血清双特异性磷酸酶1水平变化在儿童支气管哮喘中的临床意义

本研究旨在探讨血清DUSP1水平变化在哮喘患儿中的表达及其与哮喘发作风险、严重程度和炎症细胞因子的关系。方法:选取2020年1月至2021年2月在青岛大学附属医院儿童呼吸科就诊的哮喘急性发作期儿童52例、哮喘慢性持续期50例和健康儿童50例进行研究。在青岛大学附属医院检验科,采用酶联免疫吸附法检测血清DUSP1、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-17水平。结果:① 血清DUSP1水平在健康儿童中最高,在哮喘慢性持续期儿童中次之,在哮喘急性发作期儿童中最低(P 0.05)。④ 哮喘慢性持续期儿童血清DUSP1水平与血清TNF-α、IL-1β水平呈负相关(P 0.05)。在健康儿童中,血清DUSP1水平与炎症因子无相关性(P > 0.05)。结论:血清DUSP1水平变化可能作为预测哮喘儿童的急性发作的生物学标志物,与哮喘患儿急性发作期、慢性持续期的炎症细胞因子密切相关。

抗人双特异性磷酸酶DUSP18单克隆抗体的制备及鉴定

双特异性磷酸酶(Dual Specificity Phosphatase)是酪氨酸磷酸酶家族中的一员,这个家族中的成员既能对磷酸化酪氨酸去磷酸化,也能对磷酸化丝/苏氨酸去磷酸化.此外,它们还在有丝分裂原激活蛋白磷酸酶信号途径(MAPK)中起重要生理功能.为了制备抗人双特异性磷酸酶的单克隆抗体(mAb),以DUSP18重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗相应磷酸酶的mAb.用Western blot检测mAb对重组蛋白和细胞中天然磷酸酶的反应性,共获得6株可稳定分泌抗磷酸酶mAb的杂交瘤细胞株,为进一步研究双特异性磷酸酶的去磷酸化作用机理以及其在有丝分裂原激活蛋白磷酸酶信号途径(MAPK)中的信号转导提供强有力的工具.

双特异性磷酸酶1在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及意义

目的探讨双特异性磷酸酶1(DUSP1)在涎腺腺样囊性癌(SACC)组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化、qRT-PCR和Western blot检测48例SACC患者的癌组织和20例癌旁正常组织中DUSP1的蛋白和基因表达水平,并收集相关临床资料,分析DUSP1蛋白表达与SACC患者临床病理特征间的关系。结果 48例SACC患者标本中18例(37.5%)DUSP1阳性表达,30例(62.5%)阴性表达。qRT-PCR结果显示,SACC癌组织中DUSP1的基因表达阳性率显著低于癌旁正常组织(P<0.05),Western blot结果与其一致。不同T分期、淋巴结转移、神经侵犯、局部侵犯的患者间比较,DUSP1蛋白表达阳性率均有统计学差异(均P<0.05),而不同性别、年龄、肿瘤部位、组织学类型、远处转移的患者间比较,DUSP1蛋白表达阳性率均无统计学差异(均P>0.05)。结论DUSP1在SACC中表达下降,与T分期、淋巴结转移、神经侵犯、局部侵犯有关,有望成为SACC预后的潜在标志物之一。

双特异性磷酸酶-1过表达对肾癌细胞株A498增殖和侵袭的影响

目的构建携带人双特异性磷酸酶-1(dual specificity phosphatase-1,DUSP-1)基因的过表达慢病毒载体并包装病毒,感染人肾癌细胞株A498后观察DUSP-1的过表达对肾癌细胞株A498增殖和侵袭能力的影响。方法从p CMV6-XL5-DUSP-1质粒上获得目的基因片段,采用DNA重组技术将DUSP-1基因插入到慢病毒表达载体质粒Plv-EGFP(2A)Puro中,获得重组plv-EGFP(2A)Puro-DUSP-1载体。重组慢病毒表达质粒及辅助包装质粒p H1、p H2共转染293T细胞进行慢病毒包装,收集病毒上清并感染肾癌细胞株A498,利用Western blot检测细胞DUSP-1蛋白的表达情况。用MTS法检测细胞增殖能力的变化,Transwell法检测细胞侵袭能力的变化。结果成功构建携带DUSP-1过表达载体。包装病毒后成功感染A498细胞株,DUSP-1蛋白表达较对照A498细胞株显著上调。重组质粒组细胞在490 nm吸光值明显上升(P<0.05);细胞侵袭试验中,重组质粒组的穿膜细胞数明显高于空载体组(P<0.05)。结论成功构建了人DUSP-1基因的重组慢病毒表达载体p LV-EGFP(2A)Puro-DUSP-1,进行病毒包装后成功培养稳定高表达DUSP-1基因的肾癌细胞株;DUSP-1基因的过表达具有促进肾癌细胞株A498增殖和侵袭的作用。

双特异性磷酸酶在肿瘤中的研究进展

双特异性磷酸酶(DUSP)是酪氨酸磷酸酶家族中的一员,其参与生物体内许多基本的生理活动。近年关于DUSP在肿瘤发生发展过程中的研究受到关注。不同DUSP型别在肿瘤中的作用各异,即使同种DUSP在各种肿瘤发生发展中的作用也不同。本文就DUSP在肿瘤诊治中的研究进展做一综述。

双特异性磷酸酶4与肿瘤

双特异性磷酸酶4(DUSP4),又称丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-2(MKP-2),是DUSP家族中的一员。目前研究表明,DUSP4与肿瘤血管生成、肿瘤转移、增殖及凋亡密切相关。但在不同肿瘤中,DUSP4发挥的功能不尽相同,DUSP4基因缺失或过表达对肿瘤的发生发展有重要的影响。此文就DUSP4与肿瘤关系的研究进展作一综述。

上调双特异性磷酸酶2表达对胶质瘤细胞增殖凋亡及STAT3信号通路的影响

目的:探讨双特异性磷酸酶2(DUSP2)基因对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制。方法:构建DUSP2过表达慢病毒载体,筛选出DUSP2稳定过表达的胶质瘤细胞株,空载慢病毒转染并筛选后的胶质瘤细胞作为对照。采用CCK8细胞毒性实验和克隆形成实验检测上调DUSP2表达后胶质瘤细胞增殖能力的变化;蛋白质印迹法检测DUSP2、STAT3、p-STAT3(Tyr705/Ser727)、bcl-2、p53等蛋白表达水平。结果:慢病毒载体感染细胞并筛选后,荧光显微镜下观察显示荧光表达效率在90%以上。蛋白质印迹结果显示DUSP2稳定过表达的胶质瘤细胞(实验组)中DUSP2表达较对照组明显上调。CCK8细胞毒性实验结果表明,实验组细胞活力较对照组明显下降;克隆形成实验结果显示,实验组细胞克隆形成数明显少于对照组。蛋白质印迹结果表明,实验组细胞中pSTAT3(Tyr705/Ser727)及bcl-2表达显著下调,p53表达上调。结论:上调DUSP2的表达可显著抑制胶质瘤细胞的增殖,并促进其凋亡,其机制可能与DUSP2抑制了STAT3(Tyr705/Ser727)信号通路的磷酸化水平有关。

双特异性磷酸酶5对人胎盘滋养层细胞系BeWo增殖和凋亡的影响

目的探讨双特异性磷酸酶5(dual specificity phosphatase 5,DUSP5)基因过表达对人胎盘滋养层细胞系BeWo增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法以携带人DUSP5基因的重组慢病毒感染BeWo细胞,用流式细胞仪分选建立过表达DUSP5的BeWo细胞模型,以携带空载体的慢病毒感染的细胞以及未经任何处理的细胞作对照。经荧光实时定量PCR和Western blot检测DUSP5基因mRNA和蛋白的表达,经CCK-8实验和流式细胞术检测BeWo细胞增殖和凋亡的变化,经Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、p-p38及p-JNK的变化。结果①经荧光实时定量PCR和Western blot证实,成功构建了DUSP5过表达的人胎盘滋养层细胞BeWo细胞模型;②CCK-8实验结果显示DUSP5过表达组在第3、4、5天的光密度值D(490)与其他两对照组相比明显增高(P<0.01);流式细胞仪结果显示顺铂作用48 h后,DUSP5过表达组与空病毒载体组相比,正常细胞的百分比显著增加而早期凋亡细胞百分比则显著减少(P<0.01);Western blot结果显示DUSP5过表达组中p-ERK1/2水平显著下降,而p-p38和p-JNK未见明显变化。结论 DUSP5可促进人胎盘滋养细胞系BeWo增殖、抑制细胞凋亡,以上作用可能与DUSP5抑制ERK信号通路有关。

双特异性磷酸酶1在乳腺癌及他莫昔芬耐药病例中的表达变化

目的初步探讨双特异性磷酸酶1(DUSP1)在乳腺癌患者以及乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药患者中的表达变化及其与临床预后的关系。方法使用TCGA数据库分析DUSP1在1 215名不同临床病理特点的乳腺癌患者中的分布和表达情况,使用生存分析数据库分析DUSP1表达水平与乳腺癌患者生存情况的关系;收集8例乳腺癌TAM耐药前后的配对标本进行免疫组化染色,分析DUSP1在耐药前后肿瘤标本中蛋白表达的变化情况。结果 DUSP1在乳腺癌组织中的表达水平显著低于正常乳腺组织(P<0.001),且在Luminal A亚型中的表达高于其他亚型(P<0.001);DUSP1的表达水平与乳腺癌患者的总生存(P<0.05)和无复发生存(P<0.001)呈正相关,与接受内分泌治疗的乳腺癌患者的无复发生存呈正相关(P<0.001);DUSP1在8例TAM耐药患者的配对标本中表达变化未见统计学差异(P>0.05)。结论在接受内分泌治疗的患者中DUSP1高表达的患者有更好的无复发生存,但是在8例配对标本的检测中未发现DUSP1的表达差异有统计学意义。提示DUSP1与TAM耐药之间关系的探索有待更大样本的临床研究和更深入的细胞和分子生物学实验。

针刺联合活血醒脑汤对缺血性中风模型大鼠神经功能、脑能量代谢及双特异性磷酸酶水平的影响

目的观察针刺联合活血醒脑汤对缺血性中风模型大鼠神经功能、脑能量代谢及双特异性磷酸酶(PTEN)水平的影响。方法将50只清洁级SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、活血组和联合组,每组10只,除空白组外各组均建立缺血性中风模型。空白组给予假手术不结扎,造模后空白对照组和模型组给予0.5 mL生理盐水灌胃,针刺组给予百会、水沟穴位刺激,活血组给予5 m L/kg活血醒脑汤灌胃,联合组给予穴位刺激和活血醒脑汤灌胃。比较各组Garcia评分评价神经功能,2周后HE染色观察脑组织病理学形态,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)和白介素6(IL-6)水平。ELISA法检测脑组织乙酰胆碱酯酶(Ach E)、乳酸脱氢酶(LDH)和乳酸(LD)能量代谢指标,免疫印迹法检测脑组织双特异性磷酸酶(PTEN)水平。结果模型组神经功能评分显著低于空白组,针刺组、活血组和联合组神经功能评分显著高于模型组,且联合组改善优于针刺组和活血组(P<0.05)。模型组脑组织损伤水肿,神经元排列紊乱数量减少,细胞间隙扩大,部分细胞坏死,针刺组、活血组和联合组脑组织损伤水肿减轻,形态较正常,结构较完整,细胞明显增生,联合组改善优于针刺组和活血组。针刺组、活血组和联合组TNF-α、CRP和IL-6显著低于模型组,且联合组低于针刺组和活血组(P<0.05)。针刺组、活血组和联合组Ach E和LDH含量高于模型组,而LD含量低于模型组,且联合组优于针刺组和活血组(P<0.05)。针刺组、活血组和联合组PTEN水平显著低于模型组,且联合组低于针刺组和活血组(P<0.05)。结论针刺结合活血醒脑汤可改善缺血性中风模型大鼠神经功能和脑能量代谢,减轻炎症反应,降低PTEN水平。

双特异性磷酸酶14、微小RNA-873-3p在宫颈癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的分析宫颈癌组织中双特异性磷酸酶14(DUSP14)、微小RNA-873-3p(miR-873-3p)表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法选取2015年1月至2016年8月苏州高新区人民医院收治的82例宫颈癌患者作为研究对象,留取其癌组织及癌旁组织,收集国际妇产科联盟(FIGO)分期、分化程度等临床资料。采用免疫组织化学法检测DUSP14蛋白表达,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测miR-873-3p水平;采用Spearman法分析癌组织中DUSP14与miR-873-3p表达水平的相关性;采用Kaplan-Meier法分析癌组织中DUSP14、miR-873-3p表达水平与预后的关系;采用多因素Cox回归分析影响宫颈癌患者预后的因素。结果宫颈癌患者癌组织DUSP14蛋白阳性表达率高于癌旁组织,miR-873-3p表达水平低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌患者癌组织DUSP14、miR-873-3p表达水平与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、肌层浸润深度有关(P<0.05)。宫颈癌患者癌组织DUSP14与miR-873-3p表达水平呈负相关(r=-0.482,P<0.05)。DUSP14蛋白阳性表达宫颈癌患者5年生存率低于DUSP14蛋白阴性表达患者(χ2=16.724,P<0.05);miR-873-3p高表达宫颈癌患者5年生存率高于miR-873-3p低表达患者(χ2=14.131,P<0.05)。DUSP14、FIGO分期是宫颈癌患者死亡的独立危险因素(P<0.05),miR-873-3p是宫颈癌患者死亡的保护因素(P<0.05)。结论宫颈癌组织中DUSP14高表达,miR-873-3p低表达,二者与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、肌层浸润深度及预后密切相关。

双特异性磷酸酶1在宫颈鳞癌中的表达及作用研究

目的分析双特异性磷酸酶1(Dual specificity phosphatase 1,DUSP1)在宫颈鳞状细胞癌(简称宫颈鳞癌)中的表达水平及其作用。方法收集2017年1月-2019年5月在新疆医科大学附属肿瘤医院妇科收治的73例Ⅰ-Ⅳ期宫颈鳞癌患者的肿瘤组织、癌旁组织及其临床病理资料。采用qRT PCR方法检测肿瘤组织及其癌旁组织中DUSP1的表达水平,分析其与临床病理参数的相关性。采用过表达DUSP1的慢病毒进行转染,设为C33a实验组和SiHa实验组;用携带无义序列的慢病毒进行转染,设为C33a对照组和SiHa对照组,共4组。用CCK-8和Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭及迁移能力;Western blot检测C33a实验组和对照组中的MAPK信号通路相关蛋白磷酸化水平。结果宫颈鳞癌组织中DUSP1的表达水平低于癌旁组织,无淋巴结转移患者DUSP1表达水平高于有淋巴结转移患者(P<0.05)。与C33a对照组和SiHa对照组比较,C33a实验组和SiHa实验组宫颈鳞癌细胞DUSP1表达水平显著增加(P<0.01),细胞增殖(P<0.05)、迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.01)能力降低。与C33a对照组比较,C33a实验组宫颈鳞癌细胞p-p38、p-JNK、p-ERK的蛋白磷酸化表达水平降低(P<0.05)。结论DUSP1的过表达水平与宫颈鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭能力相关,可能是潜在的抑癌基因,有望成为临床治疗宫颈鳞癌的新型靶标。

双特异性磷酸酶1通过视神经萎缩蛋白1抑制血管平滑肌细胞钙化

目的研究双特异性磷酸酶1(DUSP1)/视神经萎缩蛋白1(OPA1)信号通路对血管平滑肌细胞钙化的作用。方法采用体外血管钙化模型,β磷酸甘油和氯化钙诱导大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙化,茜素红S染色检测细胞钙化,ELISA测定钙含量,TUNEL检测细胞凋亡,Western blot测定DUSP1、OPA1、Runt相关转录因子2(Runx-2)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平。采用细胞转染的方法过表达DUSP1和敲减OPA1表达,观察细胞钙化、钙含量、细胞凋亡率和Runx-2、BMP-2、Caspase-3表达水平。结果β磷酸甘油和氯化钙诱导血管平滑肌细胞钙化模型中,DUSP1(t=11.951,P<0.001)、OPA1(t=8.487,P<0.001)蛋白表达水平均显著下降。过表达DUSP1能促进OPA1蛋白表达(t=-8.921,P<0.001),减轻血管平滑肌细胞钙化,降低细胞钙含量、细胞凋亡率以及Runx-2、BMP-2、活化的Caspase-3的表达(P均<0.001);而敲减OPA1表达能促进血管平滑肌细胞钙化,增加细胞钙含量、细胞凋亡率以及Runx-2、BMP-2、活化的Caspase-3的表达(P均<0.001)。结论DUSP1可能通过促进OPA1蛋白表达起到抑制血管平滑肌细胞钙化的作用。

双特异性磷酸酶6在卵巢浆液性上皮肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨双特异性磷酸酶6(DUSP6)在卵巢浆液性上皮肿瘤中的表达及临床意义。方法采用免疫组化方法研究DUSP6在不同卵巢浆液性肿瘤组织标本中的表达情况,分析其与临床病理特征的相关性。结果 DUSP6在卵巢浆液性癌中的表达水平明显低于卵巢良性及交界性浆液性肿瘤(均P<0.001)。DUSP6在卵巢浆液性癌中的表达CA125≤900 U/mL组低于CA125>900 U/mL组(P<0.05);DUSP6在卵巢浆液性癌中的表达腹水≤500 mL组低于腹水>500 mL组(P<0.05)。结论 DUSP6表达与卵巢浆液性癌的发生相关,并且可能参与了卵巢浆液性癌的盆腹腔转移过程,可能成为卵巢浆液性癌早期诊断及阻断盆腹腔转移的新的分子标志物。

双特异性磷酸酶在非酒精性脂肪性肝病中的研究进展

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病率快速增长,已成为我国最为常见的慢性肝脏疾病,但相关发病机制尚未完全阐明。双特异性磷酸酶(dual specificity phosphatase,DUSP)是近十年发现的一类酪氨酸特异性的磷酸酶[1]。近期研究证实,DUSP家族成员可通过调节p38丝裂酶原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)p38和c-jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化对NAFLD发生发展起到重要的调节作用。本文就目前DUSP家族在NAFLD领域的研究进展作一综述。

miR-145-5p靶向双特异性磷酸酶6对人子宫内膜癌增殖、迁移、侵袭与凋亡的影响

目的探讨微小RNA-145-5p(miR-145-5p)靶向双特异性磷酸酶6(DUSP6)对于人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭与凋亡能力的影响。方法人子宫内膜癌Ishikawa细胞分为A组(未转染组)、B组(mimic NC组)、C组(mimic组)、D组(inhibitor NC组)、E组(inhibitor组),采用脂质体(Lipo 2000)细胞转染法转染。利用RT-PCR技术验证miR-145-5p的表达;过表达或抑制表达miR-145-5p对Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡影响将运用MTT、伤口愈合、Transwell及凋亡实验检测;运用生物信息学方法预测miR-145-5p的潜在靶基因;运用RT-PCR及Western Blot技术检测细胞转染后下游靶基因DUSP6mRNA及蛋白的表达水平。结果转染后48、72、96 h,C组比B组细胞增殖能力下降,E组比D组细胞的增殖能力增强,差异有统计学意义(P<0.05)。转染后24、48 h,C组比B组细胞迁移能力降低,E组比D组细胞迁移能力增强(P<0.05)。转染48 h后,C组比B组侵袭能力下降,E组比D组侵袭能力增强,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48 h后,A组、B组、C组、D组、E组凋亡率分别为(0.66±0.05)%、(0.60±0.03)%、(17.74±1.02)%、(0.72±0.04)%、(0.31±0.02)%,差异有统计学意义(P<0.05)。经生物信息学在线软件预测DUSP6是miR-145-5p的潜在靶基因。转染48 h后,DUSP6 mRNA在A组、B组、C组、D组、E组中的相对表达水平分别为1.00±0.09、1.09±0.08、0.47±0.04、1.03±0.05、4.62±0.26,差异有统计学意义(P<0.05)。其蛋白的相对表达量为0.29±0.03、0.28±0.04、0.16±0.03、0.32±0.05、0.74±0.05,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-145-5p过表达后能够抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭并且促进癌细胞凋亡,其机制可能是通过负向调节DUSP6的表达而实现。

HuR蛋白118位苏氨酸对热应激状态下的双特异性磷酸酶1的转录后调控

目的探讨RNA结合蛋白HuR 118位苏氨酸对热应激状态下的双特异性磷酸酶1(DUSP1)转录后调控机制。方法构建HuR 118位苏氨酸突变体真核表达质粒,并用脂质体转染NIH 3T3细胞,Real-time PCR检测其对DUSP1 mRNA水平的影响,Western blotting检测其对DUSP1蛋白表达的效应。结果 (1)小鼠HuR不同突变体真核表达载体质粒构建成功;(2)热休克刺激后,HuRT118磷酸化明显增强;(3)过表达HuR(WT)与HuR(T118E),经过热休克刺激后,DUSP1 mRNA水平明显升高,其蛋白表达也有上调;过表达HuR(T118E)时,DUSP1的mRNA水平明显上调,而蛋白水平在热休克刺激前后均上调,其表达变化无差异而过表达HuR(T118A),热休克刺激前后DUSP1 mRNA水平及蛋白表达均下调;(4)热休克刺激下,HuR(WT)可以从细胞核内转位到细胞质并形成颗粒;当过表达HuR(T118E)时,在静息状态下,HuR(T118E)弥散分布于细胞质,热休克刺激会使其在细胞质形成明显的颗粒;而过表达HuR(T118A)时,热休克刺激并不能使其移位出核。结论 RNA结合蛋白HuR参与了DUSP1的转录后调控,可以通过其118位的苏氨酸磷酸化提高热休克刺激后的DUSP1的基因及蛋白水平。

双特异性磷酸酶14在胃癌中的表达情况及其临床意义

目的:探讨双特异性磷酸酶14(DUSP14)在胃癌中的表达及其与临床病理和预后的相关性。方法:分析DUSP14在胃癌组织芯片中的表达情况,并通过患者临床病理信息和随访资料进一步了解DUSP14的临床意义。结果:胃癌肿瘤组织芯片免疫组化的结果表明DUSP14在胃癌中高表达,差异有统计学意义。进一步分析表明DUSP14的高表达是胃癌患者预后差的独立危险因素。结论:胃癌组织中DUSP14高表达可能促进胃癌的进展,可能作为胃癌预后评估的新型生物标记物。

肺泡上皮细胞应对烟曲霉感染过程中胞内双特异性磷酸酶表达规律的研究

目的研究肺泡上皮细胞应对烟曲霉感染过程中双特异性磷酸酶(dual specificity phosphatases,DUSPs)的表达规律和炎症因子释放规律。方法在烟曲霉感染肺泡上皮细胞过程中,应用ELISA方法检测细胞上清中炎症因子的释放情况;应用Western blot检测胞内DUSP2、DUSP6和DUSP8的表达规律以及p65、ERK1/2和p38的表达规律和磷酸化水平。结果烟曲霉B5233孢子感染肺泡上皮细胞过程中,细胞上清中炎症因子TNF-α、MCP-1、IL-12p40、IL-1β、IL-6、IL-8的含量均逐渐显著升高;胞内DUSP2的表达逐渐显著升高,DUSP6的表达逐渐显著下降,而DUSP8的表达无明显变化;ERK1/2和p65磷酸化水平显著升高。结论肺泡上皮细胞应对烟曲霉感染过程中显著上调胞内DUSP2的表达,抑制DUSP6的表达,而对DUSP8的表达无显著影响,同时胞内NF-κB信号和MAPK信号均被激活,释放多种炎症因子。

双特异性磷酸酶2对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制研究

目的探讨双特异性磷酸酶2(DUSP2)基因对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制。方法首先利用在线分析工具KM plotter分析876例胃癌患者DUSP2表达高低对其总体生存率的影响,并在多种胃癌细胞株(MKN-45、SGC-7901、HGC-27、N-87)中检测DUSP2的表达。进一步构建DUSP2过表达慢病毒载体,包装病毒感染MKN-45细胞,筛选出DUSP2稳定过表达的胃癌细胞株,以空载慢病毒转染并筛选后的胃癌细胞为对照。采用MTS细胞增殖实验检测DUSP2上调表达对胃癌细胞增殖能力的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式检测细胞凋亡变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测DUSP2、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、p-ERK(Thr202/Tyr204)、P38、p-P38等蛋白表达水平。结果高表达DUSP2的胃癌患者较低表达者有明显的生存优势,并且DUSP2在多株胃癌细胞中呈低表达。Western blot结果显示DUSP2稳定过表达的胃癌细胞(实验组)中DUSP2表达较对照组明显上调,DUSP2稳定过表达的胃癌细胞株构建成功。MTS实验结果表明,实验组细胞活力较对照组明显下降。实验组细胞凋亡率明显高于对照组。Western blot结果表明,实验组细胞中p-ERK(Thr202/Tyr204)及p-P38表达较对照组显著下调。结论上调DUSP2的表达可显著抑制胃癌细胞的增殖,并促进其凋亡,其机制与DUSP2抑制了ERK、P38的磷酸化水平有关。