亲和双水相胶束系统的相行为及其应用

在疏水改性聚氧乙烯(HM-EO)形成的一元双水相胶束系统(ATPMS)中引入带亲和配基的小分子表面活性剂Triton X-114-IDA-Cu(Ⅱ),构成亲和作用主导的二元ATPMS.考察了温度、pH、盐浓度及种类对新系统液液相平衡的影响,并将该系统用于模型蛋白3',5'-二磷酸核苷酸酶(YND)的萃取.结果表明:Triton X-114-IDA-Cu(Ⅱ)与HM-EO形成的混合胶束簇集体在较低温度(4℃)下即可自发分相;温度升高可以增大系统两相区域;降低体系pH有利于系统分相;添加无机盐促使混合胶束网络的形成及相分离更加容易,阳离子影响次序为:K^+>Na^+,阴离子为:SO_4^(2-)>Cl^->Br^->I^-.最后,通过对YND的萃取分离,YND被成功萃取进入胶束富集相,证明了亲和ATPMS在富组氨酸蛋白分离中的可行性,为该体系在分离工艺中的应用提供相应的基础依据.

3',5'-二磷酸核苷酸酶在亲和双水相胶束系统中分配行为研究

以高分子表面活性剂HM-EO为主成相剂,金属螯合表面活性剂Triton X-114-IDA-Cu(Ⅱ)(TX-Cu(Ⅱ))为辅成相剂,构建新型亲和双水相胶束系统(ATPMS)以提高目标产物的萃取选择性,并考察重组蛋白3',5'-二磷酸核苷酸酶(YND)在系统中分配行为。结果表明,系统中不含亲和配基时YND主要分配于胶束缺失相;随着亲和配基含量的增加,YND与TX-Cu(Ⅱ)亲和结合而逐渐分配到胶束富集相并且在系统中显示出优异的稳定性;调节溶液p H能够影响YND亲和分配,最适萃取条件为pH 9.0;增大无机盐浓度,导致更多杂蛋白分配到胶束缺失相,然而对YND分配影响较小。在2.5%HM-EO、0.125%TX-Cu(Ⅱ)、p H 9.0、50 mmol/L Na Cl条件下,实验获得65.8%的酶活回收率。因此亲和ATPMS可以有效用于对富组氨酸蛋白YND的分离纯化,为该体系在重组蛋白的分离纯化试验提供相应的基础依据。

正离子型疏水改性聚氧乙烯单成相组分双水相系统的相行为

对正离子型疏水改性聚氧乙烯(HM-EO)单成相组分双水相系统的相行为进行了考察,并分析其电荷特性.HM-EO在水溶液中呈现两亲性,可以形成胶束,进而形成带电的胶束簇集体.通过改变溶液的pH值、盐浓度及添加带相反电荷的表面活性剂SDS,可改变胶束簇集体的带电状态,从而影响系统的相行为.增大pH值,有利于系统的分相.盐的添加也可以增大双水相两相区域,正离子影响次序为K+>Na+,负离子次序为SO42->F->Cl->Br->I-.进一步考察了HM-EO和SDS之间的相互作用,结果表明SDS能与HM-EO形成混合胶束簇集体,改变HM-EO双水相系统的带电特性.