采用水平双相凝胶电泳法对福赛斯拟杆菌蛋白分离的初步研究

目的 为分离福赛斯拟杆菌蛋白 ,建立一种快速、方便、高效、可靠的方法。方法 福赛斯拟杆菌厌氧培养的菌细胞经超声破碎后 ,菌蛋白加入固相pH梯度 (IPG)膨润液中或经ReadyPrep试剂处理后 ,在不使用加样杯、加样杯分别位于IPG的阳极端、中间、阴极端 ,采用pH 3～ 10的IPG聚丙烯酰胺凝胶条作等电聚焦电泳 ,梯度为 8%～ 18%聚丙烯酰胺板状梯度凝胶进行第二相电泳 ,经考马斯亮兰染色或蛋白银染观察其蛋白斑点。结果 ①等电聚焦电泳时 ,未使用加样杯福赛斯拟杆菌蛋白加入膨润液中双相电泳后两种染色都未见蛋白斑点 ,用加样杯加入福赛斯拟杆菌蛋白经水平双相电泳后考马斯亮兰染色无斑点出现而银染出现蛋白斑点 ,且加样杯位于IPG中间位置时蛋白等电聚焦的效果最佳。②福赛斯拟杆菌蛋白电泳图谱显示水平双相凝胶电泳能将不同蛋白分离 ,且绝大多数蛋白位于IPG的酸性端 ,即蛋白的等电点 (PI)在 3～ 7之间。结论 采用水平双相凝胶电泳方法可以将福赛斯拟杆菌不同种类的蛋白分离。

蛋白质双相凝胶电泳的方法学

双相凝胶电泳(Two-Dimensional GelEtectrophoresis,2D)是将两个不相干的电泳参数结合起来电泳,从而大大提高蛋白质的分辨率。高分辨的双相凝胶电泳能区分出1500～2000个不同的蛋白。由于它的这一特点,该技术现已被广泛用于鉴定各种良恶性肿瘤、代谢和遗传性疾病的标记蛋白。

HLA-DR抗原多态性的双相凝胶电泳分析法

本文利用免疫沉淀、双相凝胶电泳技术分析了某些DR位点纯合子细胞DR抗原电泳图谱。待检细胞用~3H-亮氨酸生物合成性标记,提取膜蛋白,对抗DR单态型抗血清做免疫沉淀,沉淀物用双相凝胶电泳进行分析。结果表明,DR抗原α肽链电泳图单一,各DR型间无差异:β肽链电泳图谱因DR型别而异,是区分DR型别的主要依据。此外,2例DR2纯合子细胞图谱明显不同,提示为两个不同的亚型。

用双相凝胶电泳技术鉴定中国汉族人HLA—DR2、DR9抗原的多态性

本文应用双相凝胶电泳技术对中国汉族人DR2、DR9抗原的多态性进行了分析，待检细胞用^35-S--蛋白氨酸代谢性标记，提取膜蛋白，对抗DR单态性抗血清做免疫，沉淀物用双相凝胶电泳进行分析，根据DR抗原β肽链电泳图谱差异，6例DR2纯合细胞图谱可分为四种类型。6例DR9纯合细菌图谱可分为两种类型，提示为不同的DR抗原亚型。

大鼠胸腺蛋白质组双相电泳方法的建立

通过对大鼠胸腺蛋白质组双相电泳方法的探索,改良了二维凝胶电泳过程。为日后大鼠胸腺蛋白质组学的研究提供了技术支持和保证。

一种适用于双向电泳凝胶的染色方法

一种适用于双向电泳凝胶的染色方法＊王台（中国科学院植物研究所，北京１０００９３）ＡＭＥＴＨＯＤＴＯＳＴＡＩＮＴＨＥＧＥＬＯＦＴＷＯ－ＤＩＭＥＮＳＩＯＮＡＬＧＥＬＥＬＥＣＴＲＯＰＨＯＲＥＳＩＳＷａｎｇＴａｉ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｏｔａｎｙ，Ａｃａｄ...

辛伐他汀对家兔动脉粥样硬化血管组织作用的蛋白质组研究

目的 通过研究辛伐他汀对高血脂致动脉粥样硬化家兔血管组织蛋白质组的变化 ,评价其药效影响。方法 建立新西兰家兔高脂致动脉粥样硬化模型 ,用双相凝胶电泳技术检测其蛋白质组的变化。结果 服用辛伐他汀后 ,脂肪肝病变基本消失 ;通过分析比较得到的 2DE图像 ,17个点明显上调 (>3倍 ) ,12个点明显下调 (<3倍 ) ,辛伐他汀对其中少数蛋白点有回调作用 ,对多数点无回调作用。结论 辛伐他汀能明显改善肝脏对脂肪的代谢功能 ,但未能有效修复高血脂引起的动脉血管壁的损伤。

双向凝胶电泳分析动脉粥样硬化大鼠心肌蛋白表达图谱

采用双相凝胶电泳分离大鼠冠状动脉总蛋白,胶态考马斯亮蓝G 250染色,GS 800凝胶扫描仪获取凝胶图像,并用PDQUEST软件分析,检测出2626个蛋白质斑点,并且得到不同条件下的蛋白质组的差异图谱.在相同的参数设置下,不同谱图间的匹配斑点数为1841,匹配率达70.1%以上.测量了凝胶蛋白斑点的在IEF和SDS PAGE方向上的位置偏差;对比分析了两种心肌组织的差异蛋白,发现33个蛋白质斑点只在正常大鼠心肌蛋白检测到表达;46个蛋白点在两种细胞中表达量上有显著变化.为从分子水平上理解心血管类疾病的发病机制,寻找防治药物和药物的构效关系的进一步研究开拓了新的途径,同时为深入研究AS的发病机制和药效研究提供参考数据.

渗透胁迫和脱落酸对冬小麦叶片蛋白质的影响

叶片蛋白质双相电泳研究表明,100 mg/L ABA或渗透胁迫能诱导抗旱性强的冬小麦太原633产生17.5～20 kD、PI4.7～5.5的一些新蛋白,抗旱性弱的C609在100mg/LABA处理时可诱导产生15～17.5kD、PI5.2～5.7的几个新蛋白和一个26kD、PI5.8的新蛋白,而在渗透胁迫下仅产生 26kD新蛋白.当100mg/LABA和渗透胁迫共同作用时,原来两者诱导的新蛋白数目和强度都不同程度地有所减弱或消失,表现为渗透胁迫的危害得到一定的缓解.

蛋白质组学定量的技术与方法研究进展

蛋白质组学是一门在整体水平上研究细胞内蛋白质组成及其活动规律的新兴学科。定量蛋白质组学是指通过某种方法或技术,对生物样品(细胞、组织或体液等)在某些过程中蛋白质的含量进行比较分析。近几年来,定量蛋白质组的技术发展很快,稳定同位素标记技术的提出,为准确定量在细胞或组织体系中发挥重要功能的低丰度蛋白质提供了一个理想的方法。本文综述了蛋白质组定量分析技术及其最新的研究进展。

蛋白质组学的相关技术及应用

当今分子生物学领域内,蛋白质组已成为研究的热点。基因组相对较稳定,而且各种细胞或生物体的基因组结构有许多基本相似的特征;蛋白质组是动态的,随内外界刺激而变化。对蛋白质组的研究可以使我们更容易接近对生命过程的认识。但同时对数千种(甚至更多)蛋白质特性的研究也是一个很大的技术挑战。双相凝胶电泳、质谱、酵母双杂交技术以及生物信息学的发展在一定程度上解决了这一技术难题。本文对此类技术及其在各领域的应用作一简要介绍。

蛋白质组学及其在病原微生物研究中的应用进展

本文概述了作为蛋白质组学主要技术的双相凝胶电泳、质谱、蛋白芯片、生物信息学等,以及蛋白质组学在病原微生物的鉴定、耐药机理、致病机制和疫苗方面应用进展。

蛋白质组学在银屑病研究中的应用

蛋白质组学作为一门新学科和研究手段,近年来已被广泛应用于生命科学的各个领域。随着人类基因组计划的完成,为进一步鉴定基因编码产物在生命活动中的调控作用,蛋白质组学也被医学界广泛应用。本文就蛋白质组学在银屑病发病机制等方面的研究应用作一综述。

水培法快速繁育爪哇三七CEV指示植物

柑桔裂皮病类病毒(Citrus Exocortis Viroid即CEV)是柑桔裂皮病的病原。柑桔裂皮病已成为我国柑桔主要病害之一。目前用来鉴定CEV的方法主要有指示植物法,双相凝胶电泳和核酸分子杂交法等。指示植物爪哇三七(Gynura aurantiaca DC)是鉴定CEV的常用指示植物之一,属菊科的草本植物,一般用扦插砂培法繁育,成活生根后移栽,供试验用。这种方法生根较慢、繁育系数小,往往不能满足较大需要量。本文介绍快速繁育爪哇三七的水培法,可以弥补砂培法的不足。

DMSO处理后中国仓鼠卵巢细胞的蛋白质组变化分析

在培养基中添加二甲基亚砜(DMSO)可使基因工程中国仓鼠卵巢细胞(CHO)外源蛋白乙肝表面抗原(HBsAg)的比生产速率提高4倍以上.为了进一步研究DMSO的作用机理,采用双相凝胶电泳技术分离在培养基中添加1.5%的DMSO后CHO细胞的总蛋白,胶态考马斯亮蓝G-250染色,GS-800凝胶扫描仪获取凝胶图像,并用PDQUEST软件分析,测得每张图谱平均斑点数量为1852±123,以其中一块胶为参考胶进行4块胶间的斑点匹配,其平均匹配的点数达1326±100,平均匹配率为71.6%以上.通过分析得到18个蛋白质点在添加了DMSO后表达量有明显变化(其中12个蛋白表达量明显降低,6个蛋白表达量明显增加.用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其胶内酶解后的肽质指纹谱图和串级质谱图,用GPS软件查询NCBI数据库进行了鉴定.鉴定结果表明,这些差异蛋白中一些是与细胞周期有关的蛋白,一些是与细胞能量代谢相关的蛋白,还有一些是与蛋白翻译后修饰有关的酶,这些结果进一步深化了对DMSO提高CHO细胞表达HBsAg的机理的理解.