应用双向电泳、免疫印迹和质谱技术筛选子宫内膜异位症标志物

目的:寻找子宫内膜异位症标志物。方法:提取子宫内膜异位症和非内膜异位症子宫在位内膜总蛋白后,用双向电泳技术进行分离,Phoretix2D软件分析凝胶图像,经数据库查询初步鉴定差异表达蛋白质。卵巢子宫内膜异位症(巧克力囊肿)组织总蛋白双向电泳后转膜,用患者血清和正常血清作为一抗行Westernblot检测,比较杂交蛋白点的差异,取差异点用MALDI-TOF-MS分析,根据其肽质量指纹图谱进行数据库查询,鉴定抗原。结果:经优化条件,获得了内膜异位症和对照组的在位内膜总蛋白分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,并分析出11个差异点。利用Westernblot方法比较正常人血清和患者血清与子宫内膜异位症总蛋白的杂交点,取其中3个差异点测质谱分别为波形蛋白、β-肌动蛋白、ATP合成酶β亚单位。结论:子宫内膜异位症在位内膜蛋白质表达谱与非内膜异位症者相比发生了变化,抗子宫内膜抗体可能针对波形蛋白、β-肌动蛋白、ATP合成酶β亚单位而产生。

应用双向电泳、免疫印迹和质谱技术筛选乳腺癌相关抗原

目的:筛选乳腺癌相关抗原。方法:提取乳腺癌T-47D细胞株总蛋白,采用双向电泳技术进行分离后转膜,分别采用乳腺癌患者血清和对照血清作为一抗进行Western blot分析,比较杂交蛋白点的差异,取差异蛋白点行液相色谱串联质谱分析并通过数据库查询,鉴定抗原。结果:筛选出10个差异蛋白,取其中3个仅与乳腺患者血清反应的蛋白行质谱分析显示,这3个蛋白分别为脯氨酰-4-羟化酶β亚基、人类真核翻译延伸因子1γ、磷酸甘油酸变位酶1。结论:成功鉴定了3个可能的乳腺癌相关抗原。

梭子蟹过敏原致敏组分的分析研究

目的应用免疫印迹(Western blotting)的方法分析梭子蟹[Portunus pelogicus(Linnaeus)]的致敏组分,为蟹过敏原的纯化和标准化变应原疫苗的研制提供理论依据。方法取常规方法制备的梭子蟹浸出液,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离,用考马斯亮蓝染色分析其抗原蛋白的组分,同时用对蟹过敏的病人血清进行免疫印迹。结果SDS- PAGE显示梭子蟹可辨有19条蛋白带,分子量在13kD-90kD之间,其中主带有9条,分子量是20.9kD、24.2kD、27.1kD、29.2kD、33.7kD、38.9kD、48.7kD、74.7kD、89.1kD。Western blotting结果表明,16例蟹过敏患者血清全部呈阳性反应,浸出液中共有5条致敏条带,其中分子量在74.4kD、48.7kD的是主要致敏组分,阳性反应率均为100%。结论梭子蟹74.4kD和48.7kD组分为主要过敏原。

miRNA-181b在氧-糖剥夺致N2A细胞缺血损伤中的作用及对热休克蛋白A5表达的调节

目的探讨miR-181b在氧糖剥夺(OGD)致N2As神经瘤细胞缺血损伤中的作用,及其对热休克蛋白(HSP)A5表达的调节。方法应用N2A细胞OGD模型模拟神经细胞缺血损伤,MTT比色法检测N2A细胞生存率,免疫印迹法检测HSPA5蛋白表达水平,实时定量PCR法检测miR-181b和HSPA5 mRNA表达水平,荧光素酶报告基因技术检测miR-181b对HSPA5 mRNA的直接调控作用。结果 miR-181b在OGD致N2A细胞缺血损伤中表达水平明显降低(n=5);在OGD致N2A细胞缺血损伤过程中,通过上调或抑制miR-181b的表达水平可以显著影响N2A细胞的生存率(n=6);而在非OGD条件下,miR-181b表达水平的改变对N2A细胞活力无影响;miR-181b表达水平的改变可显著影响HSPA5蛋白表达水平(n=3),而非HSPA5的mRNA水平;共转染miR-181b前体(premiR-181b)或miR-181b抑制剂(anti-miR-181b)可显著抑制或增高含有HSPA5 mRNA 3’-UTR的荧光素酶报告基因的活性(n=5)。结论 miR-181b通过负性调节HSPA5的蛋白表达水平,在OGD致N2A神经细胞缺血性损伤中发挥重要作用。

信号蛋白质14-3-3ζ的高效融合表达和鉴定

目的 利用分子克隆技术在原核细胞中研究 1 4-3 -3ζ蛋白的表达。方法 1 4-3 -3ζ c DNA经测序后 ,亚克隆至 p BK-CMV表达载体 ,转化大肠杆菌 BL2 1菌株 ,筛选阳性克隆 ,经异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。结果 经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)和蛋白印迹 (Western blot)分析 ,表达的融合蛋白相对分子质量为 3 2 0 0 0左右 ,能与 1 4-3 -3ζ蛋白特异性多克隆抗体发生免疫结合反应。结论 人 1 4-3 -3ζ蛋白在原核细胞中有大量表达 。

内皮素-1在烫伤大鼠脑血管损伤中的表达

目的探讨内皮素-1(ET-1)在烫(烧)伤大鼠脑血管损伤的表达及其作用。方法应用组织学方法观察8只烫伤大鼠脑基底动脉组织结构的变化;应用RT-PCR测定48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA的表达;应用Western blotting分析48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1的表达;应用放射免疫分析检测48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1水平的变化。结果烫伤大鼠脑基底动脉呈现病理学组织结构变化;烫伤后3h大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA表达较正常对照组开始升高,6h达高峰;烫伤后6h大鼠脑基底动脉ET-1表达较正常对照组增强,12h达高峰;烫伤后各组大鼠脑基底动脉ET-1水平较正常对照组明显升高,6h达高峰。结论烫(烧)伤可诱发大鼠脑血管ET-1表达增加,增加表达的ET-1可能与烫(烧)伤大鼠脑血管损伤的病理发生有关。

人脂皮素-1重组蛋白的表达与鉴定

为了获得有免疫原性的人脂皮素 -1 ( lipocortin-1 ,LC-1 )蛋白 ,以便疫动物获得抗体 ,建立了免疫分析方法 ,而且更深入地探讨 LC-1抗炎机制及其在临床上的应用。采用基因工程的方法进行重组人 LC-1的原核表达并鉴定 ,主要结果如下 :( 1 )从 U93 7细胞中提取总 RNA,以此为模板行反转录 PCR,成功地扩增了 1 0 38bp的人 LC-1 c DNA基因 ,并将此基因全长克隆入 p UC1 8载体 ,经测序分析证实克隆序列与文献报道的序列基本一致 ;( 2 )成功地构建了原核表达质粒 p BV2 2 0 / LC-1 ,并在大肠杆菌中实现表达。经 SDS-PAGE电泳和 West-ern免疫印迹分析 ,证实重组菌产生 37k D的表达产物 ,且此蛋白可与 LC-1抗体特异结合。实现了人 LC-1基因的克隆及原核表达 ,获得了有免疫学活性的 LC-1 ,为

代谢综合征患者血浆网膜素1水平与HDL亚类分布的相关性分析

目的探讨代谢综合征(MS)患者血浆网膜素1(Omentin-1)水平对高密度脂蛋白(HDL)亚类分布的影响。方法收集在南华大学附属医院就诊的MS患者102例和对照组81例的血样,采用全自动生化分析仪测定血脂浓度及载脂蛋白含量,酶联免疫吸附法测定Omentin-1的含量,双向电泳-免疫印迹法测定人血浆HDL亚类的相对含量。按Omentin-1浓度均值加减去一个标准差作为分割点,将MS患者分为3组:低Omentin-1组(Omentin-1≤9.10μg/L)、中Omentin-1组(9.10μg/L<Omentin-1<26.68μg/L)、高Omentin-1组(Omentin-1≥26.68μg/L)。结果随着Omentin-1浓度的降低,MS患者血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及ApoB100/AⅠ和LDLC/HDLC比值均显著性增高(P<0.05或P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、ApoAⅠ含量显著降低(P<0.05或P<0.01)。与低Omentin-1组相比,高Omentin-1组中小颗粒的preβ1-HDL和HDL3b含量显著下降(P<0.05或P<0.01),而大颗粒的HDL2a含量显著上升(P<0.05)。结论 MS患者血浆Omentin-1水平降低,且HDL颗粒呈变小趋势,低水平的Omentin-1可能与HDL亚类分布异常和血脂紊乱有关。

食品中金刚烷胺残留检测方法新进展

金刚烷胺是一种抗病毒药物,滥用后会对消费者健康构成威胁。尽管包括中国和美国在内的许多国家都禁止在家畜和家禽生产中使用金刚烷胺,但目前金刚烷胺仍在被非法使用。本综述简要介绍了金刚烷胺的理化性质、危害、检出事件、检测标准和检测方法。传统检测方法,例如高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、酶联免疫吸附法、免疫层析法以及化学发光免疫分析法等现在已经被广泛用于检测金刚烷胺,基于抗原抗体反应的新型免疫分析法和基于金刚烷胺结构特点的分子印迹新方法正在受到越来越多的关注,有望在将来得到应用。

17-β-雌二醇对凝血酶诱导血管平滑肌细胞增生和c-fos、bcl-2蛋白表达影响

目的通过建立凝血酶(T)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增生模型,观察17-β-雌二醇(E_2)对 T 诱导的VSMC 增生的影响,并进一步观察其对 c-fos 蛋白和 bcl-2蛋白的表达有何作用,旨在认识 E_2作用的分子机制。方法以细胞计数法和流式细胞仪 DNA 含量测定,细胞周期分析的方法观察 T 及 E_2对 VSMC 增生和 DNA 合成的影响。免疫印迹法(Western blot)观察 T 及 E_2等各处理因素作用1小时及3天后,c-fos 蛋白和 bcl-2蛋白的变化情况。结果 10^(-9)～10^(-7)M 的E_2呈浓度依赖性地抑制2u/ml T 诱导的细胞增生和 DNA 合成作用(P<0.01)。各处理因素作用1小时后,T 能显著促进 c-fos蛋白的增加。各浓度的 E_2能显著抑制 T 的促 c-fos 蛋白增加作用,作用3天后,c-fos 蛋白含量各组差异无显著性。各处理因素作用1小时后,bcl-2蛋白无显著变化,作用3天后,T 能显著促进 bcl-2蛋白的增加。各浓度的 E_2能显著抑制这种增加。上述各项指标中,雌激素受体(ER)拮抗剂 tamoxifen(TAM)(10^(-6)M)能部分阻断10^(-7)M E_2的作用,差异有显著性。结论 E_2能抑制 T 诱导的 VSMC 增生,这可能与其抑制 c-fos 蛋白和 bcl-2蛋白表达有关,且该作用至少部分通过 ER 介导。

盐酸克伦特罗残留检测方法简介

盐酸克伦特罗,俗称＂瘦肉精＂,目前,国内外检测其残留的方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱-质谱法（GC-MS）、毛细管区带电泳法（CE）、免疫分析技术（IA）和生物传感技术等方法。

冠心病患者血清HDL亚类组成的研究

目的 研究冠心病患者 HDL亚类组成及相对含量的变化。方法 采用双相电泳 -免疫印迹法分析了 83例冠心病患者及 72例正常人血清 preβ- HDL及α- HDL各亚类含量。结果 冠心病患者血清中 preβ1 -HDL ,HDL3 b,HDL3 c水平显著升高 (P<0 .0 0 1) ,HDL2 b显著减少 (P<0 .0 0 1)。冠心病患者中男性 preβ1 - HDL及HDL3 b水平显著高于女性 (P<0 .0 5 ) ,HDL2 b含量则显著低于女性 (P<0 .0 1)。正常对照中男性 HDL3 b显著高于女性 (P<0 .0 5 ) ,preβ1 - HDL 较女性有升高趋势 ,HDL2 b较女性有减少趋势。冠心病患者血清中 TG浓度与 preβ1 -HDL (P<0 .0 1) ,HDL3 b(P<0 .0 1)显著正相关 ,与 HDL2 b(P<0 .0 1)显著负相关。 HDL- C水平与 HDL2 b(P<0 .0 1) ,HDL2 a(P<0 .0 5 )显著正相关 ,与 preβ1 - HDL (P<0 .0 1)显著负相关。apo A 水平与 HDL- C水平与 HDL2 b(P<0 .0 1) ,HDL2 a(P<0 .0 5 )显著正相关 ,与 HDL3 a(P<0 .0 1)显著负相关。结论 冠心病患者血清中 preβ1 - HDL,HDL3 b,HDL3 c水平显著升高 ,HDL2 b显著减少 ,提示其 HDL 颗粒有变小的趋势。而且正常人 ,特别是冠心病患者男性 HDL颗粒较女性为小 ,提示性别差异可能与血清 HDL亚类组成有关。

冠心病患者冠脉狭窄程度与血清HDL亚类组成的关系

目的 研究冠心病 (CHD)患者冠脉狭窄程度与 HDL 亚类组成的关系。方法 采用双相电泳 -免疫印迹法检测 5 1例 CHD患者及 5 6例正常人血清 preβ- HDL 及 α- HDL 各亚类的组成 ,并分析冠脉狭窄程度与各影响因素的相关关系。结果 CHD患者血清 HDL 颗粒有变小的趋势 ,并且随冠脉病变程度的增加 ,小颗粒的 preβ1 -HDL、HDL3b水平逐渐升高。而大颗粒的 HDL2 b水平却呈显著递减式减少 (P<0 .0 0 1 ) ,冠脉狭窄程度记分 (CSS)与血清中 preβ1 - HDL(P<0 .0 1 ) ,HDL3a(P<0 .0 5 ) ,HDL3b(P<0 .0 1 )呈正相关 ,与 HDL2 b(P<0 .0 1 )呈负相关。多元逐步回归分析结果显示 ,apo B1 0 0、HDL2 b、TG、HDL- C、TC/ HDL C、apo A 都是 CHD的独立危险因素。结论 CHD患者冠状动脉病变严重程度与 HDL

成都地区151例健康成人血清HDL亚类组成的研究

目的 研究健康成人 HDL亚类组成的相对含量及年龄、性别对 HDL亚类组成的影响。方法 采用双相电泳 -免疫印迹法分析了 15 1例健康成人血清 preβ- HDL及α- HDL各亚类含量。结果 健康成人血清 preβ1 -HDL、preβ2 - HDL、HDL3c、HDL3b、HDL3a、HDL2 a与 HDL2 b含量分别为 6 .11%、4 .74 %、5 .97%、11.70 %、2 0 .2 7%、2 1.85 %和 2 9.19%。随年龄增长 ,健康成人血清中 preβ1 - HDL含量逐渐升高 ,HDL2 b含量逐渐降低 ,其中男性 5 0～5 9岁和≥ 6 0岁组 ,女性≥ 6 0岁组 preβ1 - HDL含量显著高于 <4 0岁组 (P<0 .0 5 ) ;男性及女性 5 0～ 5 9岁和≥ 6 0岁组 HDL2 b含量显著低于 <4 0岁组 (P<0 .0 1)。女性血清中 preβ1 - HDL含量较男性显著降低 ,而 HDL2 b含量显著升高(P<0 .0 1)。相关分析发现 ,健康成人血清中 preβ1 - HDL含量与 BMI、年龄及 TG水平呈显著正相关 (P<0 .0 1) ,HDL2 b含量与年龄 (P<0 .0 1)、TG水平 (P<0 .0 5 )、apo B10 0水平 (P<0 .0 5 )呈显著负相关 ,与 HDL - C水平呈显著正相关 (P<0 .0 1)。结论 随着年龄的增长 ,健康成人血清 HDL 亚类颗粒呈逐渐变小的趋势 ,且男性 HDL 颗粒较女性小 。

代谢综合征患者血浆甘油三酯水平对HDL亚类分布的影响

目的探讨代谢综合征(MS)患者血浆甘油三酯(TG)水平对高密度脂蛋白(HDL)亚类分布的影响。方法选取在南华大学附属第一医院就诊的MS患者血样,全自动生化分析仪测定血脂含量及载脂蛋白浓度,根据美国国家胆固醇教育计划NCEP ATP-Ⅲ文件,将MS患者按TG浓度分4组,即TG<1.69 mmol/L、1.69mmol/L≤TG<2.25 mmol/L、2.25 mmol/L≤TG<5.64 mmol/L、TG≥5.64 mmol/L,采用双向电泳-免疫印迹检测法测定MS患者和99例正常人血浆HDL亚类的相对含量。结果与对照组相比,MS患者血浆总胆固醇(TC)、TG、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、载脂蛋白B100(Apo B100)、preβ1-HDL、HDL3b含量及Apo B100/AⅠ和LDLC/HDLC比值均显著性增高(P<0.05或P<0.001),HDLC、Apo AⅠ、HDL2b、HDL2a显著降低(P<0.05或P<0.001)。并且随着血浆TG水平的升高,小颗粒的preβ1-HDL、HDL3a和HDL3b含量升高,而大颗粒的HDL2b和HDL2a含量降低。结论MS患者HDL亚类分布异常,小颗粒的preβ1-HDL和HDL3b含量升高,而大颗粒的HDL2b和HDL2a含量降低,血浆TG含量变化可能是影响MS患者HDL亚类异常的因素之一。

化湿行瘀清热方剂对口腔扁平苔藓患者唾液中差异蛋白的影响

目的:筛选鉴定口腔扁平苔藓(OLP)治疗前后唾液中的差异蛋白,探讨化湿行瘀清热方剂对口腔扁平苔藓患者唾液中差异蛋白的影响。方法:收集OLP患者化湿行瘀清热方剂治疗前后的唾液,提取唾液总蛋白,应用双向荧光差异凝胶电泳和液相色谱-质谱联用技术筛选鉴定差异蛋白,蛋白质印迹法检测差异蛋白的表达情况。结果:筛选鉴定出OLP患者化湿行瘀清热方剂治疗前后6种差异蛋白:分泌型IgA、血清白蛋白、IgM、唾液淀粉酶、碳酸酐酶6、锌α2糖蛋白。OLP患者治疗后较治疗前唾液中IgA表达量升高,血清白蛋白、IgM、碳酸酐酶6和锌α2糖蛋白治疗后较治疗前表达量下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 :OLP患者化湿行瘀清热方剂治疗前后唾液中存在差异蛋白,并可能在OLP的发生发展中起着重要作用。

代谢综合征患者FGF21水平与HDL亚类分布的关系

目的 探讨代谢综合征(MS)患者成纤维细胞生长因子21(FGF21)水平与高密度脂蛋白(HDL)亚类分布的关系。方法 选择2017年10月—2018年12月本院收治的40例代谢综合征患者作为研究对象(MS组),选择同期正常体检者37名作为对照组,采用全自动生化分析仪检测血脂水平,ELISA法检测FGF21水平,双向电泳-免疫印迹检测法检测HDL亚类分布情况。依据MS组FGF21均值±标准差将其分成三组,即低FGF21组(≤170.54 pg/ml)、中FGF21组(170.54 pg/ml<FGF21<346.34 pg/ml),高FGF21组(≥346.34 pg/ml)。结果 MS组与正常对照组相比,FGF21水平明显升高(P<0.01),空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白B100(apo B100)及apo B_(100)/载脂蛋白A-I(apo A-I)比值明显升高,而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、apo A-I含量明显降低(P<0.01)。与正常对照组相比,MS患者血清preβ_1-HDL、HDL_(3b)含量明显升高(P<0.01),HDL_(2b)、HDL2a含量明显降低(P<0.01)。与低FGF21组相比,中FGF21组preβ_1-HDL、HDL_(3b)增多,HDL_(2b)减少;与低FGF21组相比,高FGF21组preβ_1-HDL、HDL_(3b)增多,HDL_(2b)、HDL2a减少。MS患者FGF21水平与FPG、TG正相关(P<0.05),与HDL-C负相关(P<0.05)。结论 MS患者FGF21水平升高,小颗粒的preβ_1-HDL、HDL_(3b)含量升高,而大颗粒的HDL_(2b)、HDL2a含量降低。随着FGF21水平的升高HDL亚类有变小的趋势,提示HDL亚类的成熟过程受到阻碍。

代谢综合征患者血浆HDL亚类组成及与甘油三酯的相关性

目的探讨代谢综合征（metabolicsyndrome，MS）患者血浆高密度脂蛋白（highdensitylipoprotein，HDL）亚类含量变化及与甘油三酯水平的关系。方法采用双向电泳一免疫印迹检测法测定352例MS患者和187例正常人血浆HDL亚类的相对含量，全自动生化分析仪测定血脂含量，ELISA法检测载脂蛋白浓度。结果与对照组相比，MS患者血浆甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）、栽脂蛋白B100（ApoBl00）、pre^l—HDL、HDL，。含量及ApoBl00／A1和LDLC／HDLC比值均显著性增高，HDLC、ApoAl、HDL2h、HDL，。显著降低（P〈0．001）。根据ATP11I文件，将MS患者按TG浓度分4组，即正常组（〈1．7mmo^L）、临界高组（1．7～2．3mmol／L）、高组（2．3～5．69mm01／L）、极高组（≥5．7mmol／L），随血浆TG水平的升高，小颗粒的pre[31．HDL、HDL。和HDL。含量逐渐升高，而大颗粒的HDL2。和HDL：。含量逐渐降低。结论代谢综合征患者血浆HDL亚类颗粒有变小的趋势，并且随着TG水平的升高，HDL颗粒减小更显著。