抗纤维蛋白-抗尿激酶双特异性单克隆抗体的体内外溶栓效果的研究

目的研究抗纤维蛋白－抗尿激酶双特异性单克隆抗体在体内外的溶栓效力。方法通过分泌抗纤维蛋白单抗的杂交瘤细胞（变异株）与尿激酶免疫小鼠的脾细胞融合，获得分泌双特异性单抗（ｂｓＭｃＡｂｓ）杂交－杂交瘤细胞。采用ＥＬＩＳＡ法检测该ｂｓＭｃＡｂｓ与纤维蛋白和尿激酶的结合力。用１３１Ｉ血浆－血浆凝块溶解率法测定体外溶栓效力。用兔血栓模型测定体内溶栓效力。结果获得８株分泌抗纤维蛋白－抗尿激酶双特异性单抗的杂交－杂交瘤细胞。ＥＬＩＳＡ实验证明ｂｓＭｃＡｂｓ与纤维蛋白和尿激酶均有很强的结合力。体外溶栓实验证明ｂｓＭｃＡｂｓ可使尿激酶的溶栓效力增强１５．５％。体内溶栓实验证明ｂｓＭｃＡｂｓ的溶栓效力为尿激酶的１．６～２．１倍。结论单抗导向溶栓剂具有高度特异性和局部溶栓效力强等优点，值得进一步研究。

CD3/CD19双特异性单克隆抗体的制备、鉴定及其再导向的研究

目的制备ＣＤ３／ＣＤ１９双特异性单克隆抗体（ＢｓＡｂ）并研究其生物学作用。方法采用杂交－杂交瘤技术制备ＢｓＡｂ，以双亚类ＥＬＩＳＡ和细胞结合试验确证ＢｓＡｂ的存在，再用５１Ｃｒ释放试验证实ＢｓＡｂ的再导向细胞毒效应。结果获得３株ＣＤ３／ＣＤ１９四源杂交瘤细胞，其中１株已成为稳定分泌ＣＤ３／ＣＤ１９ＢｓＡｂ的四源杂交瘤细胞株。细胞毒试验表明ＣＤ３／ＣＤ１９ＢｓＡｂ上清、ＣＤ３／ＣＤ１９纯化抗体以及ＣＤ３／ＣＤ１９化学交联ＢｓＡｂ都能增强ＣＤ３激活杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ细胞）对Ｎａｌｍ－６靶细胞的杀伤作用（Ｐ＜０．０５～０．００１）。结论ＣＤ３／ＣＤ１９ＢｓＡｂ具有显著的再导向激活Ｔ细胞杀伤特异肿瘤靶细胞的功能，提示该ＢｓＡｂ有临床应用的潜在价值。

抗人IgG-抗HRP双特异性单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

目的制备人 Ig G检测用双特异性单克隆抗体诊断试剂。方法用人 Ig G免疫 BAL B/c小鼠脾细胞与抗HRPMc Ab杂交瘤细胞 HAT敏感株进行第 2次融合。结果获得 5株能稳定分泌抗人 Ig-抗 HRP的双特异性单克隆抗体的杂交-杂交瘤细胞 ,分泌的抗体亚类其中 1株为 Ig G2 a/Ig G1,余为 Ig G1 /Ig G1 。培养上清与腹水效价分别为 2 - 7,10 - 5以上 ,经 HRP亲和层析有 2个蛋白吸收峰 ,Bs Mc Ab存在于第 2峰。用 EL ISA法及免疫印迹试验证明 :Bs Mc Ab只与人 Ig G有特异性反应。杂交 -杂交瘤细胞连续 3月培养和反复冻存 ,复苏后仍能稳定保持分泌 Bs Mc Ab的能力。结论该方法制备简单 ,灵敏高度 。

基于双特异性单克隆抗体的克百威和三唑磷多残留ELISA分析方法研究及在环境样品中应用

采用杂交-杂交瘤技术制备抗克百威和三唑磷的双特异性单克隆抗体并进行纯化,通过对反应模式、工作浓度、包被缓冲液、有机溶剂、离子强度、pH值等条件优选,建立优化的ELISA分析方法,对克百威和三唑磷的线性回归方程分别为Y=20.009ln(x)-9.9293(R2=0.9959)和Y=19.486ln(x)+39.752(R2=0.9945),抑制中浓度I50分别为20ng.mL-1和1.69ng.mL-1,最低检测限I20分别为4.46ng.mL-1和0.36ng.mL-1。建立的ELISA分析方法对水、土壤等环境样品中克百威和三唑磷的平均添加回收率介于88.4%～117%之间,说明所制备的双特异性单克隆抗体和建立的ELISA分析方法可靠,可应用于克百威和三唑磷的多残留免疫分析。

制备双特异性单克隆抗体的方法

双特异性抗体由于其独特的结构-2个不同抗原,引起研究机构的广泛重视。研究者将治疗药物和针对疾病部位的特异目标分别放在双特异性单克隆抗体的2个臂上。治疗药物可以是药品、毒素、酶、DNA和放射性核素等。双特异性单克隆抗体能使免疫效应细胞的细胞毒性作用于致病细胞或者诱导产生全身免疫应答。作者重点介绍了制备双特异性单克隆抗体的3种方法,分别是化学方法、生物方法和基因工程,为制备临床需要的抗体奠定坚实的理论基础。

抗人IgG-抗HRP双特异性单克隆抗体的研制及初步应用

用8－AG（8－氮杂鸟嘌呤）驯化的HRP－MCAb（抗辣根过氧化物酶单克隆抗体）杂交瘤细胞HAT（次黄嘌呤氨基喋呤胸苷）敏感株与人IgG免疫的BALB／c小鼠脾细胞进行二次融合，获得5株能稳定分泌抗人IgG－抗HRP的BsMcAb（双特异性单克隆抗体）杂交－杂交癌细胞，用其混合腹水经HRP亲和层析纯化的BsMcAb制备BsMcAbPAP（双特异性单抗过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物）试剂代替丙肝诊断试剂盒中酶标二抗，比较结果初步表明两者差异无显著意义，将为IgG的检测提供有用试剂。

双特异性单克隆抗体在治疗中的应用

双特异性抗体由于其独特的结构——两个不同抗原,引起研究机构广泛的重视。双特异性单克隆抗体有两个臂,研究者将治疗药物和针对疾病部位的特异目标分别放在两个臂上。治疗药物可以是药品、毒素、酶、DNA和放射性核素等。此外,双特异性单克隆抗体能使免疫效应细胞的细胞毒性作用于致病细胞或者诱导产生全身免疫应答。双特异性单克隆抗体从治疗来看,有很大的发展前景,这是由于:(1)最近重组DNA技术的重大突破;(2)人类基因组图谱工程的完成,提高了疾病的鉴别水平;(3)对人类免疫系统机制有了更好的了解。

杂化杂交瘤产生双特异性单克隆抗体研究进展

杂化杂交瘤产生的双特异性单克隆抗体已广泛应用于体内外研究，包括细胞间的相互作用、改进免疫学诊断方法、自身免疫性疾病和肿瘤的导向治疗等诸多领域。本文着重就杂交瘤融合技术制备的双特异性单克隆抗体的有关理论和技术的优缺点，以及应用研究进展作一简要综述。

抗人双特异性磷酸酶DUSP18单克隆抗体的制备及鉴定

双特异性磷酸酶(Dual Specificity Phosphatase)是酪氨酸磷酸酶家族中的一员,这个家族中的成员既能对磷酸化酪氨酸去磷酸化,也能对磷酸化丝/苏氨酸去磷酸化.此外,它们还在有丝分裂原激活蛋白磷酸酶信号途径(MAPK)中起重要生理功能.为了制备抗人双特异性磷酸酶的单克隆抗体(mAb),以DUSP18重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗相应磷酸酶的mAb.用Western blot检测mAb对重组蛋白和细胞中天然磷酸酶的反应性,共获得6株可稳定分泌抗磷酸酶mAb的杂交瘤细胞株,为进一步研究双特异性磷酸酶的去磷酸化作用机理以及其在有丝分裂原激活蛋白磷酸酶信号途径(MAPK)中的信号转导提供强有力的工具.

双特异性单克隆抗体在肿瘤治疗方面的研究进展

双特异性单克隆抗体（BsMcAb）可介导肿瘤效应物（化学药、细胞因子和细胞毒细胞）至肿瘤部位,杂交-杂交瘤BsMcAb可克服化学交联法对抗体和药物的损害,并且性质稳定、不易脱落、还有浓集效应,并可诱导、增强细胞毒细胞的杀伤性,导向作用和治疗作用强,副作用较小,是肿瘤导向治疗的新方法。

抗3种β-激动剂双特异性单克隆抗体的建立及鉴定

制备抗克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺双特异性抗体并初步鉴定。将分泌抗克仑特罗、沙丁胺醇抗体的细胞株和分泌抗莱克多巴胺抗体的细胞株分别驯化,使之成为HAT敏感株。将两者融合,筛选分泌双特异性单克隆抗体的杂交-杂交瘤株,然后对其进行初步鉴定。共获得5株杂交-杂交瘤细胞株,将其分泌的双特异性单克隆抗体(BsAb)经过酶联免疫吸附法(ELISA)初步检测,IC50可达1 ng/mL,腹水效价为105以上,用ELISA法证明BsAb只与克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺有特异性反应。该方法制备简单、风险低、灵敏度高、周期短,具有较好的应用前景。

双特异性单克隆抗体

由于免疫酶技术的迅猛发展和广泛应用,对纯化抗体的需求大为增加,尽管单克隆抗体(McAb)以其高度特异性为抗体的纯化(如亲和层析法)提供了十分优越的条件,然而 McAb应用于免疫酶技术时常需纯化的辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗小鼠 IgG 作为第二抗体。能否在 McAb 上装一抗酶信号呢?为此,Milstein 与 Cuello

双特异性单克隆抗体在肿瘤治疗中的应用

双特异性单克隆抗体(BsMAb)是含有两个不同配体结合位点的免疫球蛋白分子,在疾病的诊断治疗上具有较大临床应用潜力,特别在肿瘤治疗方面,有其不容忽视的优越性。现综述近年来BsMAb在肿瘤治疗中的研究及应用进展。同时,对其人源化进程也进行了概述。

双特异性单克隆抗体依米珠单抗治疗A型血友病的Ⅲ期临床试验中期结果公布

基因技术公司宣布双特异性单克隆抗体依米珠单抗（emicizumab）治疗A型血友病的Ⅲ期临床试验中期结果。

双特异性抗体在抗人类免疫缺陷病毒方面的研究进展

双特异性抗体(bispecific antibody,BsAb)是一种工程化的非自然抗体。由于大多数单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的抗病毒活性有限,而双特异性抗体通过结构的修饰,可以同时作用于病毒和宿主细胞不同的抗原表位,在免疫治疗中具有更高的特异性以及更大广度及效力,在抗人类免疫缺陷病毒(HIV)研究领域中双特异性抗体的研究已成为一大热点,现就抗HIV双特异性抗体的研究作一综述。

双特异单克隆抗体介导的人单核－巨噬细胞对肝癌细胞的杀伤作用

目的：证实双特异性单克隆抗体在肝癌导向治疗，尤其是细胞免疫治疗方面的作用．方法：用化学交联剂ＳＰＤＰ将抗肝癌单克隆抗体ＨＡｂ１８与抗单核－巨噬细胞单克隆抗体ＭＡｂ７联结成双特异抗体ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７；用流式细胞仪证实其双特异性；软琼脂培养法证明其对肝癌细胞的导向杀伤作用．结果：ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７具有特异性地结合肝癌细胞及单核－巨噬细胞的双重特性；软琼脂培养结果表明：ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７实验组较对照组克隆形成率明显降低（Ｐ＜０．０１）．结论：ＨＡｂ１８－ＭＡｂ７可明显提高单核巨噬细胞对肝癌细胞的杀伤作用．

单克隆抗体药物研发进展

目的:对单克隆抗体药物研发进展进行综述,为行业提供参考。方法:通过查阅文献和相关数据库,对经典的单克隆抗体药物,以及由此衍生的抗体偶联药物、双特异性抗体药物的研究进行汇总、梳理。结果与结论:自1986年第一个单克隆抗体药物上市以来,全球已有超过100种单抗药物获批上市。国内已获批的进口单抗药物达42个,国产单抗药物达31个。经过30多年的研究和发展,单抗药物以其高度特异性和疗效确切的特点,在肿瘤、自身免疫、代谢、病毒感染等疾病领域显示出独特的优势和广阔的应用前景。

抗B-CLL Idx抗CD3双特异性抗体的制备及其特性研究

应用无筛选标记细胞株杂交瘤·杂交瘤细胞直接融合法制备了２株分泌抗慢性Ｂ淋巴细胞白血病（Ｂ－ＣＬＬ）Ｉｄｘ抗ＣＤ３双特异性抗体（ＢｓＡｂ）的四价体瘤细胞株。采用间接ＥＬＩＳＡ试验与间接免疫荧光试验证明了该ＢｓＡｂ能分别与Ｂ－ＣＬＬ患者血清及带ＣＤ３标记的细胞特异性结合，经细胞结合试验证明该ＢｓＡｂ同时具备与Ｉｄ及ＣＤ３两种抗原结合能力，经酶桥联法证明该ＢｓＡｂ亚类为ＩｇＧ１×ＩｇＧ２ａ。