双纸片试验检测产ESBL菌的敏感性及特异性研究

目的 :研究双纸片试验检测超广谱β 内酰胺酶 (ESBL)的敏感性和特异性。 方法 :双纸片试验检测已知产ESBL的参考菌株和临床菌株。结果 :纸片间距为 2 0mm时 ,双纸片试验检测产ESBL参考菌株的敏感性为 90 .9% ,间距小于或大于2 0mm时敏感性显著下降。双纸片试验检测临床菌株的阳性检出率为 91.43 % ,特异性均为 10 0 %。 4种抗生素纸片单用对产ESBL菌总的检出率间差异均无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但均低于 4种纸片联用 (P <0 .0 5～P <0 .0 1)。结论 :双纸片试验检测产ESBL菌有较高的敏感性和特异性时 ,纸片间距对其敏感性有较大影响 ,多种抗生素纸片联用可以提高本试验的敏感性 ,因其操作方便 ,成本低 ,易于在临床上推广。

双纸片协同试验检测产ESBLs方法的探讨

目的 选择检测产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)双纸片协同试验最佳条件。 方法 30株临床分离经基因法确定的产ESBLs菌 ,用CTX、CAZ、ATM、FEP药敏纸片与AMC药敏纸片做协同试验 ,纸片之间距离分别选择 10mm、15mm、2 0mm、2 5mm、30mm和 35mm。结果 FEP和ATM与AMC协同试验结果最佳 ,纸片之间距离在 10mm～ 2 5mm时阳性检出率是 10 0 % ;CTX与AMC协同试验结果次之 ,距离在 10mm～ 2 0mm之间时阳性检出率是 96 7% ;CAZ与AMC协同试验结果较差 ,距离在 10mm～ 15mm之间时阳性检出率是 86 7% ,距离在 2 0mm时检测率是 83 3%。结论 双纸片协同试验检测产ESBLs最佳底物是FEP和ATM ,最佳距离是 15mm。

双纸片协同试验在检测产超广谱β-内酰胺酶细菌中的临床应用

用双纸片协同试验检测我院近 6个月来临床标本中产 ESBLS的细菌 ,并探讨双纸片协同试验的最佳方法。结果显示 ,在 2 44株大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中产 ESBLS菌 49株 ,总检出率为 19.6 7% ,另外在嗜麦芽窄食单胞菌检出 5例产 ESBLS株 ,铜绿假单胞菌 ,产气肠杆菌和枸橼酸杆菌各检出 1例产 ESBLS株 ,说明我院产 ESBLS菌株产生较广泛。由于 ESBLS阳性株对临床常用抗生素的耐药率远远高于 ESBLS阴性株 ,使临床治疗面临极大的困难 ,必须引起临床医生和临床微生物室的重视。提示我院双纸片协同试验的最佳底物是 FTX、 ATM和 FEP,最适距离是2 5 mm,该法与 Etest确证试验的阳性符合率为 10 0 % ,因此该法仍为临床微生物室检测 ESBLS的适宜、简便。

3-氨基苯硼酸纸片法检测肺炎克雷伯菌高产AmpC酶

目的建立并评价一种检测肺炎克雷伯菌高产AmpC酶的新方法。方法用3-氨基苯硼酸(APB)双纸片协同法、三维试验和PCR法,对临床分离的头孢西丁耐药的87株肺炎克雷伯菌进行AmpC酶检测,将APB双纸片协同试验检测的结果分别与三维试验和PCR法的检测结果进行统计学分析。结果在87株肺炎克雷伯菌中,APB双纸片协同法、三维试验、PCR法对AmpC酶的检出率分别为48.3%、39.1%、41.4%。APB双纸片协同法与三维试验和PCR法结果的总符合率均为77.0%,Kappa值均为0.54,方法间的一致性较好。如以PCR结果为标准,APB双纸片协同法的敏感性为80.6%,特异性为74.5%,阳性预测值为69.0%,阴性预测值为84.5%。结论 APB双纸片协同试验具有操作简便、结果可靠、无需特殊仪器等优点,可用于AmpC酶常规检测。

EDTA和巯基乙酸钠双螯合剂检测金属β-内酰胺酶的研究

目的探讨EDTA和巯基乙酸钠（sodium mercaptoacetic—acid，SMA）双螯合剂检测金属肛内酰胺酶（metallo—β-lactamase，MBL）的临床应用价值。方法用亚胺培南（imipenem，IPM）（10μg／片）与EDTA（744μg／片）＋SMA（1．8mg／片）双纸片协同试验（double—disk synergy tests，DDSTs）分别检测14株产MBL和15株产非MBL的细菌，并与IPM—EnTA（1860μg／片），IPM-SMA（3mg／片）和头孢他啶（ceftazidime，CAZ）（30μg／片）-EDTA（744μg／片）＋SMA（1．8mg／片）双纸片协同试验（DDSTs）的检测结果进行比较。结果IPM—EDTA＋SMADDSTs可检测出所有产MBL的细菌，且未出现假阳性结果；而IPM—EDTA，IPM—SMA和CAZ—EDTA＋SMADDSTs均存在一定比率的漏检，分剐为14．3％（2／14），7．1％（1／14）和7．1％（1／14），同时IPM—EDTA和IPM—SMADDSTs在检测非MBL均出现6．7％（1／15）的假阳性。结论IPM-EDTA＋SMADDSTs是检测MBL的一种简便可靠的方法，适用于临床微生物实验室。

纸片扩散法检测阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的结果评价

目的评价双纸片扩散确证试验检测阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的可靠性。方法以头孢曲松三维试验为标准,用双纸片扩散确证试验检测阴沟肠杆菌产ESBLs的情况。结果用双纸片扩散确证试验检测为ESBLs阴性的40株阴沟肠杆菌,头孢曲松三维试验检测也均为阴性;双纸片扩散确证试验检测为ESBLs阳性的61株阴沟肠杆菌,用头孢曲松三维试验检测出18株阴性。结论双纸片扩散确证试验检测阴沟肠杆菌的ESBLs敏感性较理想,但易造成假阳性,特异性仅为70.5%。

铜绿假单胞菌耐药性分析及金属酶基因检测

目的分析中南大学湘雅医院临床分离铜绿假单胞菌抗菌药物敏感性及金属酶流行情况,以期指导临床用药。方法收集2010年11月—2011年4月临床分离非重复铜绿假单胞菌200株,所有菌株均经VITEK-2全自动微生物鉴定与药敏试验分析系统进行鉴定和药敏试验。采用双纸片协同试验作为金属酶表型初筛试验,初筛阳性菌株采用聚合酶链反应(PCR)检测IMP、VIM、SPM和NDM4种金属酶基因型以及Ⅰ类整合酶基因。结果 200株铜绿假单胞菌分离自ICU患者55株,占27.5%。药敏试验结果显示,该菌对美罗培南耐药率最低(8.5%),对庆大霉素耐药率最高(38.5%)。6株铜绿假单胞菌金属酶初筛试验阳性,检出率3.0%,经基因检测发现IMP型阳性菌株2株(2株均产IMP-1菌株),未检出VIM、SPM及NDM型金属酶,且这6株铜绿假单胞菌Ⅰ类整合酶基因均为阳性。结论该院产金属β内酰胺酶的铜绿假单胞菌检出率较低,主要金属酶基因型为IMP-1。铜绿假单胞菌耐药仍较严重,但对碳青霉烯类抗生素耐药率低。

阴沟肠杆菌临床分离株对第三代头孢菌素的耐药机制研究

目的探讨阴沟肠杆菌临床分离株对第三代头孢菌素的耐药机制。方法运用双纸片协同试验和正交三维试验检测耐药菌株的产酶情况,通过接合传递试验和质粒谱分析等方法探讨耐药性播散的规律。结果37株耐药菌中,产ESBLs的有21株菌,占56.8%;产去阻遏型AmpC酶的有13株菌,占35.1%;两种酶均阳性的菌株有2株,均阴性的有1株。在同时产两种酶的2株菌中,其中1株菌CH29的两种酶均在质粒上,耐药表型可通过质粒传递到受体菌株大肠埃希氏菌ECNK5449,属于超超广谱β-内酰胺酶(SSBLs)。结论产生ESBLs和去阻遏型AmpC酶是阴沟肠杆菌临床株对第三代头孢菌素耐药的主要机制。发现1株产SSBLs的临床分离株,可能与耐药性的水平传播有关。

肠杆菌科细菌产β-内酰胺酶的研究

目的 研究肠杆菌科细菌产 β-内酰胺酶、超广谱 β-内酰胺酶 (ESBL s)与对头孢他啶 (CAZ)的耐药表型的关系。方法 Nitrocefin纸片检测 β-内酰胺酶的活性 ,双纸片协同试验 (DDST)筛查 ESBL s阳性菌株。结果 2 15株细菌产 β-内酰胺酶的阳性率分别为克雷伯菌属 73%、大肠埃希菌属 81%、肠杆菌属 83% ;对 CAZ的耐药率分别为 5 .3%、3.2 %、10 .9% ;其中对 CAZ的 MIC≥ 2 μg/ ml的比率分别为 2 4.0 %、2 4.5 %、5 8.7% ,DDST测 ES-BL s阳性有 16株 ,仅 2株对 CAZ耐药 ,14株 CAZ的 MIC处于 2～ 16 μg/ m l,大肠埃希菌阳性率最高 ,达 10 .6 %。结论 许多产 ESBL s菌株对 CAZ的 MIC呈敏感或中度敏感 ,大肠埃希菌尤为突出。

三种检测阴沟肠杆菌AmpC酶方法的比较

目的:探讨简便、快速、准确的AmpC酶检测方法。方法:采用表型筛选法、双纸片协同试验和三维试验同时对39株阴沟肠杆菌进行AmpC酶的检测,将前两种检测方法的结果分别与三维试验的结果加以比较。结果:三维试验结果显示39株阴沟肠杆菌中高产AmpC酶的菌株共有10株。表型筛选法特异性为69.0%,灵敏度为90.0%,其阳性检出率显著高于三维试验(P<0.05);双纸片协同试验特异性为93.1%,灵敏度为80.0%,其阳性检出率与三维试验进行比较差异无显著性(P>0.05)。结论:双纸片协同试验具有操作简便、结果可靠等优点,可以替代三维试验在各级医院常规应用。表型筛选法灵敏度高,容易操作,可以在基层医院用于产AmpC酶菌株的筛选。

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药机制探讨

目的探讨耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药机制。方法收集上海交通大学附属第六人民医院2011年1月—2013年12月临床分离到的80株碳青霉烯类抗菌药物耐药的肠杆菌科细菌,采用Vitek Compao60鉴定系统进行细菌鉴定和药物敏感性检测,用纸片扩散法检测细菌对亚胺培南和美罗培南的敏感性,用改良Hodge试验、抑制剂的双纸片增效试验检测碳青霉烯酶表型,用聚合酶链反应(PCR)检测blaKPC、blaIMP、blaOXA23、blaOXA51、blaOXA48、blaVIM、blaNMD。结果 80株菌株对常见多种抗菌药物耐药;改良Hodge试验和硼酸抑制试验与KPC酶检测的一致率分别为47.5%和97.5%;blaKPC、blaIMP、blaOXA23、blaOXA51、blaOXA48、blaVIM和blaNMD的检出率分别为88.75%、5.00%、3.75%、3.75%、0.00%、0.00%和0.00%,所有基因均阴性的检出率为5.00%。结论上海交通大学附属第六人民医院肠杆菌科细菌耐碳青霉烯类抗菌药物的主要机制是携带KPC-2型碳青霉烯酶,硼酸抑制试验能快速、准确地检测出KPC酶。

1株泛耐药肺炎克雷伯菌耐药机制的研究

目的研究1株泛耐药肺炎克雷伯菌(Kpn)的耐药机制。方法用Vitek-2系统进行细菌鉴定,纸片扩散法和肉汤稀释法进行药敏试验;PCR和DNA测序检测β-内酰胺酶基因和7个管家基因,多位点序列分型(MLST)进行7个管家基因的序列分析;改良Hodge试验、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)确证试验、利用抑制剂的双纸片增效试验和改良ESBLs确证试验检测β-内酰胺酶表型。结果该菌株呈泛耐药性,携带KPC-2和CTX-M-15基因,MLST显示ST11型;改良Hodge试验检出碳青霉烯酶;ESBLs确证试验呈假阴性结果,改良ESBLs确证试验呈阳性结果;用3-氨基-苯酚硼酸(APBA)的双纸片增效试验呈阳性结果,显示产KPC型A类碳青霉烯酶。结论该菌株的泛耐药性可能是由于产KPC酶,利用抑制剂的表型试验能简便准确地检出KPC和ESBL。

三种AmpC酶表型检测方法比较

目的对革兰阴性菌产AmpC酶的检测方法进行评价，并寻找一种适合临床常规应用的AmpC酶检测方法。方法对39株耐头孢西丁的革兰阴性菌同时进行改良Hodge试验、三维试验、氯唑西林（CLO）双纸片协同试验和ampC基因聚合酶链反应（PCR）检测，比较4种方法的结果。结果39株革兰阴性杆菌中，改良Hodge试验、三维试验和CLO双纸片协同试验检出产AmpC酶的阳性率分别为38．5％、43．6％和28．2％，3种方法AmpC酶检出率的差异无统计学意义（P〉0．05）。与PCR结果比较，改良Hodge试验特异性为87％，敏感性为75％；三维试验的特异性为78％，敏感性为75％；CLO双纸片协同试验特异性为87％，敏感性为50％。PCR显示ampC基因阳性率为41％（16／39），对16株阳性菌进行ampC基因测序，测序结果与基因数据库内相应的ampC核酸序列比对发现，同源性均在98％～100％之间。结论改良Hodge试验可作为一种操作快速、简便的筛选试验检测革兰阴性菌产AmpC酶的情况，而CLO双纸片协同试验可作为一种操作简便的排除产AmpC酶试验应用于实验室，但在准确性上低于改良Hodge试验。

三种检测AmpC β-内酰胺酶方法的比较及其临床应用

目的:评价表型筛选法和双纸片协同试验检测产AmpC β-内酰胺酶肠杆菌的可靠性与临床应用。方法:采用表型筛选法、双纸片协同试验和三维试验同时对98株肠杆菌进行AmpC酶检测,将2种检测方法的结果分别与三维试验的结果加以比较,并调查了我院呼吸内科肠杆菌中AmpC酶的流行情况。结果:三维试验结果显示98株肠杆菌中高产AmpC酶的菌株共有19株(阴沟肠杆菌16株、弗劳地枸橼酸杆菌2株、产气肠杆菌1株),检出率为19.39％。2种检测方法的敏感性分别为84.2％,94.7％,特异性分别为98.6％,97.3％,与三维试验的总符合率分别为90.8％,91.8％。结论:表型筛选法和双纸片协同试验可以替代三维试验在各级医院常规应用,双纸片协同试验具有操作简便、结果可靠等优点。

PAE-MHT法检测铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶的临床适用性的评估

目的评估铜绿假单胞菌-改良Hodge(PAE-MHT)法对铜绿假单胞菌(PAE)金属β-内酰胺酶(MBLs)检测的临床适用性。方法收集82株临床分离的耐亚胺培南的PAE,通过双纸片协同法、E-test法及PAE-MHT法作为MBLs表型初筛试验,并对几种方法进行比较。聚合酶链反应(PCR)法检测IMP型和VIM型MBLs基因并测序。结果 PAE-MHT法的敏感性、特异性和准确率分别为84.6%,97.2%,97.6%.PAE-MHT法和双纸片协同法、Etest法有非常好的一致性。结论 PAE-MHT法简便、快捷,不失为临床快速筛查非发酵菌产MBLs的一种新方法。

237株ESBLs克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药检验

目的 了解超广谱 β -内酰胺酶 (ESBLs)克雷伯菌和大肠埃希菌的阳性率和耐药性。 方法 应用双纸片协同试验法 ,检测在我院分离到 2 37株克雷伯菌和大肠埃希菌产ESBLs特性。结果 ESBLs总阳性率为 2 3.6 % ,大肠埃希菌ESBLs阳性率为 2 4.5 % ;克雷伯菌ESBLs阳性率为 2 2 .1%。通过缩短纸片间的距离至 16～ 18mm ,在一定程度上 ,提高了该方法的敏感性。结论 我院分离的克雷伯菌和大肠埃希菌ESBLs阳性率较低 ;

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

目的 :进行大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱 β -内酰胺酶 (ESBLs)的检测和耐药性测定 ,为产ESBLs细菌的监控和治疗提供依据。方法 :用双纸片协同试验检测 145株大肠埃希菌和 76株肺炎克雷伯菌ESBLs的产生情况 ,并用VITEK6 0型全自动药敏分析系统和K -B纸片扩散法 ,检测其对多种抗生素的耐药性。结果 :双纸片协同试验检测出所试大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs阳性株分别为 80株 (占 5 5 .2 % )和 35株 (占 46 .1% ) ,其中以头孢三嗪和头孢噻肟为底物检测效果最好。ESBLs阳性株除对亚胺培南高度敏感外 ,对多种抗生素的耐药性明显高于ESBLs阴性株。结论 :头孢三嗪、头孢噻肟可作为本地区检测ESBLs的最佳底物。ESBLs阳性菌对多种抗生素耐药 。

69株大肠埃希菌耐药性分析

目的:了解海岛居民大肠埃希菌对抗菌药物的耐药情况,指导临床合理用药。方法:应用全自动细菌鉴定/药敏分析仪,结合双纸片协同试验法和K-B法,对2004年度收集的69株大肠埃希菌进行药敏试验和产ESBLs细菌的检测。结果:所检菌株对氨苄西林、复方新诺明、哌拉西林耐药率达70%以上;对庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、氨苄西林/舒巴坦耐药率在50%～59.1%;检出产ESBLs菌株21株,检出率为30.4%,产ESBLs菌株的耐药性明显高于非产ESBLs菌株(P<0.05)。结论:大肠埃希菌产ESBLs率高,产ESBLs大肠埃希菌多重耐药严重,对于产ESBLs菌株感染的治疗建议选用美罗培南和阿米卡星。