双淬灭TaqMan探针应用于新型冠状病毒核酸检测的初步研究

核酸检测是新型冠状病毒肺炎(COVID⁃19)诊断的金标准。目前,临床上主要采用基于TaqMan探针的荧光定量PCR(qPCR)来检测新型冠状病毒(SARS⁃CoV⁃2)的N基因和ORF1a/b序列。在实际的核酸检测中,因采样和qPCR灵敏度问题导致的假阴性结果时有发生。为了优化SARS⁃CoV⁃2的核酸检测,我们设计了含有两个淬灭基团的双淬灭TaqMan探针,与单淬灭TaqMan探针相比,双淬灭TaqMan探针的背景荧光信号更低(161±9 vs.290±18)。同时,我们以N基因质粒和假病毒作为核酸检测的模板,发现双淬灭TaqMan探针检测体系具有更好的检测精密度(CV 1.4%vs 2.3%;0.6%vs 2.1%)以及更低的检测下限。

双淬灭荧光探针在肠癌患者肠道菌群qPCR检测中的应用

目的探讨双淬灭荧光探针在肠癌患者肠道菌群荧光定量(qPCR)检测中的应用效果。方法选取2020年1月至2022年8月接受手术的42例肠癌患者为研究组,选取健康体检成人38例为对照组,收集手术前后益生菌制剂干预4周的粪便标本,采用常规qPCR和双淬荧光探针qPCR检测肠道菌群的表达量。结果研究组的胆汁酸、血清总胆汁酸、次级胆汁酸均高于对照组(P<0.05)。两组患者手术前后的大肠杆菌、葡萄球菌、变形杆菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌比较有统计学差异(P<0.05)。结论双淬灭荧光探针检测肠道菌群、胆汁酸的方法便捷,结果准确,对鉴别及筛查早期肠癌患者有指导意义,值得临床推广。

m-6-m型Gemini双季铵盐表面活性剂与DNA的相互作用

合成了5种m-6-m型Gemini双季铵盐表面活性剂,在对产物结构和表面活性进行分析的基础上,分别采用紫外分光光度法和荧光分光光度法考察了m-6-m型Gemini双季铵盐表面活性剂与DNA的相互作用.结果表明,m-6-m型Gemini表面活性剂的CMC随烷基疏水链的增长呈逐渐下降趋势.几种表面活性剂均没有使DNA的紫外吸收峰发生红移或蓝移现象,说明复合物无嵌插作用或氢键形成,表面活性剂与DNA作用后的吸光度随表面活性剂浓度的增大而增强,当表面活性剂的浓度相同时,吸光度随疏水链的增大而逐渐减弱.Gemini表面活性剂浓度增大导致荧光强度降低,表面活性剂与DNA作用时的猝灭为静态猝灭,随着疏水链长度的增长,荧光猝灭常数降低,表面活性剂与DNA之间的作用力减弱.