,用 SAM- Ig G- CTTA- Eu作标记二抗 ,建立了以竞争抑制为基础的时间分辨荧光免疫分析测定游离雌二醇 ( E2 )的新方法。同均相方法相比灵敏度有很大提高 ,测定雌二醇 ( E2 )的线性范围为 2 .5～ 2 0 0 pg/m L,检测限为 2 .5 pg/m L。这一方法可望用于 E2

时间分辨荧光免疫法检测环境中四溴双酚A衍生物(TBBPA DHEE)

本研究利用前期制备的四溴双酚A双(2-羟基乙基)醚(TBBPA DHEE)的多克隆抗体,构建了一种高灵敏的时间分辨荧光免疫分析法,用于检测环境中的四溴双酚A衍生物TBBPA DHEE.为提高分析方法的灵敏度,本研究对反应体系中有机溶剂(甲醇)、离子强度及缓冲体系p H等参数进行了优化.在最适条件下,本方法的最低检测限(LOD,基于F/F_0=90%)与IC_(50)分别为0.27 ng·m L^(-1)及4.3 ng·m L^(-1).该方法具有较高的准确度(水样加标回收率为96%—120%;土样及生物加标回收率为75%—90%).利用该方法对江苏省苏州某地区的环境样品进行了调查:在采集的56个样本中,13个样本检出了这种污染物.检出浓度为:水样0.5—2.7 ng·m L^(-1)、土样0.6—1.6 ng·g^(-1),干重、生物样2.9—4.6 ng·g^(-1),湿重.本研究为首次针对环境中TBBPA DHEE污染状况的系统性分析.

时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎血清标志物的分析方法性能验证

目的建立时间分辨荧光免疫检测法的方法学性能验证方案和试验方法。方法采用新波ANYTEST2000时间分辨荧光免疫分析仪和雅培AxSYM免疫发光分析仪测定乙型肝炎病毒血清标志物(HBV-M)各项目,分析前者的检测精密度、准确度、交叉污染率、灵敏度、测量范围、临床可报告范围、生物参考区间及抗干扰性能,分析两者检测结果间的相关性。结果 ANYTEST2000时间分辨荧光免疫分析仪检测HBV-M各项目的精密度、准确度、交叉污染率、灵敏度、测量范围、临床可报告范围、生物参考区间均符合国际公认质量要求。血清中一定浓度的三酰甘油、总胆红素或血红蛋白对部分HBV-M项目产生不同程度的干扰。ANYTEST2000与AxSYM检测HBV-M各项目结果间差异无统计学意义(P>0.05),且具有良好的相关性。结论 ANYTEST2000分析仪测定HBV-M的主要分析性能验证结果与厂商规定的分析性能基本一致。本研究所建立的分析仪性能验证方案和方法有助于提高仪器的检测质量。

固相时间分辨荧光免疫标记技术研究

通过固相时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂 4 ,7 二氯磺基苯 1,10菲罗啉 2 ,9 二羧酸标记抗 乙型肝炎表面抗体 (HBsAb)IgG实验 ,对于BCPDA标记蛋白质的方法进行了研究。结果表明 :BCPDA在相对温和条件下能与蛋白质反应 ,反应后蛋白质的相对生物活性高于 78% ,标记比为 2 3～ 5 5 ,蛋白回收率达6 0 %以上。在一定条件下与铕离子形成稳定的BCPDA Eu3 + (HBsAb)IgG标记物。利用自建的分析方法 ,测定了标记过程的有关参数。并对标记物的某些光学特性进行了研究。

TgAb时间分辨荧光免疫分析间接测定法的建立及临床应用

目的建立甲状腺球蛋白抗体(TgAb)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)间接检测法。方法用Tg抗原包板,用铕(Eu3+)标记兔抗人IgG做标记物,间接法TRFIA检测人血清中的TgAb。结果 TgAb-TRFIA的灵敏度为1.0 IU/ml;批内变异系数(CV)为3.1%～3.6%,批间CV为3.3%～3.6%;平均回收率为101.6%;热稳定性好;与电化学发光分析技术(ECLIA)比对,相关系数达0.8945;与临床结果高度相关。结论本法建立的TgAb-TRFIA是一个高灵敏和可靠的检测,有助于甲状腺疾病的临床诊断。