枯草芽孢杆菌双精氨酸转运系统TatA_y蛋白的溶液结构（英文）

存在于细菌和植物叶绿体中的双精氨酸(Tat)蛋白质转运系统能将底物蛋白以折叠的状态进行跨膜转运.该系统中的单次跨膜膜蛋白Tat A通过自身寡聚形成转运底物蛋白的通道.该文应用液体核磁共振方法解析了枯草芽孢杆菌Tat Ay蛋白在十二烷基胆碱磷酸胶束中的结构,它是由一个跨膜螺旋(TMH)和一个两亲性螺旋(APH)构成的L型结构.通过与已经报道的枯草芽孢杆菌Tat Ad蛋白的结构比较,该文能够鉴定出参与维持L型构象的重要氨基酸残基,并指出了Tat A蛋白家族中若干较为保守的结构特征.在此基础上,该文讨论了保守残基在Tat A通道形成过程中可能发挥的作用.

El Tor霍乱弧菌双精氨酸转运系统功能单位的分析研究

本文旨在分析El Tor霍乱弧菌双精氨酸转运(Tat)系统的基因簇构成,对其功能进行分析,确定其最小功能单位。通过与大肠埃希菌Tat系统基因簇的基因同源性比较,推测霍乱国际测序标准株N16961的Tat系统基因簇构成;分别对霍乱弧菌Tat系统的基因簇进行单基因缺失、双基因缺失和全基因缺失,建立缺失株和回补株,并与野生株进行表型比较,进一步分析霍乱弧菌Tat系统的基因构成和最小功能单位。结果显示,霍乱弧菌Tat系统基因簇由tatA、tatB、tatC、tatA_2 4个基因构成,其中tatA、tatB和tatC基因位于霍乱弧菌Ⅰ号染色体,tatA_2基因位于霍乱弧菌Ⅱ号染色体。tatB和tatC基因缺失影响霍乱弧菌Tat系统功能,tatA或tatA_2单基因缺失后均可基本保持Tat系统功能,但同时缺失则导致菌株Tat系统功能丧失。提示霍乱弧菌Tat系统最小功能单位是tatA-tatB-tatC或tatA_2-tatB-tatC,tatA与tatA_2功能重复。

双精氨酸转运系统是布鲁氏菌重要的抗胁迫和毒力决定因子

布鲁氏菌病是人、家畜等哺乳动物感染布鲁氏菌而导致的重要的人兽共患病,在世界范围内多有发生。此病不仅给养殖业带来严重的经济损失,还有引发严重公共卫生问题的风险。布鲁氏菌可通过呼吸、进食等途径进入机体,随后被巨噬细胞所吞噬;它是典型的胞内菌,可以在巨噬细胞中存活并复制,进而可以长期存在于体内。

运用绿色荧光蛋白探讨肉葡萄球菌双精氨酸分泌途径

根据肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)TM300的基因组序列设计引物,经PCR扩增得到其tufA基因的启动子Peftu片段与大肠杆菌–葡萄球菌穿梭载体pBT2-Tat-GFP连接,构建了穿梭质粒pBT2-ETG.结果表明,穿梭质粒pBT2-ETG成功地转入大肠杆菌与肉葡萄球菌宿主中稳定表达具有活性的绿色荧光蛋白GFP,并被转运到肉葡萄球菌宿主的细胞壁,为进一步研究肉葡萄球菌双精氨酸(Tat)转运系统正确分泌其他外源蛋白奠定了实验基础.

大肠杆菌Tat蛋白质转运体系

Tat是大肠杆菌中能够将折叠蛋白质跨膜转运的体系,其信号肽中含有一个高度保守的双精氨酸模体。Tat体系包括TatA、TatB、TatC和TatE4种蛋白质,它们的复合物在大肠杆菌质膜上形成转运通道。大肠杆菌Tat体系转运的底物蛋白质多为呼吸电子传递链组分,与大肠杆菌的许多生命活动有关。

细菌蛋白质Tat转运系统的研究进展

蛋白质Tat转运系统不同于细菌中普遍存在的Sec转运系统 ,而与植物叶绿体中蛋白质转运的ΔpH依赖系统相似 .通过Tat系统转运的蛋白质底物含有特征性的双精氨酸保守序列核心S/T R R x F L K的信号肽 ,其h区的疏水性低 ,c区有由高赖氨酸、高精氨酸构成的避开Sec系统信号 ,信号肽和成熟蛋白质的组成对蛋白质的转运都有影响 .TatA、TatB、TatC和TatE四种蛋白质参与了大肠杆菌的Tat转运系统 .被转运的底物蛋白质绝大多数为与细菌厌氧呼吸有关的含氧化还原辅因子的酶 ,并以折叠形式转运 .

双精氨酸转运(Tat)系统及其在大肠杆菌分泌表达重组蛋白中的应用

常见的分泌途径(Sec途径)是细菌中蛋白分泌跨膜转运的主要途径,而双精氨酸转运(Tat)则是另外一个蛋白分泌跨膜转运系统,该系统的特征是在分泌蛋白的信号肽中含有一个高度保守的双精氨酸基序。与Sec途径相比,Tat系统的显著优点是它只分泌已正确折叠的蛋白,而未正确折叠的蛋白则不能通过该系统分泌,这样就保证了分泌产物在结构上的正确性。因此,研究利用Tat信号肽牵引重组蛋白通过Tat系统进行分泌跨膜转运在重组蛋白的表达方面具有很好的应用前景。

肠侵袭性大肠埃希菌Tat蛋白运输系统与其生理功能关系研究

目的构建TatABC基因缺失株,并探讨其与肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)生理功能的关系。方法利用一步法基因缺失方法,敲除EIEC菌株的TatABC基因,探索该基因对EIEC形态、生长、生化及跨膜转运等生理功能的影响。结果TatABC基因缺失株的EIEC在镜下呈链状排列,在LB培养基上生长显著变慢;生化反应无明显变化;在厌氧条件下,由于不能转运TMAO还原酶,失去了在M9培养基上下生长的能力。结论 EIEC的Tat蛋白运输系统与其生理功能密切相关。

肉葡萄球菌tat-gfp融合基因的构建与表达

将PCR扩增的肉葡萄球菌铁离子过氧化物酶基因(fepB)的双精氨酸转运(Tat)信号肽DNA序列与绿色荧光蛋白基因(gfp)亚克隆到pCX9质粒中构建可表达的tat-gfp融合基因,再将形成的pCX19-Tat-GFP质粒电转化转入肉葡萄球菌宿主中。提取阳性克隆子质粒进行酶切验证,表明表达载体pCX19-Tat-GFP成功地构建并转化。用木糖诱导重组菌株后,分别使用荧光显微镜和SDS-PAGE检测外源GFP蛋白的表达分泌情况。结果显示,菌体能够发出绿色的荧光,且蛋白电泳能够在细胞质与细胞壁组分中检测到GFP蛋白条带,表明肉葡萄球菌宿主可以将表达载体pCX19-Tat-GFP表达的GFP在细胞质中正确折叠,并以活性形式转运到细胞壁部分。

枯草芽孢杆菌普鲁兰酶基因的分泌表达及其在粉丝制作中的应用

作者旨在研究枯草芽孢杆菌普鲁兰酶的分泌表达及表达产物的应用性能。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168菌株的普鲁兰酶编码基因BsP分别在大肠杆菌(Escherichia coli)和枯草芽孢杆菌中进行表达,重组酶在两种宿主中均能利用自身结构分泌到细胞外。重组酶分泌到枯草芽孢杆菌细胞外的产物的酶学性质与积累在大肠杆菌胞质内的产物有明显的差异,分泌到枯草芽孢杆菌细胞外的重组酶BsBsP的比酶活为153.7 U/mg,是大肠杆菌胞质内产物的5.5倍。重组酶BsBsP最适pH为6.0,最适温度为45℃。重组酶BsBsP对直链淀粉无降解作用,为I型普鲁兰酶。在以土豆淀粉为原料的粉丝制作工艺中,以重组酶BsBsP水解芡糊淀粉可以有效降低粉丝断条率。枯草芽孢杆菌普鲁兰酶可利用自身结构实现高效分泌表达,重组酶适用于以淀粉为原料的粉丝制作。