应用NADPH-d和HRP双重组织化学技术显示一氧化氮合酶阳性神经元的纤维投射

十多年来,大量的研究资料证实一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元在脑内广泛分布,但对相关脑区(核团)内NOS阳性神经元的纤维投射方面的报道较少,且多采取霍乱毒素β亚单位作为逆行追踪剂结合神经型NOS(nNOS)双重免疫组织化学荧光染色方法[1].

双重组织化:规模农户参与社会化服务的绩效提升路径--基于“家庭农场服务联盟”的案例分析

在农业社会化服务市场中,规模农户既是服务需求者也是供给者,因此探索其服务需求实现和服务供给功能发挥的有效路径具有重要意义。本文在剖析规模农户参与社会化服务的特征及困境基础上,提出其绩效提升的可行路径,并运用典型案例进行佐证。研究表明,当前规模农户的服务需求具有量大且多元化的特征,另外服务供给功能也日益凸显,但受高交易成本影响,其面临多元化服务需求难以满足和服务供给功能发挥受限的困境;而通过建设需求端和供给端双重组织化的服务联合体,可以有效节约交易成本,促进规模农户服务获取价格降低、服务需求实现和服务供给效率提升。在此过程中,资源整合、分工协作、协同效应以及利益联结是保障服务联合体运行的重要机制。

运用双重免疫组织化学方法研究骨性关节炎关节软骨细胞的胶原表型

目的 :研究原发性骨性关节炎 (osteoarthritis,OA)关节软骨中软骨细胞的胶原表型。方法 :运用抗Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原单克隆抗体 ,对OA关节软骨标本分别进行Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原双重免疫组织化学染色。结果 :在原发性OA关节软骨的深层和钙化层软骨细胞中 ,存在Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原的共同分布现象。同一个簇聚软骨细胞团中不同细胞的胶原表型也各不相同。结论 :原发性OA关节软骨细胞在疾病环境中发生进一步分化 ,在不同的分化阶段细胞的胶原表型不同 ,其中早期肥大软骨细胞能够同时合成Ⅹ型和Ⅱ型胶原以及Ⅹ型和Ⅲ型胶原。

采用双重免疫组织化学及免疫电镜方法可将α-平滑肌肌动蛋白定位于乳腺癌间质新生血管周细胞

目的 观察周细胞形态特点 ,并寻找其标记物。方法 应用双重免疫组织化学及免疫电镜方法 ,观察α -平滑肌肌动蛋白 (α -SMA)在周细胞内的表达情况。结果 免疫组织化学染色发现α -SMA在周细胞内表达 ,而在内皮细胞内不表达 ;免疫电镜可见α-SMA仅定位于周细胞。结论 免疫组织化学方法和免疫电镜方法是一种有效的实验手段 。

NKT细胞在肝癌组织中的分布状况与肝癌局部免疫的研究

目的 :通过双重免疫组织化学的方法来研究NKT细胞在肝癌组织、正常肝脏组织以及其它肝脏病变组织中的分布情况 ,探讨NKT细胞的数量分布变化与肝癌组织局部微环境免疫状态的关系。方法 :采用双重免疫组化方法对上述组织石蜡切片染色 ,随机选取视野计数NKT细胞 ,然后统计分析。结果 :①侵袭性高或有转移 (有癌栓 )的HCC组NKT细胞数低于侵袭性低或无转移 (无癌栓 )的HCC组 :P <0 .0 5 (P =0 .0 38) ;②正常肝组织组NKT细胞数与肝癌癌周组织组NKT细胞数则无统计学差异 :P >0 .0 5 (P =0 .731) ;③在肝癌组中 ,有包膜组和无包膜组两组数据在统计学上没有明显差异 :P >0 .0 5 (P =0 .6 2 0 ) ;④小肝癌组和大 (巨大 )肝癌组两组数据在统计学上有显著差异 :P <0 .0 5 (P =0 .0 2 6 ) ;⑤以术前AFP阴、阳性 (2 0 μg /L为标准 ) ,术前AFP阴性组和术前AFP阳性组两组数据在统计学上没有明显差异 :P >0 .0 5 (P =0 .6 18)。结论 :①NKT细胞数与肝癌侵袭、转移性呈负相关 ,提示NKT细胞对肝癌的侵袭、转移有抑制作用 ;②正常肝组织 (供体肝组织 )及肝脏良性病变周围肝组织中NKT细胞的数量分布与原发性肝癌癌周组织中NKT细胞的数量分布没有明显的统计学差异 ,说明肝组织中NKT细胞的数量可能与原发性肝癌的易感性无关 ;

肉芽组织内血管生成过程中周细胞的作用

目的 :研究周细胞在肉芽组织血管生成过程中作用。方法 :采用双重免疫组织化学染色技术及形态定量分析方法对 7例患者的肉芽组织进行研究。结果 :周细胞不仅参与血管成熟过程 ,而且肉芽组织内血管新生的早期即有周细胞存在。结论 :周细胞参与肉芽组织血管生成的全过程。

组织芯片观察CD44^＋/CD166^＋结直肠癌干细胞的形态及分布

背景:越来越多的研究将CD44作为结直肠癌干细胞的一个特异性的标志物。目的:观察结直肠癌干细胞CD44+/CD166+在原发性结直肠癌组织中的数量、位置及分布方式。方法:取61份结直肠癌、10份正常肠黏膜组织及18份伴不典型增生的结直肠腺瘤标本制成42点的共3块组织芯片。结果与结论:免疫组织化学双染结果显示,正常肠黏膜中未见CD44+/CD166+细胞,在伴不典型增生腺瘤中可见极少量CD44+/CD166+细胞,结直肠癌中可见到少量CD44+/CD166+双阳性细胞。双阳性细胞主要分布在结直肠癌腺管基底侧,呈灶状或散在分布;细胞呈立方形,胞浆稀少,胞核规则,呈卵圆形或高柱状,随着结直肠癌分化程度的降低,数量增多,且其数量在浸润较深的癌巢中较多。提示结直肠癌干细胞的数量、位置、分布方式及其形态有助于结直肠癌的诊断及判断预后。

双重免疫组化技术检测乳腺癌STAT5和ER相关表达的意义

目的优化双重免疫组织化学技术,检测乳腺癌中STAT5和ER蛋白表达的相关性,并分析两者联合检测在乳腺癌治疗方案的制定及预后评估中的参考意义。方法用不同染色顺序优化双重免疫组织化学技术,并用优化的方法检测50例乳腺癌组织中STAT5和ER蛋白的共表达。结果染色顺序为STAT5→NBT/BCIP显色→ER→DAB显色者阳性对比明显,双标记效果理想;乳腺癌肿瘤细胞STAT5-ER双标记阳性率、ER单标记阳性率均高于STAT5单标记阳性率,差异有显著性(P<0.05),而双标记阳性率和ER单标记阳性率比较无显著性差异。结论应用优化的双重免疫组织化学技术检测乳腺癌组织中STAT5和ER的相关表达,有助于指导临床预测乳腺癌的内分泌治疗反应及其预后。

结直肠腺癌组织中CD44^+/Oct4^+癌干细胞的形态及分布

背景:越来越多的证据显示CD44可作为结直肠腺癌干细胞的一个特异性的标志物,近年发现胚胎干细胞转录因子Oct4在结直肠腺癌中有表达。目的:观察CD44+/Oct4+细胞在原发性结直肠腺癌组织中的数量、位置及分布方式。方法:取108例结直肠腺癌、18例癌旁正常肠黏膜组织及18例伴不典型增生的结直肠腺瘤标本制成48点共3块组织芯片,应用免疫组织化学双重染色和苏木精-伊红染色,定位CD44+/Oct4+肿瘤细胞,观察计数并在苏木精-伊红切片的对应位置上观察其形态特征。结果与结论:免疫组织化学双重染色结果显示,癌旁正常肠黏膜中未见CD44+/Oct4+细胞,在伴不典型增生的腺瘤中可见极少量CD44+/Oct4+细胞,结直肠腺癌中可见到少量CD44+/Oct4+细胞。双阳性细胞主要分布在腺管样结构基底膜侧或共壁腺体的共壁侧,呈小灶状或散在点状分布;细胞呈卵圆形或立方状,胞浆稀少,胞核规则,均质深染,呈卵圆形或高柱状。其数量与结直肠癌分化程度呈负相关(r=-0.579,P<0.01),与肿瘤浸润深度有一定关联(r=0.236,P<0.05)。结果提示CD44+/Oct4+细胞可能是结直肠腺癌干细胞。

结直肠癌组织中CD44^+/SOX2^+肿瘤干细胞的分布及形态特征

背景:CD44是常用的结直肠癌肿瘤干细胞标志物,近年来发现转录因子SOX2是潜在的结直肠癌肿瘤干细胞标志物。目的:观察CD44^+/SOX2^+细胞在结直肠癌组织中的数量、分布及形态特征,探讨CD44^+/SOX2^+是否可作为结直肠癌肿瘤干细胞标志物。方法:运用免疫组织化学双重染色方法观察10例正常肠黏膜、20例结直肠腺瘤及88例癌组织标本中CD44^+/SOX2^+细胞的数量、分布规律;苏木精-伊红染色观察结直肠癌组织中CD44^+/SOX2^+细胞的形态特征。结果与结论:(1)正常肠黏膜中未见到CD44^+/SOX2^+细胞,结直肠腺瘤组织中可见极少量CD44^+/SOX2^+细胞,结直肠癌中可见少量CD44^+/SOX2^+细胞;(2)CD44^+/SOX2^+细胞在高、中分化腺癌中呈小灶性或点状散在分布于隐窝基底部或共壁腺管侧,在低分化腺癌中呈小灶性或点状散在分布于其他癌细胞中;(3)在苏木精-伊红染色切片中CD44^+/SOX2^+细胞体积小,呈圆形、椭圆形结构,胞浆少,核大,核仁明显,核分裂象少见;(4)CD44^+/SOX2^+的表达与结直肠癌患者年龄、性别、部位及浸润深度均无相关性,与分化程度呈负相关,与TNM分期、远处转移均呈正相关;(5)结果提示,CD44^+/SOX2^+细胞的分布、形态特征等符合肿瘤干细胞特性,CD44^+/SOX2^+可能是结直肠癌肿瘤干细胞标志物。

乳腺癌脉管浸润检测中双重免疫组化染色的应用分析

目的探究双重免疫组织化学染色在乳腺癌脉管浸润检测的方法和效果。方法选取61例乳腺癌患者进行研究,对其使用双重免疫组织化学染色的检测,同时和常规HE染色进行对比。结果在HE染色判断中,有16例判断为LVSI(+)。而在双重免疫组织化学染色证实的有:10例患者为LVSI(+),6例患者为LVSI(-),而在HE染色判断中,有45例患者没有确定为LVSI(+)的,在双重免疫组织化学染色的检测后,13例患者为LVSI(+),双重免疫组织化学染色和HE染色检测的诊断结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论乳腺癌脉管浸润在检测中采用双重免疫组织化学染色的方法,具有灵敏、特异的特点,可针对检测结果制订患者的治疗方案。

弹力纤维染色与双重免疫组化染色在肺腺癌胸膜侵犯判断的应用及体会

肺癌是严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤之一。患者的5年生存率低于20%,主要死亡原因是复发和转移。根据NCCN指南TNM分期标准,即使肿瘤直径≤3 cm,只要侵犯脏层胸膜,应归为T2期,而非T1期。因此对肺癌患者进行准确临床分期具有重要意义,正确判断肿瘤是否侵犯脏层胸膜尤为重要[1-2]。本科室在实际工作过程中采用维多利亚蓝弹力纤维染色结合免疫组化双重染色,能清楚地显示肺癌组织弹力纤维与肿瘤细胞间的关系,以准确判断是否存在胸膜侵犯。

CD34与D2-40双重免疫组织化学染色技术在鉴别血管与淋巴管中的应用

在恶性肿瘤中，血道和淋巴道转移是肿瘤转移的重要途径，并且肿瘤的转移与患者的预后密切相关。常规HE染色中，区别淋巴管和血管非常困难，不可避免地存在主观性。CD34是一种比较特异的血管内皮标记物，已被广泛使用，而D2-40是新近发现的相对特异的淋巴管内皮标记物。我们应用CD34、D2-40对恶性肿瘤组织进行双重免疫组织化学染色，以便更清晰地判断恶性肿瘤细胞在血管、淋巴管中的侵犯情况，取得了比较理想的结果。

全自动免疫组织化学仪在EBER原位杂交和免疫组织化学双重染色中的应用

利用全自动免疫组织化学染色仪先进行EB病毒编码的小RNA(EBER)原位杂交再进行免疫组织化学染色,其组织化学结果与单染相比有差异,经过调整该双标技术相应的组织化学程序后可减少差异,从而实现EBER原位杂交和免疫组织化学双重染色的自动化,为病理诊断尤其是淋巴瘤病理分类提供快速、准确和稳定的参考指标。

CK8/18与MLH1或PMS2的免疫组织化学双重染色在检测实体瘤错配修复蛋白表达中的应用

错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白的自动化免疫组织化学检测已在多家医院的病理科开展且较为成熟,但仍存在因肿瘤背景复杂、癌细胞少且分散而难以评价MMR蛋白表达的问题。我们摸索出了利用全自动免疫组织化学染色仪进行某一MMR蛋白和细胞角蛋白(CK)8/18的免疫组织化学双重染色方法,能够在复杂背景中清晰地勾勒出癌细胞,同时显示其细胞核MMR蛋白表达情况。

白萝卜提取物促胃动力作用中Cajal间质细胞与P物质的变化

目的探讨白萝卜提取物(raphanus sativus lextract,Ecr)通过Cajal间质细胞促胃肠动力作用机制。方法40只SD大鼠随机分为A(Ecr)组、B(0.9%氯化钠对照)组分别灌服等体积Ecr和0.9%氯化钠,1h后用双重免疫荧光组织化学标记的方法观察胃电起搏区Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)与P物质(SP)阳性神经及产物表达的变化。结果肌间神经丛中ICC与SP阳性神经呈网络样分布,二者紧密毗邻;肌间神经丛及肌层内与ICC结合的SP阳性神经产物表达明显增加(P<0.01)。结论白萝卜提取物的促胃肠动力作用可能与胃体ICC上结合的SP阳性神经产物表达增高有密切关系。

前列腺腺癌中双染鸡尾酒抗体Ki-67/caspase-3的表达及意义

目的探讨Ki-67/caspase-3鸡尾酒抗体在前列腺腺癌(PAC)、高级别前列腺上皮内瘤(HGPIN)及良性前列腺增生(BPH)组织中的表达及意义。方法收集40例PAC、30例HGPIN和BPH标本,按常规方法石蜡包埋,制作蜡块连续切片,进行HE染色及Ki-67/caspase-3鸡尾酒抗体双重免疫组化染色。结果 Ki-67表达阳性率及增殖指数在PAC组织中明显高于HGPIN和BPH组织,且随着Gleason分级增高其增殖指数存在递增趋势(P<0.05,P<0.01)。caspase-3在BPH组织中表达阳性率明显高于PAC及HGPIN组织(P<0.05),但在PAC与HGPIN、不同Gleason分级PAC中的表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。Ki-67和caspase-3在PAC和HGPIN组织中的表达呈负相关,而在BPH中的表达呈正相关。结论 Ki-67/caspase-3在不同病变中表达不同,鸡尾酒抗体联合检测可用于前列腺良恶性疾病的诊断、鉴别诊断及预后的判断。

AD7c-NTP与胰岛素受体在小鼠海马CA1区的共存关系

目的观察Alzheimer相关的神经丝蛋白(Alzheimer-associated neuronal thread protein,AD7c-NTP)在正常小鼠海马CA1区的分布及其与胰岛素受体的共存关系。方法应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)方法观察小鼠脑蛋白提取物中AD7c-NTP的相对分子质量大小和抗体的特异性。应用免疫组织化学方法观察AD7c-NTP在正常小鼠海马CA1区的分布。应用免疫组织化学双重标记技术观察AD7c-NTP与胰岛素受体的共存关系。结果AD7c-NTP免疫反应阳性条带位于相对分子质量约41 000的位置,与文献报道一致;正常小鼠海马CA1区有AD7c-NTP免疫反应阳性细胞分布,细胞膜和细胞质染色并存在AD7c-NTP和胰岛素受体免疫反应双阳性细胞。结论AD7c-NTP在正常小鼠海马CA1区有分布并与胰岛素受体有共存关系,提示AD7c-NTP的功能可能与胰岛素信号通路有关。