中药土贝母诱导人乳腺癌细胞凋亡的实时成像

目的:采用先进的荧光实时显像技术对中药土贝母植物块茎提取物抗乳腺癌作用进行评价。方法:MDA-MB-231人乳腺癌细胞被设计成为细胞质红色荧光蛋白(RFP)基因表达而细胞核组蛋白H2B绿色荧光蛋白(GFP)基因表达的双色荧光细胞,并分别在2D平面塑料平皿及3D立体明胶海绵块两种不同的培养环境中培养,经土贝母鲜品二氯甲烷提取物(DEFT)干预后,荧光共聚焦显微镜下观察细胞形态及核碎片形成的情况;DNA电泳方法进一步检测细胞凋亡。结果:土贝母鲜品二氯甲烷提取物作用24h后荧光显微镜下即观察到MDA-MB-231细胞出现凋亡的形态学改变;DNA电泳在药物干预48h后检测到凋亡的DNA碎片梯带,72h后更加明显;3D明胶海绵培养的MDA-MB-231细胞经实验药物作用后其形态学改变的效果不如2D环境下明显。结论:土贝母鲜品二氯甲烷提取成分具有抗乳腺癌治疗的潜能。

土贝母提取物联合浙贝母总生物碱对人乳腺癌细胞协同作用的研究

目的:建立双色荧光蛋白转染的4种人乳腺癌细胞株模型,观察土贝母提取物联合浙贝母总生物碱对4种人乳腺癌细胞的协同作用特点。方法:建立双色荧光蛋白转染的4种人乳腺癌细胞株模型MDA-MB-231 DUAL,BT-549 DUAL,MCF-7 DUAL及NCI/ADR-RES DUAL。运用倒置荧光显微镜实时成像,观察不同浓度土贝母提取物及浙贝母总生物碱作用下,细胞株的形态变化及凋亡特点。结果:土贝母提取物对4种乳腺癌细胞都有促进细胞凋亡的作用。除MDA-MB-231 DUAL,其余3种乳腺癌细胞在相同土贝母提取物作用浓度下,加入浙贝母总生物碱可以提高细胞凋亡率(P<0.05)。而单独作用的浙贝母总生物碱对4种乳腺癌细胞均无显著影响。结论:土贝母提取物与浙贝母总生物碱联合应用,可更好地促进人乳腺癌细胞凋亡,提高疗效;作用有效浓度越高,细胞凋亡率增加越显著。

转录因子Elk-1调控MAZ基因启动子转录活性的体外研究

该文旨在探究血清淀粉样蛋白A激活转录因子(serum amyloid A activating transcription factor,SAF),或称myc相关锌指蛋白(myc-associated zinc finger protein,MAZ)基因,除已证实的转录因子MAZ和Sp1(specificity protein 1)外,是否存在其他转录因子对MAZ基因启动子的转录激活具有调控作用。在生物信息学预测基础上,利用凝胶电泳迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)筛查MAZ启动子区的转录因子结合位点。在EMSA筛查出MAZ启动子区包含转录激活因子ETS样蛋白1(ETS-like 1 transcription factor,Elk-1)结合位点后,通过该实验室构建的由MAZ启动子驱动的双荧光报告系统分析观察过表达转录因子Elk-1后MAZ启动子的转录激活情况。结果显示,转录因子Elk-1可结合MAZ启动子–525~–504 nt区的DNA序列;过表达Elk-1及Sp1均可使MAZ的两个转录子SAF-1和SAF-3转录水平降低且后一转录子被抑制尤甚。结果提示,Elk-1与Sp1共同参与调控MAZ基因两个转录子SAF-1和SAF-3的转录调控,在MAZ基因参与的细胞诸多生理疾病过程中,Elk-1可能通过该途径发挥其作用。