NOD小鼠胰岛分离与纯化的方法研究

目的 :研究非肥胖性糖尿病 (NOD)小鼠胰岛分离与纯化的方法。方法 :采用改良的胰导管逆行灌注胶原酶静止消化胰腺 ,分离成年NOD小鼠胰岛 ,不连续密度梯度Ficoll液 (2 5 % ,2 3% ,2 0 5 % ,11% )离心、纯化胰岛。用双硫棕 (Dithizone ,DTZ)对胰岛进行特异性染色 ,以葡萄糖刺激胰岛素释放检测胰岛功能。结果 :不同浓度 (0 5mg·ml-1,1mg·ml-1,2mg·ml-1)的胶原酶在不同时间 (2 0min ,4 0min ,6 0min)内静止消化胰腺后收获的胰岛数量和胰岛活性不同 ,采用 1mg·ml-1浓度的Ⅺ型胶原酶消化 4 0min后效果最好 ,平均能得到 (195± 8)个胰岛 /胰腺 ,活性 >90 % ,纯度 >90 %。DTZ染色后胰岛呈红色 ,形态完整。高糖刺激后胰岛素释放量为低糖刺激后的 2倍。结论 :改良的胰导管逆行灌注胶原酶静止消化NOD鼠胰腺 ,及不连续密度梯度Ficoll液纯化胰岛的方法 ,可获得数量较多 ,纯度较高和功能较好的胰岛。