人双突变型低氧诱导因子1α腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建人双突变型HIF-1α-Ala402-Ala564腺病毒表达载体,研究人双突变型低氧诱导因子1α基因对冠心病的血管新生作用。方法在业已完成的pShuttle2-HIF-1α-Ala564的基础上,用PCR定点突变的方法将其第402位脯氨酸密码子CCA突变为丙氨酸密码子GCA,构建成双突变HIF-1α真核表达载体pShuttle2-HIF-1α-Ala402-Ala564,通过体外连接法与线性化的腺病毒骨架质粒连接,重组成pAdeno-HIF-1α-Ala402-Ala564腺病毒质粒,经酶切及测序鉴定正确后,包装成为重组Adeno-HIF-1α-Ala402-Ala564腺病毒。结果经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功。结论成功构建重组腺病毒Adeno-HIF-1α-Ala402-Ala564(双突变型),为冠心病的突变型HIF-1α基因治疗研究奠定基础。

双突变型小鼠细胞免疫功能观察

本文结果表明双突变型小鼠(bg/nu)脾细胞分泌IL-2的能力明显低于C_(57)BL(?)6(?)常鼠),高于Balb/c(nude)鼠;IFNr产生能力明显低C_(57);NK活性明显低于C_(57)和Balb/c。还可见从第四周龄起脾细胞即具有产生淋巴因子能力,并出现NK活性,且随年龄增长有所增强,但个体差异较大。