双相沉降法重构同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原的制备及细胞相容性

背景:同种异体脱钙颗粒骨的重构塑型是目前材料开发的热点研究,但至今仍未找到理想的方法。目的:采用双相沉降法用Ⅰ型胶原将同种异体脱钙颗粒骨黏合制备成重构同种异体骨,并体外考察其与骨髓间充质干细胞的生物相容性。设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-09/12在山西省医用组织库完成。材料:成年健康Wistar大鼠18只。Ⅰ型胶原为美国Sigma公司生产。方法:取10只大鼠四肢骨,制备同种异体脱钙颗粒骨,用双相沉降法将Ⅰ型胶原和同种异体脱钙颗粒骨制备成凝胶样复合体;取8只大鼠股骨,分离培养骨髓间充质干细胞;取第5代细胞,分别与同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原、同种异体脱钙颗粒骨共培养,另以单纯骨髓间充质干细胞为空白对照组。主要观察指标:双色流式细胞仪分析细胞表型特征。复合培养第7天倒置显微镜观察细胞的黏附和生长状况。复合培养第5天扫描电镜观察同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原的表面结构和细胞生长情况。共培养第4,7天时收集并计数细胞量,用全自动生化分析仪测定碱性磷酸酶含量。结果:①细胞呈CD45-CD90+CD44+CD71+,符合骨髓间充质干细胞表面抗原特征。②共育7d时,倒置显微镜观察各组细胞形态无明显差异,生长状态良好。③共育4,7d时,活细胞数和碱性磷酸酶活性测定结果显示,同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原组显著高于同种异体脱钙颗粒组和空白对照组(P<0.01)。④扫描电镜观察重构同种异体骨由胶原联结成团块状,表面粗糙。同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原组共育5d时,细胞紧密贴附于材料表面,有长突起伸入材料内部;同种异体脱钙颗粒组细胞贴附较少。结论:双相沉降法制备的重构同种异体骨(同种异体脱钙颗粒骨/I型胶原)具有良好的细胞相容性。