双水相萃取系统用于禽卵黄抗体提纯的研究

以鸡法氏囊油乳剂抗原免疫健康鸡群，收集高免蛋黄，利用聚乙二醇双水相尊取系统（PEG6000）从印黄中快速分离纯化特异性抗体。采用琼脂免疫扩散法检测其平均效价，醋酸纤维膜电泳法测其纯度，Coomassil亮蓝法测蛋白浓度。结果表明：本法具有IgG浓度高，操作简便、快速、经济，适于批量化生产的优点。

聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取猪胰蛋白酶

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对猪胰蛋白酶分离进行了研究。通过综合考察酶分配系数、蛋白质分配系数、相比和回收率,探讨了PEG400质量分数、(NH4)2SO4质量分数、NaCl质量分数以及pH值对胰蛋白酶萃取的影响,并通过正交实验进一步优化实验条件,结果表明(NH4)2SO4质量分数和PEG浓度对胰蛋白酶的萃取影响大,在PEG400质量分数为24%、(NH4)2SO4质量分数为21%、pH值为4.2所组成的双水相体系下,可获得酶的高分配系数8.48,提取的胰蛋白酶活力达到1780U/mL。

聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取大豆脂肪氧合酶的研究

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对大豆中脂肪氧合酶进行分离萃取研究;通过综合考察酶分配系数、相比和回收率,探讨了(NH4)2SO4、PEG2000、Na Cl浓度以及p H对脂肪氧合酶萃取的影响,并通过正交实验进一步优化实验条件,结果表明在单一因素下的最佳工艺条件为:(NH4)2SO415%(wt%)、PEG2000 13%(wt%)、Na Cl 1%(wt%)、p H5.8;正交实验优选出的最佳工艺条件为:(NH4)2SO417%(wt%)、PEG2000 13%(wt%)、p H5.2,可获得酶的分配系数最高可达9.710,萃取率为87.6%。

pH调控双水相萃取色素蛋白复合体及其分配行为研究

为发展色素蛋白复合体分离纯化新方法,探究pH调控PEG1000/柠檬酸钾双水相系统萃取分离纯化色素蛋白复合体。优化萃取条件,光谱法研究其分配行为,检测产物纯度和生物活性。结果表明,最佳萃取条件为调节pH9.0,相组成CPEG100019.0%/C柠檬酸钾20.0%,蛋白质加量3.42 mg/g,K和萃取率达到最大,分别为8.8及86.0%。响应面分析法揭示,PEG1000和柠檬酸钾质量浓度及pH对分配系数和萃取率影响显著。调节pH7.0,反萃取分配系数和反萃取率最小为0.15及86.6%。蛋白质总回收率为74.2%。pH对色素蛋白复合体分配行为具有调控作用,pH大于8.5体系,色素蛋白趋于分配上相,反之分配于下相,PEG1000/柠檬酸钾以及蛋白质加入量不影响色素蛋白复合体分配于上相。电泳表征发现,萃取(pH9.0)上相存在2个蛋白质组分,相对分子量(MW)为7.0 kD及14.0 kD。反萃取(pH7.0)使相对分子量7.0 kD蛋白质组分分配于下相,该组分为LH2β亚基,经萃取和反萃取产物生物活性稳定。pH可调控PEG1000/柠檬酸钾双水相系统萃取分离色素蛋白复合体,产物纯度高,生物活性稳定。

双水相系统纯化山楂叶中黄酮类物质的研究

应用水、乙醇和硫酸铵三者形成双水相系统,并利用黄酮在乙醇中的溶解度要大于水中的溶解度,以脱除其中一些易溶于水和在高浓度乙醇中溶解度低的物质。尝试了不同盐、不同体积比的乙醇和水、以及盐加入量对分相的影响并测定了其在不同情况下的纯化效果。发现在硫酸铵中的分相情况最好,在加入量到2.5 g时既可以达到分相完全。并测定:(1)在5 mL乙醇+5 mL水+5 g硫酸铵+0.15 g粗体物(粗体物中黄酮的百分含量为25%)的双水相中,黄酮类物质的回收率为89.2%,而黄酮百分含量提升为47.6%;(2)在4 mL乙醇+5mL水+5 g硫酸铵+0.15 g粗体物(粗体物中黄酮的百分含量为25%)的双水相中,黄酮类物质的回收率为81.9%,而黄酮含量提升为50.9%。水、乙醇和硫酸铵三者形成双水相系统应用于山楂叶中黄酮类物质的纯化在文献中少有报道,而本文应用此法可以将黄酮含量从25%提升到将近47.6%,并且回收率为89%。

PEG/磷酸盐双水相系统及BSA在其中的分配特性

以 PEG/磷酸盐双水相系统为研究对象 ,成功地制作了 PEG6,0 0 0 /磷酸盐和 PEG1 0 ,0 0 0 /磷酸盐两个双水相系统的相图 ,初步探讨了 5种不同组成的 PEG6,0 0 0 /磷酸盐双水相系统相分离过程的一般规律 .然后以BSA在 PEG6,0 0 0 /磷酸盐双水相系统两相间的分配系数及其下相分配率为目标 ,研究了双水相系统成相浓度、外加盐 Na Cl、BSA起始浓度等对