能力验证过程中一株双相亚利桑那亚种沙门菌的鉴定

目的参加2018年全国食源性疾病监测沙门菌检测的能力验证,正确的完成此次考核。方法对3株来自4份模拟粪便样本的可疑沙门菌在系统生化鉴定的基础上,应用PCR方法进行分子检测、飞行质谱法确证、血清凝集及药敏试验。结果 VETEK系统生化鉴定2株为肠炎沙门氏菌,另外1株为双相亚利桑那亚种肠道沙门菌。26种抗生素的MIC药敏试验显示肠炎沙门氏菌对26种抗生素均为敏感。双相亚利桑那亚种沙门菌除对链霉素耐药外,其余均为敏感。结论 4份考核样本中3份为沙门菌阳性,分离鉴定出的一株菌为双相亚利桑那亚种沙门菌,此菌不常见,易漏检,证明沙门菌的检测能力能满足食源性疾病监测的要求。

能力验证巧克力样品中肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种的分离鉴定

目的验证国标法和实时荧光定量PCR法2种方法对能力验证中的沙门氏菌双相亚利桑那亚种分离与鉴定的效果。方法按照作业指导书要求及GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》中的方法分离菌株,以实时荧光定量PCR仪对分离菌株进行快速筛查,再将生化鉴定结果符合沙门氏菌特征的菌株进行血清学鉴定。结果样品CODE 0575在沙门氏菌显色平板上分离得到蓝绿色圆形菌落,在BS平板上分离得到灰绿色圆形菌落,经实时荧光定量PCR仪快速筛查,结果为阳性;再通过VITEK 2 compact鉴定为肠道沙门菌双相亚利桑那亚种;该菌不产硫化氢,ONPG为阳性,确定血清型为60:r:e,n,x,z15。结论以国标法为基准,借助实时荧光定量PCR仪和VITEK 2全自动鉴定系统进行检测,可确保沙门氏菌双相亚利桑那亚种不被漏检;应特别注意沙门氏菌双相亚利桑那亚种在显色培养基上与常见沙门菌表型不一致;建议扩大对沙门氏菌双相亚利桑那亚种的监测范围。

江西省赣州市首次检出肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种

目的对赣州市首次分离的1株双相亚利桑那亚种沙门氏菌Ⅲb 65:k:z进行鉴定、血清分型和药敏分析等研究,为临床用药和制订防治措施提供参考依据。方法对菌株进行常规生化鉴定,同时采用Aris 2X全自动微生物鉴定和药敏分析系统、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)和全基因组测序(WGS)做进一步确认鉴定,并进行血清分型和耐药性研究。结果常规生化鉴定、全自动微生物鉴定和质谱鉴定结果均为沙门氏菌属,血清分型为Ⅲb 65:k:z,WGS结果与血清分型结果相一致。最低抑菌浓度(MIC)法药敏试验显示,菌株仅对链霉素耐药。结论本次研究中分离出的沙门氏菌Ⅲb 65:k:z为罕见的肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种,系江西省赣州市首次检出,国内未见相同血清型的报告。对于非A~F群罕见血清型沙门氏菌,采用不同原理的多种鉴定方法更能确保实验结果的可靠有效。

肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种检验特征分析及检验方法比较研究

目的:通过参加中国食品药品检定研究院组织的能力验证,比对不同检验方法对巧克力样品中沙门氏菌的检出及鉴定效果,找出不同检验方法对样品中不典型沙门氏菌分离及鉴定的特性,有效提升实验室对不典型沙门氏菌检验能力及质量控制水平。方法:实验中样品前处理按照考核方案作业指导书进行,沙门氏菌的分离按照《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》(GB 4789.4—2016)要求进行操作,通过BAX®system Q7快速筛查可疑样品,MALDI-TOF-MS定位可疑菌株,VITEK 2 COMPACT全自动微生物分析系统确认阳性菌株,MLST技术对沙门氏菌阳性菌株进行分子生物学分型。结果:3个样品中两个样品检出沙门氏菌,样品CODE-0695检出鼠伤寒沙门氏菌,样品CODE-0050未检出沙门氏菌,样品CODE-0542检出肠道沙门菌双相亚利桑那亚种。结论:实验发现肠道沙门菌双相亚利桑那亚种在显色培养基上菌落形态及生化表征与常见沙门氏菌不一致,易漏检,实际工作中应加强对不典型沙门氏菌检验能力的建设。

2种罕见沙门氏菌亚种的菌落形态与生化特征研究

沙门氏菌亚利桑那亚种及双相亚利桑那亚种是沙门菌属中较为罕见的2个亚种,鉴定较为困难。研究依据食品安全国家标准中的沙门氏菌检验方法从形态学和生物化学2个方面对1株沙门氏菌亚利桑那亚种和1株双相亚利桑那亚种标准菌株进行鉴定,旨在为较难鉴定的沙门菌株亚种的食品微生物检验提供参考。结果表明:2个亚种菌株在一些常用选择性琼脂培养基上的菌落形态与典型肠道沙门氏菌存在较大差异,其生化鉴定项目中的ONPG项结果也不同于典型肠沙门,对于缺乏相关经验的检验人员,极易错判,造成漏检,需给予重视。

1株罕见的可疑沙门氏菌鉴定结果的确认与分析

目的确认盲样考核样品中分离到的罕见可疑沙门氏菌。方法依据GB4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物检验沙门氏菌检验》将可疑沙门氏菌通过分离纯化、生化鉴定、16S测序、Ribo-printer基因指纹鉴定、MALDI Biotyper质谱鉴定以及血清型分型等方法对其进行确认。结果全自动细菌鉴定/药敏系统对该分离菌的鉴定结果为大肠埃希菌,而16S测序结果为沙门氏菌属,基因指纹鉴定结果为沙门氏亚利桑那亚种,质谱鉴定结果为沙门氏菌双相亚利桑那亚种,且血清型分型也表明该菌应为IIIb型,综合判断该检出菌应为沙门氏菌双相亚利桑那亚种。结论采用基于不同原理的多种鉴定手段联用的鉴定方法更能确保实验结果的可靠有效。

引起腹泻的肠道沙门菌双相亚利桑那亚种病原学鉴定

目的对双相亚利桑那亚种肠道沙门菌进行种属、血清型及序列型的病原学鉴定。方法对5株来自散发腹泻患者粪便样本的可疑双相亚利桑那亚种肠道沙门菌在系统生化鉴定的基础上,应用实时荧光PCR方法进行分子检测、血清凝集、MLST分型及药敏试验。结果 VITEK系统生化鉴定3株为双相亚利桑那亚种肠道沙门菌,其中2株菌沙门菌特异性种属基因hisJ阳性,经血清学鉴定为肠道沙门菌双相亚利桑那亚种61:l,v:1,5,(7),MLST序列分型为ST1850,12种抗生素的MIC药敏试验显示2株菌除对链霉素耐药外,其他均为敏感。结论从腹泻患者监测样本中分离的2株双相亚利桑那亚种肠道沙门菌血清型为61:l,v:1,5,(7),序列型为ST1850,提示该型别沙门菌在人间散发存在,今后应加强该菌型的监测,提高实验室检测能力,并开展有针对性的溯源。