双色红外荧光技术在蛋白磷酸化检测中的应用

目的通过与化学发光法比较,了解双色红外荧光技术在目标蛋白磷酸化检测中的优势。方法分别取内毒素休克小鼠不同时间肺组织,制备组织匀浆蛋白样品。用SDS-PAGE电泳分离后转膜,将膜分别与磷酸化的或／和总的 p42／44 MAPK抗体孵育,二抗用耦联有Alexa Fluor 680和IRDye 800的荧光抗体或辣根过氧化物酶抗体,通过双色红外荧光系统和化学发光法进行蛋白质磷酸化检测。结果红外荧光检测技术和化学发光检测结果均显示内毒素处理后小鼠肺组织p42／44 MAPK磷酸化水平发生了改变,1 h最高,12 h以后逐渐恢复到接近正常水平。两种方法检测结果显示了较好的一致性,相比之下双色红外荧光技术具有更高的灵敏度、操作方便、节省时间及可以同时检测两种蛋白等优点。结论双色红外荧光技术在蛋白磷酸化的检测方面具有较好的应用前景。

双色红外荧光在蛋白检测中的优势

目的:通过比较Western blot的两种不同显色方法,了解双色红外荧光检测技术在蛋白检测中的优势。方法:制备L-02肝细胞总蛋白,SDS-PAGE电泳分离后转膜,内参蛋白GADPH,β-actin一抗孵育,二抗用藕联有IRDye700、IRDye800的荧光抗体和辣根过氧化物酶抗体,通过双色红外荧光检测技术和化学发光法检测,比较相同量时,两种方法的灵敏度及特异性差异。结果:双色法显色的图像较化学发光法更清晰直观,且实验背景低。结论:双色红外荧光检测提高了蛋白检测灵敏度,保证实验结果的准确,在蛋白检测方面具有不可比拟的优势。

基于ARM的双色近红外荧光扫描系统

由于扫描样品的多样化,样品的发光点并不一定在焦平面上;双色近红外荧光扫描分析可以实现数据对比以及准确的量化分析。因此,设计基于激光共聚焦原理的ARM控制、三维移动、双色近红外荧光扫描的系统。采用STM32F407作为主控板,THB7128芯片作为x,y,z三轴步进电机的驱动,可以实现快速定位和精准扫描。信号采集电路由H11461-03型号的侧边PMT,以OPA686芯片作为运放的电流-电压转换和放大电路,LM747H芯片构造的二阶巴特沃斯低通滤波电路以及ADS8320采样电路组成。系统的背景噪声实验结果显示信号范围在0.075~0.2 V之间,且数值较低、变化平稳。