用双池培养研究颗粒细胞与内泡膜细胞的旁分泌调节作用

采用双池培养系统研究颗粒细胞（Ｇ－Ｃ）与内泡膜细胞（Ｔ－Ｃ）在甾体激素生成中的旁分泌调节作用。实验选用小母猪的卵巢组织，分离出Ｇ－Ｃ和Ｔ－Ｃ，巳分别进行单独培养（单培）或双池培养（双培），内地为Ｇ－Ｃ，外池为Ｔ－Ｃ。４８小时后用放射免疫法（ＲＩＡ）测定培养液中雌二醇（Ｅ２）、睾酮（Ｔ）及孕酮（Ｐ）含量。结果显示：（１）在单培时Ｇ－Ｃ产生极少量Ｅ２，当其与Ｔ－Ｃ双培时则分泌大量Ｅ２；Ｐ和Ｔ产量在双培时比单培时均有增加。（２）Ｔ－Ｃ在单培时产生大量Ｔ，当其与Ｇ－Ｃ双培时，在培液中可测出少量Ｔ；Ｐ和Ｅ２产量在双培时比在单培时均有明显下降。结果表明：在甾体激素生成过程中，Ｇ－Ｃ和Ｔ－Ｃ之间呈现一种旁分泌的调节作用。

应用羊膜双池系统对颗粒细胞和内泡膜细胞在甾体激素分泌中相互作用的研究

采用羊膜双池培养系统观察猪卵巢颗粒细胞（Ｇ－Ｃ）和内泡膜细胞（Ｔ－Ｃ）在甾体激素分泌中的相互作用，并与纤维膜双池相比较。分别将Ｇ－Ｃ和Ｔ－Ｃ种在羊膜两侧，内池为Ｇ－Ｃ，外池为Ｔ－Ｃ；经４８小时培养后收集内、外地培养液，测定雌二醇（Ｅ２）、孕酮（Ｐ）和睾酮（Ｔ）含量。结果表明：在羊膜双池系统中生长的Ｇ－Ｃ和Ｔ－Ｃ比纤维膜双池培养的细胞保持了更活跃的甾体激素分泌功能。外地Ｔ－Ｃ分泌的更多Ｔ透过羊膜到达内地，作为芳香化酶底物，使Ｇ－Ｃ合成更多Ｅ２（可达２４３５ｐｍｏｌ／Ｌ）；Ｇ－Ｃ的Ｐ（５２５μｍｏｌ／ｕ和Ｔ（１０．２μｍｏｌ／Ｌ）产量也高于纤维膜双池。本研究还观察了促性腺激素对羊膜双池培养Ｇ－Ｃ和Ｔ－Ｃ分泌功能的作用。羊膜双池培养模拟了在体的两种卵巢细胞在甾体激素合成和分泌过程中的相互作用，是研究Ｇ－Ｃ和Ｔ－Ｃ的旁分泌调节较理想的模型。

流式细胞计数测定抗孕激素对猪卵巢细胞孕酮受体的影响

为了研究抗孕激素调节卵巢功能的机理 ,制备了人胎盘羊膜的双池培养系统。分离猪卵巢颗粒细胞和内泡膜细胞 ,分别种在羊膜两侧。在加入或不加 RU486和ZK98.73 4时 ,两种细胞在促性腺激素刺激下共同培养。 48h后 ,应用流式细胞计数(FCM)测定两种细胞的孕酮受体 (PR)和雌激素受体 (ER) ;放射免疫法测定培养液中的孕酮 (P)和雌二醇 (E2 )浓度。结果显示 ,抗孕激素增加两种细胞的 PR含量 ,ER没有明显改变 ;颗粒细胞的 P和 E2 分泌受到抑制 ,内泡膜细胞的 P分泌也减少。提示 P调节 P本身的合成 ,这种旁分泌和自分泌作用是通过 P控制 PR上调的途径。