胰蛋白酶催化罗丹明110双酰胺衍生物荧光酶联免疫吸附方法检测桔青霉素

桔青霉素(citrinin,CIT)是一种广泛污染玉米、大米等农作物,且对人和动物具有肾毒性、致畸性等毒害的真菌毒素。目前的国家标准检测方法中,需要先用免疫亲和柱或固相萃取柱净化,再用配荧光检测器的高效液相色谱仪测定,需要专业的大型仪器和检测场所。因此,有必要开发一种更简便、灵敏的方法用于谷物中CIT的检测。该实验构建了一种胰蛋白酶催化的荧光酶联免疫吸附方法用于玉米中CIT的检测。该方法利用胰蛋白酶催化罗丹明110双酰胺荧光衍生物裂解产生荧光,以及CIT和胰蛋白酶-CIT与CIT抗体的竞争结合关系,通过记录竞争抑制率B_(0)与CIT浓度的变化关系,从而实现对玉米中CIT的定量检测,可用方程y=18.606 lnx-18.713(R^(2)=0.992),定量范围为12.5~400 ng/mL,通过检测4个不同CIT含量(0.22~3.5 mg/kg)的玉米样本,结果显示该方法的加标回收率为90.10%~110.58%,批内、批间的变异系数为3.65%~14.08%,该研究所构建的荧光酶联免疫吸附方法适用于玉米中不同浓度的CIT快速、灵敏定量检测。

微波-双酶解法制备淮山抗性淀粉的研究

抗性淀粉具有类似膳食纤维的作用,具有重要的生理功能和优良的食品加工性能。为了增加淮山产品的利用价值,通过单因素试验和均匀试验,利用微波-双酶解的方法来研究制备淮山抗性淀粉的工艺,得到其最佳制备工艺参数为:淮山淀粉乳浓度为15%,先用144W微波处理120s后,按6U/g干淀粉加入耐高温淀粉酶酶解75min,再按2U/g干淀粉加入普鲁兰酶酶解3h;酶解液经离心、老化、烘干、粉碎、过筛后即得淮山抗性淀粉样品,其中抗性淀粉得率为14.32%。研究结果可为淮山抗性淀粉的生产提供科学依据。

牡蛎鲜肉双酶酶解工艺研究

考察牡蛎鲜肉的双酶酶解工艺方法。采用单因素试验法考察影响酶解效果的主要因素,采用正交试验法对酶解时间、酶解温度、加酶量和酶解pH值进行优选,确定牡蛎鲜肉双酶酶解的最佳工艺条件。结果表明:牡蛎鲜肉双酶酶解最佳工艺条件为在底物浓度为20%,采用2.0%的胰蛋白酶和2.0%的碱性蛋白酶,酶解温度为45℃,酶解pH值为8.0,酶解时间为3h,牡蛎鲜肉的水解度可达40%。结论:优选出的牡蛎鲜肉双酶酶解工艺条件合理、可行,提取效率高。

酶法提取肠渣饲用蛋白质工艺的研究

就采用酶解法从肠渣中提取蛋白质的工艺进行了试验,主要研究了对最佳酶的筛选、酶解时间、酶解温度、料液比和加酶量对蛋白质提取率的影响。结果表明:胰蛋白酶的效果最佳,在酶解时间为5 h、料液比1∶20、加酶量1.50%和酶解温度为50℃条件下,蛋白质提取率最大为26.32%。

双酶复合水解谷朊粉制备小肽的工艺条件研究

本研究以谷朊粉为原料,采用胰蛋白酶、复合蛋白酶水解谷朊粉蛋白,以水解度、氮溶解指数为评价指标,以反应pH值、加酶量、底物浓度、反应时间、温度为影响水解度大小的主要因素,筛选这两种蛋白酶的单酶和双酶复合的最佳水解条件。

双酶法呈味核苷酸的研制 第1报 高产5′-磷酸二酯酶菌种选育、酶的形成及其作用条件的研究

5′-磷酸二酯酶是指能降解核糖核酸(简称RNA)为5′-核苷酸的酶。它是酶解法制造呈味核苷酸的关键酶。因此选育高产5′-磷酸二酯酶(简称为PD酶)是主要的技术关键之一。我们首先收集了国内现有的几株菌种,如M71、AS3.2788、桔青霉1131等。

中药鲜河蚌肉酶解工艺研究

目的:优选鲜河蚌肉的酶解法提取工艺。方法:采用单因素试验法考察影响酶解效果的主要因素,采用正交试验法对酶解时间、酶解温度、加酶量和酶解pH值进行优选,确定鲜河蚌肉酶解的最佳工艺条件。结果:鲜河蚌肉仿生酶解最佳工艺条件为在底物浓度为10%,采用2.0%的胰蛋白酶和2.0%的碱性蛋白酶,酶解温度为45℃,酶解pH值为8.0,酶解时间为3 h,鲜河蚌肉的水解度最高为32.56%。结论:优选出的鲜河蚌肉酶解提取工艺条件合理、可行、提取效率高。

海参内脏酶解制备海参肽工艺

以蛋白水解度和酶解液中海参肽相对分子质量的分布作为指标,考察不同蛋白酶的酶解效果,筛选水解海参内脏的最适合蛋白酶,并通过单因素实验和正交实验优化酶解工艺.实验结果表明:胰蛋白酶的水解效果最佳,可用于水解海参内脏制备海参肽;在底物质量分数为1.0%,加酶量为0.375 1mkat·g^(-1),pH值为8.0,酶解温度为37℃,水解时间为5h的最优酶解条件下,海参内脏的水解度可达到48.90%,酶解液中的多肽(2 000~5 000u)质量分数为52.68%,寡肽(含氨基酸)(≤2 000u)质量分数为47.25%.

螺旋藻中酪氨酸酶抑制活性多肽的研究

为了从螺旋藻中获得具有美白功效的活性多肽,运用破壁提取、离心过滤的方式获得总蛋白,采用不同蛋白酶水解的方法获得多肽,对所得多肽进行酪氨酸酶抑制活性的筛选,进一步对具有活性的酶解多肽进行比较。结果证明先加入碱性蛋白酶,再加入木瓜蛋白酶进行双水解得到的多肽能够显著提高酪氨酸酶抑制活性。本文制得的螺旋藻多肽具有抑制酪氨酸酶活性、减少黑色素形成的作用,在预防、治疗色素沉着和黑色素瘤,用于化妆品美白剂等方面具有潜在价值。

酶法制备福寿螺内脏团抗菌肽

福寿螺Pomacea canaliculata作为外来入侵物种之一,对我国多地的农业及生态环境造成严重危害。为探究福寿螺入侵过程中对环境微生物的抵抗力,本文采用生物酶解法制备福寿螺内脏团中的抗菌肽,并用滤纸片扩散法对大肠杆菌BL21(Escherichia coli BL21)、大肠杆菌DH5α(E.coli DH5α)、副溶血性弧菌Vibrio parahemolyticus、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila的抑制作用进行测定。结果显示:胰蛋白酶和胃蛋白酶制备的福寿螺内脏团抗菌肽对4株菌均有显著抑制作用。优化酶解时间发现:胰蛋白酶酶解液对大肠杆菌BL21、大肠杆菌DH5α、副溶血性弧菌和嗜水气单胞菌的最佳酶解时间均为4 h;胃蛋白酶酶解液对大肠杆菌DH5α的最佳酶解时间为4 h,对大肠杆菌BL21、副溶血性弧菌和嗜水气单胞菌的最佳酶解时间为6 h。本研究为进一步分离纯化福寿螺内脏团中具有抗菌活性的粗提取物提供实验基础。

铜-(N-正十二碳酰双甘肽)配合物模拟SOD研究

合成一种新的 SOD模拟物带功能基的长链铜 ( )氨基酸配合物 N -正十二碳酰双甘肽合铜[Cu( C1 2 -Gly-Gly) ]和二 -( N-正十二碳酰双甘肽合铜 ) [Cu( C1 2 -Gly-Gly) 2 ].用脉冲辐解法测定了其 SOD样活性 ,发现 Cu( C1 2 -Gly-Gly) 2 的 SOD样活性基本接近于天然 SOD,达到了整体模拟 SOD的效果 .

水解超高产大豆“中黄35”功能性蛋白的制备

以新疆超高产大豆"中黄35"品种为研究对象,采取传统提取、酶单因素实验和双酶解法等多种方法制备大豆的功能性蛋白,并对其SDS-PAGE电泳、溶解曲线、氮溶指数和浊度等基本性质进行了初步分析。实验结果表明"中黄35号"大豆蛋白的提取最优条件是:豆水比(g:mL)为1∶13,pH值为8,提取时间为2 h。酸性蛋白酶水解大豆蛋白的最适合工艺条件为:初始pH值为3.5,温度为45℃,酶用量为6%,固液比为1∶8,水解时间为8 h。采用SDS-PAGE电泳分离出2条酸性蛋白条带,其相对分子质量分别在95 kD和60 kD左右。

不同提取方法及因素对亚麻蛋白功能性质的影响

该研究利用双酶复合酶解法和碱溶酸沉法从亚麻籽饼粕中提取亚麻蛋白,探究两种提取方法及不同因素对亚麻蛋白功能性质的影响。结果表明,双酶复合酶解法提取的亚麻蛋白功能性质较碱溶酸沉法更优,且不同因素对亚麻蛋白功能性质具有一定的影响。双酶复合酶解法提取的亚麻蛋白的等电点为4.4,且当pH值11、温度60℃、亚麻蛋白含量3.4%和NaCl浓度1.5 mol/L时,乳化性最佳;当pH值11、温度40℃、亚麻蛋白含量3.4%和NaCl浓度1.5 mol/L,乳化稳定性最佳;当pH值11、温度60℃、亚麻蛋白含量2.8%和NaCl浓度1.0 mol/L时,起泡性最佳;当pH值8、温度60℃、亚麻蛋白含量3.4%和NaCl浓度1.0 mol/L时,起泡稳定性最佳;当pH值2、温度20℃、亚麻蛋白含量2.2%和NaCl浓度1.0 mol/L时,黏度最佳。

仿生酶解法提取蜈蚣的工艺研究

目的研究仿生酶解法提取蜈蚣的工艺条件。方法以水解度为指标,单因素考察了仿生酶解法提取蜈蚣的工艺条件;以APTT法、纤维蛋白原平板法为考察指标,对仿生酶解法提取蜈蚣的工艺进行验证。结果仿生酶解法凝血时间长,抗血栓效果明显。酶解的条件为:蜈蚣先用37℃人工胃液加入4.0%(酶底比)胃蛋白酶酶解4h,残渣转入37℃人工肠液加入5%(酶底比)胰蛋白酶酶解4h。结论仿生酶解法适于提取蜈蚣抗凝血和溶栓的有效部分。

鹿胎保健食品原料的工艺研究

目的:优选出双酶水解鹿胎原料效果最佳的生产工艺。方法:以水解度为指标,通过单因素试验,分别考察酶解温度、酶解时间、pH值、酶底比、料液比对蛋白酶酶解鹿胎的影响。结果:双酶水解最佳条件为碱性蛋白酶最佳酶解条件,即分别加入酶底比为1∶80的碱性蛋白酶与胰蛋白酶,料液比1∶40,pH值为9.0,温度45℃,酶解4h。结论:优选方法稳定,操作简便,提取率高。

热研4号王草原生质体的制备

开展原生质体融合育种以及利用原生质体瞬时表达系统进行分子生物学实验的前提和基础是建立高效、有活力的原生质体制备体系。为建立热研4号王草原生质体制备体系，本研究以热研4号王草叶片为原生质体制备的外植体，将切成细丝的热研4号王草幼叶置于含2.0%纤维素酶＋0.5%果胶酶Y-23＋0.5%崩溃酶＋0.6 mol/L甘露醇＋40 mmol/L KCl＋6 mmol/L MES，pH 5.7＋20 mmol/L CaCl2＋0.15%BSA的酶液中，在避光条件下置于50 r/min的摇床酶解6~8 h，获得了大量有活力且均匀一致的原生质体。经过荧光素双醋酸酯（fluoresceindiacetate, FDA）染色和Western blot检测目的蛋白表达，结果发现采用酶解法制备的热研4号王草原生质体活力可达75%，且可用于表达拟南芥外源蛋白。本研究可为下一步利用热研4号王草开展分子生物学研究奠定基础。