双歧杆菌DNA对巨噬细胞MAPK和PKC以及NF-kB的影响(英文)

目的以信号分子MAPK家系、PKC家族和NF-kB为线索探索青春型双歧杆菌的DNA激活巨噬细胞的途径。方法以激光共聚焦显微镜定量测定小鼠腹腔巨噬细胞ERK1/2、JNK、p38、PKCα、PKCβI、PKCβⅡ、PKCγ、PKCε和PKCζ的含量。以细胞免疫化学方法检测巨噬细胞NF-kB的阳性细胞密度。结果双歧杆菌DNA注射组小鼠腹腔巨噬细胞ERK1/2、PKCα和PKCβⅡ的平均荧光强度明显高于对照组(P<0.01),而JNK、p38、PKCβI、PKCγ、PKCε和PKCζ的平均荧光强度在两组间则差异无显著性(P>0.05)。双歧杆菌DNA注射组巨噬细胞NF-kB的阳性细胞密度显著高于对照组(P<0.01)。结论青春型双歧杆菌的DNA可通过活化ERK1/2、PKCα、PKCβⅡ和NF-kB来激活巨噬细胞。

双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞分泌和杀瘤功能的影响

[目的]探讨双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用。[方法]纯化提取双歧杆菌基因组DNA ,并鉴定DNA制品CpG基序甲基化程度。收集双歧杆菌DNA(10μg/ml)体外诱导培养24h的小鼠腹腔巨噬细胞培养上清 ,采用ELISA法检测培养上清中IL 1β、IL 6的含量 ,用Griess试剂检测其NO的含量 ;采用MTT间接法观察了双歧杆菌DNA诱导的巨噬细胞体外杀伤活性的变化。[结果]实验组(双歧杆菌DNA组)巨噬细胞产生IL 1β、IL 6及NO的水平分别为(270.12±31.51)pg/ml,(578.81±47.30)pg/ml和(11.12±1.01)μmol/L,其巨噬细胞杀伤活性为(31.02±1.91)% ;对照组(PBS组)分别为(138.12±9.24)pg/ml、(78.80±10.21)pg/ml、(2.14±0.82)μmol/L和(18.69±1.70) % ,两组间各项指标比较均有显著性差异(均P<0.01)。[结论]双歧杆菌DNA能激活巨噬细胞 ,可增强巨噬细胞IL 1β、IL

双歧杆菌DNA对小鼠巨噬细胞中PKC和NF-κB的影响

目的:探讨青春型双歧杆菌的DNA对巨噬细胞中6种PKC和NF-κB的影响。方法:通过激光共聚焦显微镜观察小鼠腹腔巨噬细胞中PKCα、PKCβI、PKCβII、PKCγ、PKCε和PKCζ的荧光强度,以免疫细胞化学染色法检测巨噬细胞中NF-κB+细胞的密度。结果:双歧杆菌DNA注射组小鼠腹腔巨噬细胞中,PKCα和PKCβII的平均荧光强度明显高于对照组(P<0.01);而PKCβI、PKCγ、PKCε和PKCζ的平均荧光强度在两组间则无统计学意义(P>0.05)。双歧杆菌DNA注射组巨噬细胞中,NF-κB+细胞的密度显著高于对照组(P<0.01)。结论:青春型双歧杆菌的DNA可通过活化PKCα、PKCβII和NF-κB来激活巨噬细胞。

双歧杆菌DNA对小鼠肠上皮内淋巴细胞产生γ干扰素和白介素2作用的研究

目的:研究双歧杆菌DNA对小鼠肠上皮内淋巴细胞(iIEL)γ干扰素(IFN-γ)和白介素2(IL-2)产生水平的影响,探讨其对小鼠iIEL免疫激活作用。方法:提取双歧杆菌DNA,肌肉注射免疫小鼠,提取小鼠iIEL,以IFNγ和IL-2作为检测指标,测定其变化。结果:DNA免疫小鼠产生IFN-γ和IL-2的水平与对照组相比明显提高(P<0.01)。结论:双歧杆菌DNA明显提高小鼠iIEL产生IFN-γ和IL-2的能力。

双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞表面分子表达及分泌功能的影响

目的 探讨双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞表面分子表达及分泌功能的影响。方法 纯化提取双歧杆菌基因组DNA ,并鉴定DNA制品CpG基序甲基化程度。用双歧杆菌DNA (10 μg ml)体外诱导培养小鼠腹腔巨噬细胞 ,流式细胞仪检测小鼠腹腔巨噬细胞MHCⅡ类分子、共刺激分子和粘附分子的表达 ,ELISA法检测培养上清中细胞因子的含量。结果 双歧杆菌DNA组巨噬细胞表达Ia、CD4 0、CD86和CD5 4分子的平均荧光强度分别为 4 3 176± 5 5 6、4 7 6 8± 4 6 5、15 6 4 9± 2 0 6 8和 6 9 37± 4 10高于PBS对照组 15 0 2± 2 31、15 72± 3 2 1、88 5 1± 6 38和 4 8 81± 3 2 1;双歧杆菌DNA组巨噬细胞产生IL 1β的水平为 2 70 12± 31 5 1pg ml高于PBS对照组 138 12± 9 2 4 pg ml;两组之间的差别均具有显著性的意义 (均P <0 0 5 )。结论 双歧杆菌DNA能增强小鼠腹腔巨噬细胞共刺激分子、MHCⅡ类分子和粘附分子的表达 ,增强巨噬细胞IL 1的分泌水平。

双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞的激活效应

目的 探讨双歧杆菌DNA对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用 ,为微生物DNA制剂开发应用于临床提供科学依据。方法 纯化提取双歧杆菌基因组DNA ,并鉴定DNA制品CpG基序甲基化程度。收集双歧杆菌DNA( 10 μg/ml)体外诱导培养 2 4h的小鼠腹腔巨噬细胞培养上清 ,采用ELISA法检测培养上清中TNF α、IL 12的含量 ,用Griess试剂检测其NO的含量 ;FACS检测巨噬细胞的吞噬功能。结果 实验组 (双歧杆菌DNA组 )巨噬细胞产生TNF α、IL 12及NO的水平分别为 12 0 .12± 13 .2 1pg/ml、4 0 5 .5 1± 5 1.80 pg/ml和 11.12± 1.0 1μmol/L ,巨噬细胞吞噬功能的平均荧光强度为 2 8.12± 3 .5 8;对照组 (PBS组 )分别为 5 .82± 1.5 4 pg/ml、10 .17± 1.2 7pg/ml、2 .14± 0 .2 8μmol/L和 9.3 2± 1.0 1,两组间各项指标比较均有显著性差异 (均P <0 .0 1)。结论 双歧杆菌DNA能激活巨噬细胞 ,可增强巨噬细胞TNF α、IL 12及NO产生的水平及吞噬功能。

含有非甲基化CpG的双歧杆菌DNA对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响

目的:探讨双歧杆菌DNA对小鼠骨髓树突状细胞(BMDC)成熟的影响.方法:纯化提取双歧杆菌DNA,并鉴定DNA制品CpG基序甲基化程度;FACS检测BMDC的吞噬功能和表面标志分子,ELISA法检测BMDC分泌细胞因子水平,3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞增殖能力.结果:双歧杆菌DNA诱导24 h后BMDC高表达Ia,CD40,CD86和CD11 c分子,明显增加IL-6,IL-12(p40),TNF-α的分泌,显著增强同种异体和自体T细胞增殖的能力.结论:双歧杆菌DNA能够促进BMDC成熟,增强BMDC的抗原提呈能力.

双歧杆菌DNA对巨噬细胞MAPK的影响

目的探索青春型双歧杆菌的DNA对巨噬细胞丝裂素活化的蛋白激酶(MAPK)活性的影响。方法以激光共聚焦显微镜定量测定小鼠腹腔巨噬细胞MAPK家系中ERK1/2、JNK和p38的含量。结果双歧杆菌DNA注射组小鼠腹腔巨噬细胞ERK1/2的平均荧光强度明显高于对照组(P<0.01),而JNK和p38的平均荧光强度在2组间则差异无显著性(P>0.05)。结论青春型双歧杆菌的DNA能提高巨噬细胞ERK1/2的活性,这可能是其激活巨噬细胞的途径之一。

双歧杆菌DNA对巨噬细胞PKC的影响

目的探索青春型双歧杆菌的DNA对巨噬细胞PKC家族的影响。方法以激光共聚焦显微镜定量测定小鼠腹腔巨噬细胞PKCα、PKCβⅠ、PKCβⅡ、PKCγ、PKCε和PKCζ的含量。结果双歧杆菌DNA注射组小鼠腹腔巨噬细胞PKCα和PKCβⅡ的平均荧光强度明显高于对照组(P<0.01),而PKCβⅠ、PKCγ、PKCε和PKCζ的平均荧光强度在2组间则差异无显著性(P>0.05)。结论青春型双歧杆菌的DNA能活化巨噬细胞的PKCα和PKCβⅡ。

双歧杆菌基因组DNA提取几种方法的比较

双歧杆菌的保健功能现已为人们广泛认可,随着双歧制品微生态制剂普及,人们对相关产品内在质量投诉也相应增多,因此快速鉴定产品中双歧杆菌是当务之急,由于双歧杆菌目前检测缺乏有效的选择培养基和鉴别培养基,依据其形态和生理特性进行鉴别程序复杂,结果不稳定,因此双歧杆菌的分子生物学检测一直是近年研究热点,目前报道较多的有PCR法,RAPD法,RFLP法,而在PCR和RAPD扩增中,都对DNA纯度有较高要求,特别是干扰PCR扩增的多糖和蛋白质要清除掉,由于双歧杆菌细胞壁有类似真菌的特性,因此其DNA提取不同于革兰氏阴性菌(溶菌酶-煮沸法),据文献报到目前双歧杆菌DNA提取有几种方法,溶菌酶-SDS-醋酸钾法[1],溶菌酶-SDS-酚/氯仿法[2],溶菌酶-煮沸法,改良氯化苄法[3].本实验对该四种方法做了比较,认为醋酸钾法和氯化苄法提取DNA效果较好.

双歧杆菌、大肠杆菌总DNA对小鼠免疫功能影响的对比研究

目的 :提取双歧杆菌、大肠杆菌DNA ,与iIEL细胞共同孵育 ,观察它们对IEL细胞的激活作用 ,并用DNA免疫小鼠 ,观察小鼠免疫功能的变化 ,探讨双歧杆菌、大肠杆菌DNA对免疫功能的影响 ,并作对比研究。方法 :以自然杀伤细胞 (NK)活性 ,白细胞介素 2 (IL 2 )产生能力为指标 ,测定小鼠上述各项指标变化。结果 :小鼠以上两项指标与对照组相比有明显提高(P <0 .0 5 )。双歧杆菌DNA提高小鼠NK活性与IL 2水平程度大于大肠杆菌DNA的作用 (P <0 .0 1)。结论 :表明双歧杆菌DNA可快速激活NK活性 ,提高体内IL 2水平。

双歧杆菌DNA对巨噬细胞PKC和NF-kB的影响

目的探索青春型双歧杆菌的 DNA 对巨噬细胞 PKC 家族和 NF-kB 的影响。方法以激光共聚焦显微镜定量测定小鼠腹腔巨噬细胞 PKC_α、PKC_βⅠ、PKC_βⅡ、PKC_γ、PKC_ε和 PKC_ζ的含量,以细胞免疫化学方法检测巨噬细胞 NF-kB 的阳性细胞密度。结果双歧杆菌 DNA 注射组小鼠腹腔巨噬细胞 PKC_α和 PKC_βⅡ的平均荧光强度明显高于对照组(P<0.01),而 PKC_βⅠ、PKC_γ、PKC_ε和 PKC_ζ的平均荧光强度在两组间则无明显差异(P>0.05)。双歧杆菌 DNA 注射组巨噬细胞 NF-kB 的阳性细胞密度显著高于对照组(P<0.01)。结论青春型双歧杆菌的 DNA 可通过活化 PKC_α、PKC_βⅡ和 NF-kB 来激活巨噬细胞。

双歧杆菌的DNA对小鼠腹腔巨噬细胞游离Ca^(2+)离子水平的影响

目的从信号转导途径探索青春型双歧杆菌的DNA激活巨噬细胞的机制。方法用钙离子荧光指示剂F luo-3/AM负载小鼠腹腔巨噬细胞,以激光共焦镜显微镜观察不同浓度的DNA对巨噬细胞内游离C a2+离子的浓度变化。结果所用刺激浓度的DNA均能显著升高巨噬细胞内游离C a2+离子的浓度,并且随着刺激物浓度的逐增,巨噬细胞内游离C a2+离子的上升速度以及达到峰值的荧光值也逐渐升高(P<0.01)。结论青春型双歧杆菌的DNA能提高巨噬细胞内游离C a2+离子的浓度,并呈剂量依赖性。