抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体介导的αβT细胞CDR3谱系漂移

目的探讨抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体(BHL-1)介导的αβT细胞CDR3谱系漂移,为双特异性抗体介导的T细胞免疫应答机制提供理论基础。方法采用免疫扫描谱型分析技术,分析6例正常献血员T细胞在人卵巢癌SKOV3细胞联合BHL-1刺激前后的TCR库多样性变化(CDR3谱型分布特征)及刺激后T细胞TCRα、β链CDR3优势利用情况,对克隆性增生T细胞的CDR3区进行序列分析。结果刺激前6例正常献血员TCR CDR3谱型均呈高斯分布,刺激后发生CDR3谱系漂移,部分TCR Vα、Vβ家族出现优势增生,明确了BHL-1介导下单克隆增生T细胞的α、β链CDR3序列。结论 SKOV3联合BHL-1诱导的T细胞CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达可能与BHL-1介导的特异性T细胞免疫反应有关,特异应答T细胞TCR CDR3序列的确定,将为卵巢癌的T细胞免疫治疗提供基础。

新型冠状病毒感染与CAR-T耐药双重挑战下的格菲妥单抗治疗:难治性弥漫大B细胞淋巴瘤1例报告

本文总结1例嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T,CAR-T)细胞治疗失败的难治性弥漫大B细胞淋巴瘤患者,在合并新型冠状病毒(coronavirus disease 2019,COVID-19)情况下接受格菲妥单抗治疗后获得完全缓解,且未见COVID-19感染加重等其他严重不良反应的治疗经验,同时回顾文献中格菲妥单抗治疗难治性弥漫大B细胞淋巴瘤的疗效,以及双特异性抗体在合并COVID-19的淋巴瘤患者中的安全性。

嵌合抗原受体-T细胞治疗复发难治型急性淋巴细胞白血病的护理

在临床上通过输注嵌合抗原受体-T细胞（chimeric antigen receptor-engineered T cells,CAR-T）来进行免疫治疗,首次通过基因改造技术应用慢性病毒载体,将表达B细胞的CD19＋特异性嵌合抗原受体转染至患者的T细胞中,改造后的T细胞称为CD19特异性CAR-T细胞。CAR-T通过表面标志特异性识别、结合、杀伤CD19＋肿瘤细胞。可以用于临床B细胞白血病/淋巴瘤的治疗,CD19CAR-T细胞诱导CR率高,可以介导髓外抗肿瘤的作用。

靶向抗TIGIT和PVRIG双特异抗体的制备及体外生物性活性的研究

目的制备靶向抗T细胞免疫球蛋白-ITIM结构域蛋白(T cell immune receptor with Ig and ITIM domains,TIGIT)和脊髓灰质炎病毒受体相关免疫球蛋白结构域蛋白(Poliovirus receptor-related immunoglobin domain-containing protein,PVRIG)双特异抗体,探究其体外生物学活性。方法用PVRIG人源化抗体hP1和TIGIT人源化抗体hT1构建KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV双特异性抗体,将纯化得到KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体进行SDS-PAGE凝胶电泳、热稳定性检测和稳定性分析;采用流式细胞术(Fluorescence activated cell sorting,FACS)检测双特异性抗体的结合活性;采用生物干涉膜技术(Bio-layer interferometry,BLI)检测双特异性抗体亲和力;用Jurkat-NFAT-Luc2-PD1-TIGIT-PVRIG细胞和293T-OS8-PVRL2-PDL1细胞中检测双特异性抗体KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV对于TIGIT/PVRIG靶点的阻断作用;采用CMV recall assay法检测IFN-r在上清液中的浓度。结果SDS-PAGE凝胶电泳结果显示KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV双特异性抗体纯度>95%;Tm结果为Tm1:66.34,Tm2:80.95。采用SEC-HPLC对双特异性抗体KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV进行稳定性分析,其纯度均>90%。KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体和PVRIG的人源化抗体hP1与293T-PVRIG cell line的EC 50分别为0.16870μg/mL和0.03865μg/mL,与293T-cyno-PVRIG cell line的EC 50分别为0.03714μg/mL和0.03198μg/mL,与Human PVRIG Protein,His Tag的亲和力为1.74E-10M和1.69E-10M。KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体和TIGIT的人源化抗体hT1与293T-PVRIG cell line的EC 50分别为0.07027μg/mL和0.03121μg/mL;与293T-cyno-TIGIT cell line的EC 50分别为0.02028μg/mL和0.02822μg/mL;与Human TIGIT Protein,His Tag的亲和力为8.50E-10M和8.47E-10M。KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体具有阻断PD1/PDL1/TIGIT/PVRIG相互作用活性,且KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV的EC 50为0.007μg/mL,优于单独人源化抗体hT1(EC 50为0.013μg/mL)和hP1(EC 50为0.048μg/mL)的作用。在含pp65 peptide条件下KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体分泌IFN-r为349.72 pg/mL,明显高于其他抗体。结论KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体具有高亲和力和良好的生物学活性,有望开发成为肿瘤免疫治疗的抗体药物。

抗OX40/EGFR双特异性抗体的制备和活性鉴定

目的构建同时靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和OX40的双特异性抗体,并在体外初步验证其对T细胞的特异性激活作用。方法构建抗OX40/EGFR双特异性抗体的真核表达载体,转染293F细胞进行表达和纯化。构建外源表达OX40和EGFR的HEK293T细胞,利用流式细胞术分析双抗与靶蛋白表达细胞的结合活性。并利用Jurkat-OX40-NF-κB-GFP报告细胞,验证双特异性抗体对报告细胞的激活活性。通过酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)的白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)分泌,进一步验证抗OX40/EGFR双抗对原代T细胞的激活。结果成功构建并且纯化了抗OX40/EGFR双特异性抗体,并且验证了该双抗可以特异性地结合表达EGFR和OX40的HEK293T细胞。在表达EGFR的A549肺癌细胞介导的交联作用下,该双特异性抗体较OX40单抗更强地激活OX40-NF-κB报告细胞,并且促进PBMC分泌IL-2和IFN-γ细胞因子。结论抗OX40/EGFR双特异性抗体构建成功,可同时识别OX40和EGFR受体并激活肿瘤特异性T细胞。

基于靶点人源化小鼠的PD-1/CTLA-4双特异性抗体及其IgG1亚型的抗癌活性评价

目的:构建基于靶点人源化小鼠的程序性死亡受体-1(PD-1)/细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)双特异性抗体(BsAb)并对BsAb及其IgG1亚型进行抗癌活性评价和探讨其潜在的作用机制。方法:构建和扩增并纯化不同结构及抗体亚型的PD-1/CTLA-4抗体BsAb1、BsAb2和BsAb3,对纯化BsAb进行靶点亲和力检测,采用荧光素酶报告基因实验和FCM检测抗体的生物学活性。基于B-hPD-1-hPD-L1-h CTLA-4人源化小鼠的MC38-hPD-L1结肠癌细胞移植瘤模型对BsAb进行体内药效评估,并通过移植瘤组织中肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)分析PD-1/CTLA-4抗体的作用机制。结果:成功制备的BsAb1、BsAb2及BsAb3对靶点PD-1和CTLA-4均有较强的特异性亲和力、对靶点通路均有不同程度的阻滞活性,均明显抑制移植瘤的生长(P<0.05或P<0.01)。IgG1亚型BsAb体内药效更优(P<0.01),TIL分析发现BsAb2-IgG1明显增加了CTL百分率(P<0.05),显著降低了肿瘤浸润Treg细胞百分率(P<0.01),使肿瘤免疫微环境更有利于杀伤肿瘤细胞;增强ADCC活性的Fc突变体亚型BsAb2-SI则不能进一步提高抗肿瘤活性。结论:具有Fc效应功能的IgG1亚型的PD-1/CTLA-4抗体体内抗癌药效更优,因其可以更好地清除TIL中的Treg细胞。

关于αβ和γδΤ细胞受体识别抗原性质的讨论

自从第8届国际免疫学会在布达佩斯召开以来,一些关于T细胞识别的重要争议问题已经得到或至少是部分得到答案.但遗留下来的其它问题希望将在第9届大会上提出来讨论.

免疫治疗在急性淋巴细胞白血病中的研究进展

急性淋巴细胞白血病(ALL)是一种主要影响儿童和成人的血液恶性肿瘤,源于淋巴样前体细胞的恶性增殖,侵入骨髓并可扩散到髓外部位。虽然近几十年儿童ALL患者的预后得到显著改善,但儿童ALL中的某些亚组预后很差,特别是复发和难治亚组,且在这些预后不良亚组中进一步增加常规化疗强度会带来显著的不良反应。此外,使用了多种细胞毒性药物联合治疗会导致在治愈患儿中出现多种长期并发症,包括多器官功能障碍、继发癌症、精神恶化以及社会和心理问题等。迄今为止,成人ALL患者的存活率仍然较差,复发率高且治愈率不令人满意。因此,需要探索更有效和更安全的治疗方法来改善ALL患者的治疗效果。在过去十年中,免疫疗法和分子疗法的靶向治疗取得了重大进展。美国FDA已批准的基于抗体的治疗(Blinatumomab和Inotuzumab ozogamicin)和基于T细胞的治疗(Tisagenlecleucel)显著提高了复发/难治性B-ALL患者的反应率和预后。将这些免疫疗法纳入ALL治疗中,有望降低常规化疗的强度,减少相关毒性,进一步提高患者的生存率和生活质量。因此,本综述讨论了新的治疗选择,包括双特异性抗体、抗体-药物偶联物、基于嵌合抗原受体(CAR)的疗法,旨在为ALL的治疗提供新的思路和方向。

肿瘤特异性T细胞受体转基因T细胞免疫治疗

过继性T细胞免疫治疗已成为一种有效的肿瘤治疗手段,其对于癌灶具有靶向性,单次输注后稳定持续表达使其较单抗类药物更具优越性.T细胞受体（TCR）可特异性识别肿瘤细胞中常见的胞内突变蛋白抗原,使杀伤作用严格限定于肿瘤细胞.恶性肿瘤能通过各种方法来逃避免疫监视,因此很多具有创造性的基因修饰策略被引用于转基因T细胞的研究以促进对肿瘤细胞的特异性识别和杀伤.现对这些策略及其临床实践作一综述.

B细胞成熟抗原（BCMA）靶向免疫治疗多发性骨髓瘤的研究进展

B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)因其在恶性骨髓瘤细胞上高度选择性表达,故是理想的精准治疗靶点。本文就BCMA的生物学活性、作为生物标志物的意义以及针对抗B细胞成熟抗原开发的免疫疗法(双特异性抗体,抗体药物偶联物,嵌合抗原受体T细胞疗法)的最新研究进展作一综述。

DLL3在小细胞肺癌靶向治疗中的研究进展

小细胞肺癌(SCLC)是肺癌中恶性程度最高、侵袭性最强的亚型,广泛期SCLC患者对放化疗敏感,但是很快会产生耐药,并出现病情进展。Delta样配体3(DLL3)在大部分SCLC细胞中表达,而在正常组织中低表达甚至不表达,这一特点使DLL3特异性靶向SCLC细胞的疗法成为可能。靶向DLL3的抗体-药物偶联物Rova-T由于患者总生存期较短,其Ⅲ期试验已被停止,双特异性T细胞接合剂AMG 757和DLL3靶向的嵌合抗原受体T细胞AMG 119正在进行临床研究中,其余部分DLL3靶向疗法已完成临床前研究。未来,对DLL3靶向治疗方法进行深入探索有望为SCLC患者提供更有效的治疗选择。

抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体的质量评价

目的 建立针对抗程序性死亡受体1 (programmed cell death protein 1,PD-1)/细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4,CTLA-4)双特异性抗体的关键质量属性质控方法。方法 采用报告基因法测定PD-1靶点的细胞生物学活性,流式细胞荧光分选法测定CTLA-4靶点的竞争结合活性;还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)和分子排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法进行抗体分子大小变异体的控制;成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,iCIEF)法测定电荷异质性;运用肽图对抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体进行鉴别;超高效液相色谱法分析糖型。结果 PD-1靶点的细胞生物学活性半数最大效应浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC_(50))为(6.91±0.78) nmol/L,相对参比品的生物学效价为(103.50±13.08)%,RSD为12.64%;CTLA-4靶点活性的EC_(50)为(0.35±0.28) nmol/L,相对参比品的生物学效价为(99.30±9.15)%,RSD为8.32%;还原CE-SDS的轻链与重链峰面积之和百分比为(98.86±0.02)%。非还原CE-SDS主峰峰面积百分比为(93.07±0.13)%,片段百分比为(4.44±0.13)%,聚体百分比为(2.49±0.15)%。SEC-HPLC单体的峰面积百分比为(97.20±0.01)%,聚体峰面积百分比为(2.68±0.01)%。iCIEF分析的A组峰面积百分比为(38.43±0.54)%,B组峰面积百分比为(43.26±0.32)%,C组峰面积百分比为(11.31±0.14)%,D组峰面积百分比为(7.00±0.17)%。肽图检测抗PD-1/CTLA-4抗体具有相应的特征图谱,能够用于鉴别。占比最高的糖型为G0F,含量为(41.06±0.11)%;含唾液酸的糖型共3种,分别为G2F+G1F-NANA、G2F-NANA和G2F-2NANA,含量分别为(12.44±0.12)%、(12.00±0.05)%和(5.37±0.05)%,含唾液酸糖型的总体含量为(29.80±0.20)%。结论 针对抗PD-1/CTLA-4双特异性抗体的关键质量属性建立了相应的质量控制方法,可确保其安全、有效和质量可控,为该类单抗产品的质量控制方法 和策略提供了参考。

急性髓系白血病免疫治疗的研究进展与展望

大多数急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者化疗诱导缓解后不可避免地面临复发。异基因造血干细胞移植作为AML最有效的治疗,通过免疫介导的移植物抗白血病效应根除白血病细胞,能有效预防AML复发。移植技术和单倍体移植模式进展使得"人人都能进行造血干细胞移植"。靶向治疗,如基因工程T细胞(嵌合抗原受体T细胞)、单克隆抗体、新型双特异性单抗,能特异性杀伤表达特殊抗原的白血病细胞,而不伤害正常细胞,将成为AML免疫治疗的新策略。研究发现高表达于急性单核细胞白血病细胞的新抗原急性单核细胞白血病相关抗原-34(monocytic leukemia associated antigen-34,MLAA-34)具有抗白血病细胞凋亡作用,且MLAA-34多肽可诱导特异性CTL杀伤活性,具有较强的免疫原性,MLAA-34可作为急性单核细胞白血病免疫治疗新的理想靶抗原。总之,新近进展有价值的免疫治疗白血病相关抗原的鉴定有可能根除化疗后白血病微小残留病变,有望降低AML复发,延长AML患者生存。

多发性骨髓瘤新型治疗方案的研究进展

多发性骨髓瘤(MM)是一种无法治愈的浆细胞恶性肿瘤,其典型病程特点是对最初治疗有所反应,随后产生耐药性。尽管在引入新药(如蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂)的推动下,多发性骨髓瘤的临床治疗虽然取得了重大进展,但是仍然无法完全治愈。然而只要患者有可用的新疗法,即可实现疾病的缓解,提高患者生存质量。这一现实促进了许多新型疗法的发展,在过去15年中批准了12种MM新型药物,还有更多的药物在临床试验中,极大地改变了MM的治疗格局,并提高了患者的生存率。本文就多发性骨髓瘤新型治疗的进展进行综述。

靶向肝细胞癌的T细胞免疫治疗研究现状

恶性肿瘤严重威胁人类的健康，肿瘤免疫治疗是继手术治疗和放化疗之后第四大治疗方法。目前对于肝细胞癌的免疫治疗尚无十分有效的方法。基因修饰T细胞免疫治疗在血液肿瘤中取得突破性进展，研究者尝试通过T细胞免疫治疗方法突破实体肿瘤的治疗效果。当前针对肝细胞癌免疫治疗的研究十分有限，现就靶向原发性肝癌T细胞免疫治疗的前沿研究现状做一综述。

特异性抗肿瘤TCR基因候选药物的研究

肿瘤患者免疫缺陷的核心问题是其T细胞受体（T Cell Receptor，TCR）基因表达异常，使T细胞难以识别肿瘤抗原并有效活化。TCR免疫基因治疗的核心策略是筛选可特异性识别肿瘤的TCR基因，以之转染患者无能T细胞赋予其肿瘤识别能力，以恢复和增强机体抗肿瘤免疫。