体重差异双胎新生儿粪便样本DNA提取的优化及分析

目的优化新生儿粪便样本DNA提取方法,提取及分析体重差异双胎新生儿粪便样本DNA。方法从7种DNA提取试剂盒方法中选择对成人粪便样本DNA提取效果最佳的QIAamp DNA Stool Mini Kit法为基准方法,通过钢珠打断前处理、DNA吸附柱收集全部裂解液上清和洗脱液重复洗脱的优化,建立了用于新生儿粪便样本DNA的提取方法。结果该优化方法用于婴儿(出生1个月)粪便样本,结果显示DNA提取浓度平均提高了2.4倍。用于48对双胞胎新生儿出生第1天和第3天粪便样本DNA的提取,经酶标仪及PCR扩增检测,结果显示出生第1天粪便样本DNA提取率为32%,出生3天提取率达83%。RT-PCR显示新生儿第1天到第3天肠道微生物量呈现增长趋势。结论优化的QIAamp DNA Stool Mini Kit法适用于新生儿粪便样本DNA的快速提取,为后续扩增子高通量测序和研究体重差异双胎新生儿肠道菌群构成规律奠定基础。

双胎发育不一致性的相关因素分析

目的探讨影响双胎发育不一致性的相关因素。方法将120例双胎妊娠对象按新生儿体重差异≥25%为界值分成两组,分析对比孕产妇年龄、分娩前BMI等一般情况、分娩孕周、是否辅助生殖术后受孕、双胎绒毛膜类型、孕11-13+6周B超胎儿颈项透明层厚度(NT)值、头臀径(CRL)及妊娠合并糖尿病等合并症与新生儿体重差异是否存在相关性。两组间比较应用χ2检验、t检验;计量资料之间的比较采用相关分析,并通过多因素Logistic回归分析影响双胎发育不一致性的相关因素。结果单绒毛膜类型双胎的体重差异值高于双绒毛膜类型双胎的体重差异值,两者差异有统计学意义(t=2.169,P=0.032)。双胎体重差异大小与孕妇的分娩孕周存在负相关性(r=-0.332,P=0.001);与胎儿的NT差异存在正相关性(r=0.310,P=0.003);与孕妇的年龄、BMI及CRL差异未发现存在相关性。多变量逐步logistic回归分析发现分娩孕周是发生双胎体重差异的保护因素(OR=0.821,95%CI=0.668-1.023,P=0.073),而NT差异是发生双胎体重差异的危险因素(OR=389.575,95%CI=269.429-612.203,P=0.012)。结论对于NT差值较大的双胎妊娠孕妇,可能存在早期双胎发育不一致的倾向或表现,尤其对于单绒毛膜双羊膜囊双胎,胎儿体重容易出现更明显差异。应密切监护双胎发育,根据孕周,两胎儿体重差异程度及多普勒血流改变做出相应临床干预,以提高围产儿存活率。