藜麦4,5-多巴双氧化酶基因(CqDODA)家族的全基因组鉴定与分析

基于藜麦高质量基因组数据,鉴定了18个CqDODA基因家族成员,并对其进行了系统分析。结果表明:大多数CqDODA蛋白理化性质差异较小;根据CqDODA基因的亲缘关系可分为三支,分支1中的8个CqDODA基因在甜菜素合成中具有重要的作用;分支1的CqDODA基因结构差异较小,并且蛋白高度保守;CqDODA基因在逆境胁迫或者激素处理下可能存在响应。本研究结果可为深入研究CqDODA基因在藜麦甜菜素合成中的作用提供理论依据。

对羟基苯基丙酮酸双氧化酶抑制剂筛选方法研究进展

对羟基苯基丙酮酸双氧化酶(HPPD)是植物体正常生长所必需的质体醌和生育酚生物合成路径中的关键酶,已成为当前最重要的除草剂作用靶标之一。发展快速、可靠的HPPD抑制剂筛选方法对研究小分子化合物与HPPD之间的相互作用,以及开展基于靶酶结构的新型HPPD抑制剂设计均具有重要意义。结合HPPD的结构和功能,文章从生物分析的角度分别就高效液相色谱、同位素标记、偶联法、电化学及简易筛选模型等方法在HPPD抑制剂筛选中的运用进行了总结,并对发展HPPD抑制剂的高通量筛选方法进行了展望。

对羟苯基丙酮酸双氧化酶抑制剂的研究进展

本文对对羟苯基丙酮酸双氧化酶抑制剂(HPPD)的发现、作用机制、结构与活性、合成方法及主要新品种加以概述。

对羟基苯基丙酮酸酯双氧化酶抑制剂的研究进展

简要的介绍了新型除草剂对羟基丙酮酸酯双氧化酶（ＨＰＰＤ）抑制剂的研究进展，文中涉及到此类除草剂作用的特点、化学结构、生物活性及合成方法等。

以对羟基苯基丙酮酸双氧化酶为作用靶标的除草剂研究进展

本文对近年来新发现的除草剂靶标HPPD的研究进展情况作了简单的概述,重点总结了有关HPPD的结构生物学以及除草剂的作用机理、构效关系。

双氧化酶2在5-羟色胺加重的小鼠结肠炎模型中的表达及作用

目的探讨5-羟色胺(5-HT)对双氧化酶2(Duox2)在小鼠结肠组织中的表达情况及其在炎症中的意义。方法选取6~8周龄的健康清洁级C57BL/6J(B6)雄性小鼠,随机分为5组(n=8):对照组自由饮用无菌蒸馏水;葡聚糖硫酸钠(DSS)(1.0%、2.5%)组自由饮用相应浓度的DSS溶液;5-HT组采用直肠灌药方式(1.0 mg/kg)给药,每3 d 1次;DSS+5-HT组同时给予1.0%DSS和5-HT。于造模第6天处死小鼠取结肠组织。通过结肠长度、疾病活动指数(DAI)评分和HE染色等方法评估肠道炎症程度,采用实时定量PCR(RT-PCR)检测小鼠结肠组织中白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α和Duox2 mRNA表达水平,应用免疫组化检测结肠组织中Duox2蛋白的表达情况。结果对照组和5-HT组小鼠无肠炎表现;DSS(1.0%)组小鼠表现为轻度肠炎;DSS+5-HT组和DSS(2.5%)组有严重急性肠炎表现。IL-1β、IL-6和TNF-α等表达量随炎症程度加重而增加。Duox2 mRNA在5-HT组和DSS(1.0%)组表达增高(均P<0.05),在DSS+5-HT和DSS(2.5%)组表达下调(均P<0.05)。免疫组化结果显示Duox2蛋白主要表达于小鼠结肠上皮刷状缘及上皮细胞胞质中,与mRNA表达一致。结论 5-HT可能通过影响Duox2的表达在小鼠结肠炎的发生发展中发挥作用。

TUDCA缓解小鼠肠炎对内质网应激与双氧化酶2表达的研究

目的探讨特异性内质网应激抑制剂牛磺熊去氧胆酸(Tauroursodeoxycholate,TUDCA)缓解DSS诱导的小鼠肠炎对内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)蛋白与肠黏膜过氧化氢产生酶双氧化酶2(dual oxidase2,Duox2)表达的研究。方法 7周C57BL/6J雄性小鼠适应喂养1周后随机分为对照组、炎症组、干预组。炎症组和干预组饮用2.5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)溶液诱导小鼠肠炎,干预组再以500 mg/kg的TUDCA灌胃。8 d后处死小鼠,收集结肠作HE和免疫组化染色,Western blotting检测Duox2及ERS相关蛋白Grp78、Atf6、P-Ire1α/Ire1α、Ire1β、P-Perk/Perk的表达。结果 TUDCA明显减轻DSS诱导的小鼠肠炎。Western blotting结果显示炎症组Grp78、P-Perk/Perk蛋白及Duox2表达均升高,干预组这三种蛋白表达恢复到对照组水平,其余ERS相关蛋白表达无变化。免疫组化结果显示Grp78和Duox2三组表达水平与Western blotting结果相一致。结论 TUDCA缓解小鼠肠炎可能与抑制内质网Grp78-Perk通路有关,该通路与Duox2表达相互影响。

高等植物赤霉素3-β-双氧化酶基因研究进展

赤霉素3-β-双氧化酶(GA3ox)是赤霉素(GA)生物合成过程中的关键酶之一,直接作用于活性GA的生成,在植物的生长发育过程中发挥着重要作用。GA3ox已在拟南芥、烟草、高粱和杨树等多种植物中得到克隆,在植物个体的不同生长阶段、不同组织中GA3ox的表达量均存在着差异,这主要是由物种内在的遗传因素所决定的,同时环境因子和外源激素处理对GA3ox表达也有着显著的影响。通过对基因突变体的研究,揭示出GA3ox突变导致GA的生物合成受阻而间接影响植物的生长,导致植物茎秆、花、种子、果、根等部位性状的改变,包括植株矮化、结籽困难等。过量表达GA3ox基因促进GA的生成,诱导细胞的分裂与分化,促进根尖的径向伸长、种子萌发等。主要从GA3ox的基因克隆与表达模式及其功能效应两方面综述了其在高等植物中研究进展,通过对GA3ox在不同植物中的相关功能研究,探讨其在植物生长发育过程中的具体作用,以期为了解GA3ox对植物生长发育的调控机制提供参考,也有助于在生产实践中更好地利用GA3ox开展基因工程研究,定向培育植物新品种。

对羟基苯基丙酮酸双氧化酶及其抑制剂的研究进展

对羟基苯基丙酮酸双氧化酶(4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase,HPPD)是一种亚铁非血红素酶,在酪氨酸分解代谢中起到重要作用.本文综述了除草剂的新靶标HPPD及相关抑制剂的结构、活性以及作用机制.综述了HPPD作用机理的相关研究,并对该领域的发展方向做了展望.

对羟基苯基丙酮酸双氧化酶作用靶标的研究进展

对除草剂靶标对羟基苯基丙酮酸双氧化酶(HPPD)的研究进展情况作了简要的概述,总结了植物体内HPPD的作用机制和HPPD抑制剂的作用机制,重点以NTBC为例综述了NTBC与对羟基苯基丙酮酸双氧化酶的作用研究来阐明抑制剂对HPPD酶的抑制机理.研究表明抑制剂NTBC与靶标HPPD的强亲和力主要通过两个氧原子与Fe″的二齿配位和蛋白质口袋中芳环间的π-堆积力作用,其中芳环间的π-堆积力起主要作用.

双氧化酶成熟因子2基因检测在肺癌患者淋巴结转移及预后预测中的价值研究

目的:研究双氧化酶成熟因子2(DUOXA2)基因在肺癌患者肿瘤组织中的表达,以及其与肺癌患者临床病理特征和预后的相关性。方法:选取90例接受手术治疗的肺癌患者,通过定量PCR检测肺癌肿瘤组织和癌旁正常组织中DUOXA2 mRNA表达,通过免疫印迹法和免疫组织化学法检测DUOXA2蛋白表达,通过多因素回归分析法分析肺癌患者预后相关因素。结果:DUOXA2 mRNA和蛋白在90例肺癌患者肿瘤组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。DUOXA2蛋白在肺癌肿瘤组织中的表达水平与肺癌患者年龄、性别、病理类型、肿瘤大小和TNM分期无关(均P>0.05),而与淋巴结是否转移有关(P<0.05);DUOXA2 mRNA和蛋白在30例淋巴结转移肺癌患者肿瘤组织中的表达水平显著高于其在60例淋巴结未转移肺癌患者肿瘤组织中的表达水平。多因素回归分析结果显示:DUOXA2在肺癌患者肿瘤组织中的表达水平是影响肺癌患者预后的独立危险因素(P=0.039)。结论:DUOXA2基因在肺癌患者肿瘤组织中表达升高,其表达水平与肺癌患者是否出现淋巴结转移有关,是影响肺癌患者预后的独立危险因素。

有甲状腺大的先天性甲状腺功能减退症患儿双氧化酶成熟因子1基因突变研究

目的对山东地区有甲状腺大的先天性甲状腺功能减退症（congenital hypothyroidism，CH）患儿双氧化酶成熟因子1（DUOXA1）基因进行突变筛查，阐明DUOXA1基因突变类型及特点，为CH的基因诊断及治疗提供理论依据。方法通过山东省新生儿筛查系统选取山东省52例有甲状腺大的CH患儿及100例健康对照者，抽取外周静脉血，提取白细胞全基因组DNA，采用8对序列特异性引物，运用PCR扩增与直接测序法对DUOXA1基因的全部编码序列（codingsequence，CDS）进行突变筛查。测序结果与DUOXA1基因的美国国立生物技术信息中心参考序列：NG_033105．1进行比对，并对发现的单核苷酸多态性（single nucleotide polymor—phisms，SNP）位点的基因频率进行，检验。结果在52例有甲状腺大的CH患儿及100例健康对照CDS区序列中均未发现突变，但在9例患儿及11例健康对照中的第7外显子发现1个SNP位点（rs75981505，c．398G〉T）为错义突变，导致密码子由CGC突变为CTC，相应133位氨基酸由精氨酸变为组氨酸（p．Arg133His）。2组SNP基因频率比较，差异无统计学意义（17．3％比11．0％,x^2=1．24，P〉0．05）。结论DUOXA1基因在山东地区有甲状腺大CH患儿突变率低，可能不是该地区伴甲状腺大CH患儿的主要病因。

先天性甲状腺功能减退症患儿双氧化酶1基因突变研究

目的研究山东地区先天性甲状腺功能减退症(CH)伴甲状腺肿大患儿双氧化酶1(DUOX1)基因突变类型及特点,为CH的诊断及基因治疗提供理论依据。方法选取43例经新生儿筛查确诊为CH伴甲状腺肿大患儿及100例正常对照新生儿,提取CH患儿及正常新生儿外周血基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增及一代测序法(Sanger测序法),对DUOX1基因全部外显子进行基因突变检测,结合测序结果及生物信息学数据,分析DUOX1基因是否存在突变,并对发现的单核苷酸多态性(SNP)位点的基因频率进行χ2检验。结果在43例CH伴甲状腺肿大患儿及100例正常对照新生儿中,均未发现DUOX1基因突变。但在外显子区发现了2个SNP位点(rs16939752,c.3076T>C;rs1706804,c.3228A>G),前者为错义突变(Cys→Arg),后者为同义突变(Thr→Thr);内含子区发现了1个SNP位点(rs2020216,IVS8+129C>T)。经统计,本文实验组患儿与正常对照组新生儿SNP的基因频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论山东地区CH伴甲状腺肿大患儿中,DUOX1基因突变率低,可能不是该地区CH伴甲状腺肿大的主要病因。

双孢蘑菇多酚氧化酶交联作用对酪蛋白乳化性及其稳定性的影响

利用双孢蘑菇多酚氧化酶(PPO)对酪蛋白进行交联,考察交联后酪蛋白乳化性和乳化稳定性,并采用SDS-PAGE电泳检测交联物的形成情况。结果表明:当PPO酶比活力为400U/mL,25℃反应4h时,交联后的酪蛋白乳化性和乳化稳定性分别为18.3m2/g和19.8min,较未交联的酪蛋白乳化性和乳化稳定性分别提高了17.3%和37.5%。交联后酪蛋白的乳化性和乳化稳定性得到显著提高,并且与形成的聚合物含量有着密切的关系。

双功能氧化酶2在尖锐湿疣患者皮损中的表达及与HPV型别关系的研究

目的:检测尖锐湿疣(CA)患者皮损中是否表达双功能氧化酶2(Duox2),并分析其与HPV6/11,16/18型别之间的关系,以初步探讨其与CA发病之间的可能联系。方法:用PCR-荧光探针法检测40例CA患者皮损及对照组(20例,正常皮肤组织)中Duox2的mRNA表达水平并比较,聚合酶链反应(PCR)检测及鉴定CA组织中人乳头瘤病毒(HPV)感染类型:HPV6/11、HPV16/18。结果:CA组患者皮损中Duox2 mRNA表达水平明显高于对照组(t=-0.24,P=0.007)。40例患者中仅HPV6/11阳性23例,仅HPV 16/18阳性8例,HPV6/11DNA阳性组Duox2 mRNA表达水平明显低于HPV16/18DNA阳性组(t=4.92,P=0.001)。结论:CA患者中,HPV病毒感染特别是HPV16、18病毒会引起Duox2的水平增高。

基于普鲁士蓝／双胺氧化酶修饰的生物胺传感器

通过壳聚糖及戊二醛将双胺氧化酶固定在普鲁士蓝修饰的玻碳电极表面,制备了生物胺传感器.考察了该传感器的电化学特性并优化了实验条件.结果表明,在优化条件下所制备的传感器的电流响应与组胺浓度在0.33μmol/L^3.3 mmol/L(3.7×10-2~3.7×102mg/L)范围内相关;检测限(S/N=3)为0.05μmol/L(6μg/L).该传感器具有响应范围宽、灵敏度高、选择性强、简便快速的特点.

RT-PCR检测人膀胱上皮细胞双功能氧化酶表达

目的:检测人膀胱上皮细胞(T24细胞)是否表达双功能氧化酶(Duox-1、Duox-2),并观察炎症细胞因子及佛波酯(PMA)对基因表达水平的影响。方法:体外培养人膀胱上皮(T24)细胞,经佛波酯(PMA)、炎症细胞因子(TNF-α及IFN-γ)刺激后提取细胞总RNA,采用半定量RT-PCR方法观察细胞Duox-1,Duox-2 mRNA表达水平。结果:Duox-1,Duox-2 mRNA在T24细胞中组成性表达,在佛波酯(PMA)、TNF-α及IFN-γ作用下,Duox-2基因表达水平明显增加,而Duox-1基因表达水平无明显变化。结论:双功能氧化酶Duox-1和Duox-2基因在膀胱上皮细胞表达,并受炎症刺激的影响,其在膀胱上皮细胞中的生理功能值得深入研究。

有效防除麦田抗性杂草荠菜的新型除草剂——双唑草酮

双唑草酮为中国创制的新型对羟基苯基丙酮酸双氧化酶(HPPD)抑制剂类除草剂,已于2018年取得中国农药登记。为了测定其对麦田抗性杂草荠菜的除草效果,共采集了36个荠菜种群,其中1个敏感种群采自未施用过除草剂的路边,其他35个疑似抗性种群均采自于中国苯磺隆使用历史超过20年的冬小麦田。在温室中采用整株盆栽法测定了荠菜种群对双唑草酮、苯磺隆、双氟磺草胺、甲基二磺隆、唑草酮和2甲4氯的抗性水平。结果表明,有28个种群对苯磺隆产生了抗性,其中种群K16009、K17005、15053和17003表现出高水平抗性。这4个种群对其他除草剂的交互抗性检测试验表明:种群K16009、K17005和15053对双氟磺草胺和甲基二磺隆表现出高水平交互抗性,其抗性指数范围为25-321,其GR50值远高于供试药剂登记的田间推荐剂量;而上述4个抗性种群对双唑草酮、唑草酮和2甲4氯均较为敏感,其GR50值均低于供试药剂登记的田间推荐剂量。唑草酮和2甲4氯也可用于小麦田抗性荠菜种群的防治,但该类药剂对施药时间要求较为严格。本研究结果表明,双唑草酮可有效防除对乙酰羟基酸合成酶(AHAS)类除草剂已经产生抗性的荠菜。

HPPD抑制剂的研究进展

对新型除草剂对羟苯基丙酮酸双氧化酶 (HPPD)抑制剂的发现过程、作用机制、结构特征。

新型3-羟亚甲基吡咯烷-2,4-二酮衍生物的合成与除草活性研究

为了进一步研究3-羟亚甲基吡咯烷-2,4-二酮类化合物构效关系,以期发现高活性化合物,利用19种酮酸酯与氨基酸酯合成了19个未见文献报道的新型3-羟亚甲基吡咯烷-2,4-二酮衍生物,其结构均经过1HNMR,IR和元素分析确证.初步生物活性测试结果表明,其生长抑制活性高于对照药HPPD抑制剂磺草酮.与已报道的高活性化合物相比,对油菜的抑制率明显得到提高,但对稗草的生长抑制没有明显的改善.