镍—双缩脲反应测定血清总蛋白质方法学研究

本文探讨了镍—双缩脲反应测定血清总蛋白质的方法,并对其实验条件作了研究.应用本法测定在37℃6分钟即能反应完全,且色泽稳定.批内、天内和天间CV 分别为1.09%、1.76%和2.28%;平均回收率99.8%;线性达150g/L;血清中常见高浓度血红蛋白、胆红素、甘油三酯,葡萄糖,钙、镁和叠氮钠不参与反应,也不干扰显色;与铜—双缩脲反应法和凯氏定氮法比较,相关系数分别为0.9975、0.9979。600例参考值调查为62.8～80.0g/L,男、女间无差异,临床常见疾病观察,与铜—双缩脲法基本一致.本法简便、快速、特异,适宜临床应用.

双缩脲反应测定血清总蛋白方法的标准化

双缩脲法定量测血清总蛋白已有70余年的历史.1974年,美国临床化学协会(AACC)标准化委员会的总蛋白研究组,用双缩脲法进行了血清总蛋白的室间研究.1978年,国际临床化学协会(IFCC)

应用导数分光光度法排除双缩脲反应中溶血干扰

本文采用单波长分光光度计进行导数分光光度测量法,以排除双缩脲反应中溶血的干扰。本法批内CV=2.68%,批间CV=3.92%。方法回收试验的平均回收率97.8%。效果满意,特予介绍。

血清总蛋白双试剂双缩脲法消除脂浊和胆红素的干扰

建立血清总蛋白双试剂双缩脲自动分析法。以氢氧化钠和硫酸钠溶液作第一试剂 ,浓缩双缩脲试剂作第二试剂 ,在自动分析仪上用两点终点法测定。结果 ,在 0 6mol/L氢氧化钠中加入 7mmol/L的硫酸钠使脂浊血清的空白吸光度稳定 ,蛋白质与双缩脲双试剂的反应在 7分钟内完成 ;线性范围 0～ 140g/L ,平均回收率 99 8% ,低蛋白含量和正常蛋白含量的批内CV为 0 5 2 %和 0 40 % ,批间CV为 0 80 %和 0 77% ;双试剂法与参考方法比较 ,r =0 9984,Y=0 982 5X+0 783,t =0 5 2 2 ,P>0 5 ,n=90 ;脂肪乳糜、高胆红素、血红蛋白颜色对测定无干扰。结果表明 :双试剂法能去除样品中脂浊、高胆红素及血红蛋白的干扰 ,具有很好的准确度和精密度 ,适合在自动分析仪上使用。

高速离心去脂对双缩脲法测定总蛋白的影响分析

目的探讨高速离心去除血清标本中大部分甘油三酯成份,消除脂血对双缩脲方法测定总蛋白结果的影响。方法脂血标本在RPM4000条件下离心5min,分离血清,然后将血清分成三组,一组不加处理,为常规测定组,一组在RPM15000离心10min,为离心测定组,另一组用乙醚提取,为乙醚提取测定组,在日立7170A上,分别测定这三组标本,观察测定结果。结果脂血标本在RPM15000离心能有效减少其对总蛋白测定的影响,与乙醚提取法相比,测定结果无显著性差异。结论采用标本离心法可以有效地减少脂血对双缩脲法总蛋白测定的干扰。

双缩脲法测定葡萄酒中的蛋白质

介绍了葡萄酒中蛋白质的特性、来源，并着重介绍了作者多年来试验用双缩脲法测定葡萄酒中的蛋白质的方法，并与其它蛋白质测定法进行了比较。

改良双缩脲双试剂与单试剂法测定脂浊标本血清总蛋白对比分析

目的探讨改良双缩脲双试剂法在全自动生化分析仪中直接测定脂浊标本血清总蛋白。方法用酒石酸作为络合剂防止形成氢氧化铜沉淀,血清空白增加方法的敏感性而同时使脂血症对光普的最小干扰。结果改良双缩脲双试剂法测定脂浊标本血清总蛋白与单试剂法测定结果差异有统计学意义(P<0.001)。结论改良双缩脲双试剂法能有效的清除脂肪的干扰,具有很好的准确度和精密度,适合于自动分析,提高工作效率。

双缩脲试剂对血清铜测定的携带污染探讨

目的:探讨双缩脲试剂对血清铜测定的携带污染问题及处理措施。方法:第一步,取当天患者血清10份(包含线性范围内的高、中、低值)单独测定Cu。第二步,用同样10份血清先测定TP,紧跟着测定Cu。比较两组铜的结果。结果:10对样品d-=111.054,Sd=11.3459,t=30.9523,P<0.01。两组结果的差别有统计学意义。结论:双缩脲试剂对铜的测定有极显著的影响。更改试剂位置;更改清洗程序,增加样品针和比色杯的清洗次数;擦拭样品针;更换比色杯可以有效地改善双缩脲试剂对血清铜测定的携带污染的问题。

蛋白水解液中多肽含量的测定方法

用10%(W/V)的三氯乙酸沉淀蛋白水解液中的大分子蛋白质,经离心过滤后,在上清液中加入双缩脲试剂,于540nm下测定其OD值,继而在Gly-Gly-Tyr-Arg四肽标准曲线上查出样品中的多肽含量。

发酵鱼粉中寡肽检测技术研究

用单宁酸作为发酵鱼粉中水溶性蛋白质的沉淀剂,经飞行时间质谱仪测得滤液中蛋白质分子量在2 047.98 Da以下。用双缩脲反应法可以测出发酵鱼粉中水溶性总肽的含量,用凯氏定氮法可以测出被沉淀的多肽的含量,从而可以计算出发酵鱼粉中寡肽的含量。用该技术测得2 546 Da和1 500 Da的低分子量蛋白的回收率分别为92.42%和5.91%。

鳖甲与醋鳖甲抗肝纤维化活性部位的化学成分比较

目的探讨鳖甲与醋鳖甲抗肝纤维化活性部位的化学成分。方法运用双缩脲反应、紫外分光光度法和高效毛细管电泳法对鳖甲与醋鳖甲活性部位的化学成分进行比较,并对醋鳖甲进行氨基酸分析。结果鳖甲和醋鳖甲活性部位均含多肽,但吸收光谱有一定的差异;毛细管电泳结果表明醋鳖甲所含成分比鳖甲多;醋鳖甲游离氨基酸含量为1.32%,水解氨基酸含量为58.0%。结论鳖甲与醋鳖甲活性部位的化学成分存在明显差异,可为临床选择用药以及进一步研究鳖甲的活性成分提供一定的参考依据。

鸽肉寡肽的制备及分子量分布

以鸽肉为原料,用风味蛋白酶催化水解鸽肉来制备鸽肉寡肽。采用10%(w/v)三氯乙酸沉淀水解物中大分子蛋白质再结合双缩脲试剂来测定水解物中寡肽含量;用单因素实验和正交实验研究水和鸽肉之比、pH、水解温度、水解时间和酶用量对鸽肉水解物中寡肽含量的影响;用液相色谱质谱联用检验寡肽的分子量。以水解液中寡肽含量为衡量因子,通过正交实验优化鸽肉蛋白适宜水解条件。结果表明鸽肉蛋白适宜水解条件为酶解时间3.5h、水解温度50℃、风味蛋白酶添加量2100u/g、水与鸽肉之比5∶1(m/v)、pH6.5,寡肽吸光度值为0.308,其对应寡肽浓度和含量为别为0.056g/mL和28%。

奶粉中低聚肽质量浓度测定方法

以四肽Gly-Gly-Tyr-Arg为标样做标准曲线,用质量浓度为100g/L的三氯乙酸沉淀奶粉中的大分子蛋白质,经离心过滤后,在上清液中加入双缩脲试剂,于540nm下测定其OD值,查标准曲线计算出样品中的肽质量浓度。

血清总蛋白测定的基质效应评价

目的评价14种室间质量评价(EQA)材料和3种市售材料在4个检测系统上测定血清总蛋白的基质效应。方法参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP14-A2指南,以美国临床化学协会(AACC)推荐血清总蛋白双缩脲为参考方法,以4个检测系统为待评方法,评价制备物的基质效应。结果 9种制备物对各系统均无基质效应,1种制备物对所有系统均存在基质效应,其余样本对不同检测系统存在不同程度的基质效应。结论制备物样本的基质效应可影响血清总蛋白测定的准确性和可比性,在临床检测中应重视其对检验结果量值溯源的影响。

高通量筛选地衣芽孢杆菌DW2高产杆菌肽诱变菌株

杆菌肽是一种广泛使用的广谱多肽抗生素,其作为次级代谢产物具有复杂的生物合成过程。以杆菌肽工业生产菌株地衣芽孢杆菌DW2作为研究对象,采用ARTP诱变和基于流式细胞仪的高通量筛选策略,获取杆菌肽高产菌株。通过筛选确定了8#6D、7#5E、6#7E、5#8D和2#5F 5株高产菌株,相对出发菌株分别提高20.9%、20.9%、20.8%、19.7%和22.2%,杆菌肽的最高效价达到912 U/mL。高通量筛选操作简单、安全,结合流式细胞仪高流速分选,可快速实现杆菌肽产量提高。

基于L-苯丙氨酸一步水热合成碳量子点及其对Cu^(2+)的检测

铜是人体中必不可少的微量元素之一,广泛参与人体中多种酶的代谢活动,是人体内继锌、铁之后第三丰富的过渡金属元素,正常成人体内一般含铜为100 mg^200 mg,主要分布在脑、血液和肝脏中.铜在人体生理和病理方面都有着重要作用[1],可维持造血机能、维护毛发正常结构、软化心血管、强壮骨骼、促进生长发育、保证内分泌功能正常等.

采用吸光光度法测试彩绘文物颜料中蛋白质类胶结材料的研究

为了鉴别彩绘文物颜料中的胶结材料,研究中首次基于双缩脲反应并采用吸光光度法测定了蛋白质类胶结材料的存在与含量。以明胶为标准样品,建立浓度与吸光度之间的标准曲线,在0.20%到0.01%浓度范围内明胶蛋白质浓度与吸光度之间呈正比,线性关系良好。测试了盐宗庙彩绘中不同颜料的蛋白质类胶结材料含量,其中绿色颜料蛋白质含量为0.058 9μg/mg,白色地仗蛋白质含量为0.007 9μg/mg,蓝色颜料蛋白质含量为0.261 4μg/mg,并且双缩脲法测定结果与酶联免疫分析结果一致。研究结果表明:基于双缩脲反应的吸光光度法不仅能够快速地测定彩绘颜料中蛋白质类胶结材料,而且具有较高的灵敏度。

交联聚合物中蛋白质含量的测定

交联聚合物中蛋白质含量的测定在生物化学中仍属于尚未解决的问题.本文提出了一种在交联聚丙烯酰胺中测定酪蛋白的简便方法,即:利用双缩脲反应使蛋白质与铜离子络合,含蛋白质的聚合物在高温下灰化,残留物溶于硝酸,通过用原子吸收光谱测定硝酸溶液中的铜离子浓度来测量蛋白质的含量.作为分析化学中蛋白质含量测定的一种新的方法,该技术可用于蛋白质的固定与印迹,以及功能蛋白质组学等领域.

三种脑脊液蛋白质测定方法比较

有文献报道用尿液分析仪法和双缩脲比色法测定脑脊液蛋白质。本组于2003年1月～2006年8月对30例脑脊液标本用双缩脲比色法、磺基水杨酸-硫酸钠比浊法、尿液分析仪法测定蛋白质，发现尿液分析法测定脑脊液蛋白质与化学法（双缩脲比色法、磺基水杨酸比浊法）存在很大差异，而两种化学方法无明显差异。