邻苯三酚红钼络合法与双缩脲比色法测定嘌呤霉素肾病大鼠尿中总蛋白浓度的比较

目的:探讨临床上新近推广的邻苯三酚红钼络合法与双缩脲比色法的相关性和偏倚,旨在评价其测定大鼠尿蛋白的可靠性,以建立一种快速、简便、可靠的大鼠尿蛋白测定方法。方法:收集15例正常对照大鼠以及35例不同时间点嘌呤霉素肾病大鼠24h尿液标本,采用双缩脲比色法和邻苯三酚红钼络合法进行尿总蛋白定量,结果分别采用Pearson相关、Passing-Bablok回归和Cusum方法检测回归偏倚,偏倚分析采用Bland-Altman法。结果:Pearson相关性分析结果显示,邻苯三酚红钼络合法测定值与双缩脲比色法测定值显著相关(r=0.9942,P<0.0001)。Passing-Bablok回归分析显示,邻苯三酚红钼络合法测定值与双缩脲比色法测定值的回归方程为Y=1.0922X-0.3771(Y表示双缩脲比色法,X表示邻苯三酚红钼络合法),线性回归的Cusum检验证实线性回归偏倚无统计学意义(P>0.05),Bland-Altman偏倚分析结果示,邻苯三酚红钼络合法与双缩脲比色法测定值的平均偏倚为-0.1。结论:邻苯三酚红钼络合法具有灵敏度高、重复性好、标本用量少、样品不需要预处理并适用于自动化分析的特点,推荐该法应用于尿量有限的大鼠尿液总蛋白的测定。

双缩脲比色法测定血清总蛋白回收实验的考核探索

目的考核学生生物化学实验结果的准确度。方法通过双缩脲比色法测定血清总蛋白（TP）回收实验来考核学生实验结果的准确度。结果根据回收率、待测血清TP浓度这2个参数对学生实验结果进行评分。结论该方法试剂价廉,操作简便,重复性好,结果准确可靠,能客观地评价学生实验结果的准确度,并易于评价,是一个比较理想的考核方法。

微量双缩脲比色法测定脑脊液总蛋白的方法学研究

基于肽键双缩豚反应的蛋白质测定方法是参考性方法，具有操作简便、试剂单一、特异性高、准确可靠、干扰因紊少等优点。用常规标化双缩腮法测定脑脊液总蛋白时。

双缩脲比色法分析三氯乙酸沉淀乳蛋白效果探讨

通过对双缩脲比色法分析加热条件、不同浓度的三氯乙酸(TCA)沉淀牛乳蛋白的效果,以及pH影响双缩脲比色法分析TCA沉淀牛乳蛋白的效果进行分析。结果表明,采用双缩脲比色法分析TCA沉淀乳蛋白的效果:当使用标准双缩脲试剂时,受TCA浓度的影响较大,需TCA浓度≤15%;当TCA浓度>15%时,需调整pH至11以上;pH≥11时,碱性强度微弱的变化对OD值结果无明显影响;加热煮沸与未加热煮沸对TCA沉淀牛乳蛋白的效果差别无明显规律。

双缩脲比色法测定胸腺素注射液含量的探讨

胸腺素系从动物胸腺组织中提取的一种多肽类物质,具有增强细胞免疫效应。对其制剂胸腺素注射液的含量测定,在国内地方药品标准中,规定采用中国药典附录中的半微量凯氏定氮法。由于该法在操作上比较繁琐,费功耗时工作量较大,鉴于此,我们根据多肽及蛋白质在碱性溶液里,其分子中的肽键可与双缩脲试剂中CU^(++)产生紫红色的反应,且肽键越多反应的颜色越深这一机理,设计采用双缩脲比色法进行测定胸腺素注射液的含量。经过多次反复的试验,结果表明该方法线性关系良好,简便易行。并与凯氏定氮法进行了比较,两法之间无显著性差异,P>0.01。在方法的探讨中我们又将比色法分别以标准曲线法和两点法进行了对比,从测得的结果看,两种比色方法测定的数据极为接近。而两点法较标准曲线法在操作上更为简便,且重复性好。现将结果报告如下。

邻苯三酚红钼络合比色法与双缩脲比色法测定胸腹水蛋白的比较

目的:对邻苯三酚红钼络合比色法与双缩脲比色法测定胸腹水蛋白进行比较。方法:收集130例胸腹水标本,采用邻苯三酚红钼络合比色法检测体系(检测M)和3种双缩脲比色法检测体系(检测C、检测E和检测P)测定胸腹水蛋白。共520个数据,采用单因素多水平方差分析的两两比较的Games-Howell检验;正态分布数据分别采用Pearson相关、非正态分布数据采用Spearman相关分析。偏倚分析采用根据回归方程分别计算3种不同的检测体系在25g/L的浓度的相对偏差及相对偏差的95%可信区间,并以相对偏差和95%可信区间作为评价目标。结果:检测M与检测C、检测E和检测P的测定结果进行配对T检验.P=0.000,表示检测有显著差异;相关性分析结果显示测定值显著相关,检测C、检测E和检测P与检测M的相关系数分别为0.687、0.599、0.863;相关性检验的概率P都为0.000。检测M与检测C、检测E和检测P在总蛋白为25g/L处的相对偏倚分别为:33.1%、33.3%和40.4%。结论:邻苯三酚红钼络合比色法测定值与3种双缩脲比色法测定值之间虽然有较好的相关性,其测定值普遍比双缩脲比色法测定值低,且配对检验有显著差异,因此要引起临床重视。

双缩脲法测定罗非鱼源胶原蛋白肽含量的改良及应用评价

为探究罗非鱼源胶原蛋白肽含量的快速测定方法,以罗非鱼皮胶原蛋白肽为对照品,改良双缩脲比色法测定肽含量的操作方法,考察显色络合物最大吸收波长、线性拟合度高的肽和三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)用量范围、pH值;在优化条件下对标准曲线进行重复性、精密度评价以及加样回收率实验;研究本方法对不同分子质量罗非鱼皮及鱼鳞胶原蛋白肽体系检测的适用性.结果显示,当胶原蛋白肽(标称分子质量3 kDa)质量浓度在0.3~1.5 mg/mL范围内,使用13%TCA溶液,调整体系pH 12.5,在波长545 nm处检测,吸光度与肽质量浓度线性拟合好(R2=0.999),标准曲线方程为y=0.1449x+0.0015;重复性和精密度实验得到相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为1.86%和1.84%,加样回收率分别为113.9%、109.7%,RSD分别为1.39%、1.00%;线性范围宽、重复性好、准确度高.将本法应用于不同种类罗非鱼肽产品体系的检测,加样回收率相差不大,偏差均较小,说明本法简便、快捷,适用于罗非鱼源肽含量的检测.

食品中蛋白质含量检测方法概述及发展现状分析

食品中蛋白质含量的检测方法主要包括凯氏定氮法、杜马斯燃烧法、双缩脲比色法、色谱分析法、近红外光谱检测法,这些方法的测定原理各有差异。通过文献查阅的方法,对以上5种测定方法进行分析比较,并归纳总结了这些测定方法的优缺点、适用范围,为食品中蛋白质含量测定提供一定的参考价值。

4种蛋白质分析方法在液态乳中的适用性研究

分别利用凯氏定氮法、三氯乙酸-双缩脲比色法、考马斯亮蓝法和福林-酚法等4种方法,对液态乳中添加尿素、甘氨酸、硝酸铵、亚硝酸钠、水解蛋白、三聚氰胺等非蛋白含氮物后的蛋白质量浓度进行了测定,并与其理论值进行了比较。结果表明:凯氏定氮法和福林-酚法测定的液态乳蛋白质量浓度与其理论值存在显著差异,而考马斯亮蓝法和三氯乙酸-双缩脲比色法则能较好地反映其真实的蛋白含量。考马斯亮蓝法灵敏度高,适合测定蛋白含量较低的样品;而三氯乙酸-双缩脲比色法的测定结果与液态乳中真实蛋白质量浓度更加接近。

宽体金线蛭提取工艺研究

目的:筛选宽体金线蛭的最佳提取工艺。方法:以水蛭提取液中蛋白质含量及活化部分凝血活酶时间为指标,考察宽体金线蛭在不同溶媒、温度、提取时间、溶媒倍量及提取次数条件下的提取效果。结果:以10倍药材量的4 %NaCl溶液为提取溶媒,在60℃条件下分3次提取药材6h(3h +2h +1h) ,所得结果较为满意。结论:该提取工艺方法简单、科学,有推广应用价值。

AMA-M2阳性的原发性胆汁性肝硬化患者生物化学指标特点分析

目的分析抗线粒体M2亚型抗体阳性(AMA-M2)的原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者生物化学指标特点,为临床PBC诊治提供帮助。方法对本院2010年8月-2012年3月280例AMA-M2阳性的PBC患者分别检测血清蛋白、脂类、胆红素及酶类等16项血清生物化学指标。采用毛细电泳技术,分析患者6种血清蛋白变化情况。采用光电比色法和发色(吸光度)法分别检测患者WBC、RBC、HGB、PLT以及PT等临床血液学指标。采用魏氏法检测患者血沉变化。结果生化指标检测结果显示,血清蛋白及脂类以ALB、TC异常率最高,分别为52%、40%。超过50%的患者出现酶类及胆红素代谢结果异常,异常率由高到低分别为GGT(96%)、ALP(93%)、TBA(81%)、AST(73%)、DB(66%)、CHE(66%)、LAP(63%)、ALT(61%)、TB(54%),其中以DB、GGT、TBA变化幅度最高[≥2倍正常值上限(ULN)],其次为ALP、TB、ALT、AST(1倍ULN),LAP低于1倍ULN。患者血清蛋白电泳结果异常主要体现在γ球蛋白和白蛋白百分比,异常率分别为71%和57%,且前者出现低于1倍ULN升高。近半数患者出现临床血液学指标变化,异常率由高到低是:ESR、HGB、RBC、PT、PLT、WBC,其中以ESR的异常率最为突出84%,其余依次为HGB(49%)、RBC(46%)、PT(44%)、PLT(41%)、WBC(39%),变化幅度以ESR最高(1倍ULN),其次为RBC、HGB、PT(≤1倍ULN)。结论 PBC患者血清蛋白和脂类、酶类和胆红素代谢以及血清蛋白分布等多种生化指标变化特点,结合临床血液学特点,将为PBC的临床诊断提供重要帮助。

乳品真蛋白率的提出及测定

利用三氯乙酸-双缩脲比色法对添加乳清蛋白乳粉的蛋白质量分数进行测定。结果表明,乳清蛋白的加标回收率在89.2%～99%之间,重现性在0.26%～0.98%之间,表明三氯乙酸-双缩脲比色法可以较好地检测出乳中的真蛋白。提出了真蛋白率的概念,并测定出乳粉的真蛋白率范围在78.06%～89.90%之间;液态乳的真蛋白率范围在90.03%～96.25%之间。

胸腺素含量测定方法的比较

对目前国内胸腺素含量测定的几种方法进行了比较，研究了胸腺素含有的游离氨基酸和核酸，及半微量凯氏定氮法、福林－酚法以及双缩脲比色法对胸腺多肽含量测定的影响程度。结果发现前二种方法不同程度地受到干扰，影响了测定结果的准确性，而双缩脲比色法较好地克服了干扰，能较准确地测定胸腺素的含量。

不同方法检测尿、脑脊液蛋白结果的比较

①目的探讨不同方法,测尿/脑脊液蛋白的效果并进行比较,观察用PRM法测尿/脑脊液蛋白的特点。②方法用双缩脲法与PRM法测定196份门诊及住院患者的24小时尿蛋白,用磺柳酸法与PRM法测定89份脑系科患者脑脊液蛋白。③结果两种方法测尿蛋白,结果均无明显差异(P>0.05)。④结论用PRM法同时测尿/脑脊液蛋白,试剂单一,操作简便易行,结果与双缩脲法测尿蛋白,磺柳酸法测脑脊液蛋白比较无差异,但更有利于生化室测尿/脑脊液蛋白。

四种血浆纤维蛋白原测定方法比较

为了评价血浆纤维蛋白原微量热沉淀高速离心测定法，文中以双缩脲比色定量纤维蛋白原为依据，将微量热沉淀高速离法与双缩脲比色、盐析双缩脲显色及盐析比浊血浆纤维蛋白原测定方法进行了比较，发现出量热沉淀高速离心法和双缩脲比色法测定纤维蛋白原结果呈明显的正相关（r＝0．963、P＜0、001）；重复性与双缩脲比色法测定结果最接近，优于盐析双缩脲显色和盐析比浊法；且具有测定快速、简便、不受抗凝剂影响的优点。比较还发现，微量热沉淀高速离心法、盐析双缩脲显色法及盐析比浊法纤维蛋白原测定结果均略高于双缩脲比色法，但热沉淀高速离心法测定偏差最小。并对250例健康人血浆用微量热沉淀高速离心法进行纤维蛋白原测定，确定正常参考值为2．2～4．4g／L。

四种血浆纤维蛋白原测定的方法学比较

本文以双缩脲比色法为经典方法，对纤维蛋白原测定的热沉淀比浊法、免疫比浊法、硫酸铵比浊法进行了方法学评价和比较试验，结果表明：三种比浊方法在１０．０ｇ／Ｌ范围内线性良好，３０分钟内比浊稳定，与双缩脲法结果有较好的相关性，其相关系数分别为０．８４７９，０．８５５８和０．８８０８，结果经差值ｔ检验比较均无显著性差异，可作为临床常规测定血浆纤维蛋白原较好的方法，并对干扰因素作了一些观察，供采用中参考。

人为添加非蛋白质氮乳与乳制品中蛋白质含量测定方法的研究

本研究分别用GB/T5009.5《食品中蛋白质的测定》和NY/T1678《乳与乳制品中蛋白质的测定——双缩脲比色法》,测定了添加非蛋白氮物质的乳及乳制品中的蛋白质含量。结果表明GB/T5009.5方法不能区分样品中的蛋白氮与非蛋白氮;采用NY/T1678-2008方法可以较好的实现蛋白氮和非蛋白氮物质的分离,有效地排除三聚氰胺、尿素、甘氨酸和水解蛋白等多种非蛋白氮对乳及乳制品中蛋白质含量检测的影响,该方法前处理方法快速、简单,检测结果准确。

尿激酶粗品比活力测定法的研究

本文选用琼脂糖-纤维素平板法结合双缩脲比色法检测尿激酶粗品的比活力。经实验统计表明:用平板法测定尿激酶粗品效价,其相关系数;r=0.985;供试品的平均相对偏差为5.79％。用双缩脉法测定其蛋白含量,相关系数为:r=0.991;供试品的平均相对偏差为1.64％。同时对平板法和气泡法的测定结果进行了比较,两者结果相差5.84％。另还对平板法测定时的诸影响因素等进行了探讨。