O型口蹄疫病毒和塞内卡病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立O型口蹄疫病毒(FMDV-O)和塞内卡病毒(SVV)快速鉴别检测方法,本实验根据FMDV-O VP2基因序列和SVV P3基因序列,采用Primer Express3.0软件分别设计引物与探针,并经各反应条件的优化初步建立了可同时鉴别检测FMDV-O和SVV的双重荧光定量RT-PCR方法。利用该方法检测临床常见猪病毒,结果显示可同时检测出FMDV-O和SVV核酸,且与猪水泡性口炎病毒(VSV)、猪水疱病毒(SVDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、A型口蹄疫病毒(FMDV-A)、A-1型口蹄疫病毒(FMDVA-1)核酸均无交叉反应,并可检测到FMDV-O PanAsia株、cathay株、Ind-2001株和Mya-98株等主要流行株,特异性强;该方法对含FMDV-O和SVV拼接质粒标准品的最低检测限为7.17×10^(2)拷贝/μL,敏感性高;利用该方法检测了同一时间和不同时间提取的3种不同浓度的质粒标准品,结果显示批内和批间重复性试验Ct值的变异系数均小于3%,重复性好。利用本实验所建立的方法对30份临床样品进行检测,结果与各病毒单一荧光定量RT-PCR检测结果一致。本研究建立的FMDV-O和SVV双重荧光定量RT-PCR方法能够快速准确的鉴别检测FMDV-O和SVV,为口岸检疫的快速通关提供了技术手段。

对虾产品疫病双重荧光RPA方法的建立和初步应用

为实现对虾产品中两种病原体的简便、快速、高效检测,针对对虾传染性皮下及造血器官坏死病毒(infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus,IHHNV)和虾肝肠胞虫(EHP)进行双重荧光RPA(recombinase polymerase amplification,重组酶聚合酶扩增)检测方法的研究。根据IHHNV和EHP的保守序列设计引物、探针,建立双重荧光RPA方法,同时对方法的特异性、敏感性和重复性进行验证。结果表明,所建立的方法只对IHHNV和EHP有明显的扩增;用IHHNV和EHP阳性质粒进行倍比稀释检测,结果表明双重荧光RPA方法对IHHNV和EHP质粒检测灵敏度可以达到1×10^(2)copies/μL;用10个重复质粒样本进行检测,结果证明方法重复性较好。使用该方法对进口的冷冻对虾样本检测,检测出1例EHP阳性和1例IHHNV阳性,同时样本用荧光PCR方法进行比对检测,两种方法检测结果一致。本研究中所建立的方法对于两种疫病的区分检测具有重要的临床意义,可应用于养殖场、对虾产品生产企业和口岸实验室疫病的快速筛查。

煤矿双重预防机制管理系统风险预警分析与评估方法研究

双重预防机制契合我国新时代煤矿安全监管监察的需要,是安全理论与国内安全生产实践结合的创新。通过利用物联网、大数据、云计算与移动互联等技术,构建煤矿双重预防机制管理系统,实现煤矿企业内部各系统之间互联互通、动态数据采集分析和风险预测预警,为日常安全生产调度、安全管理决策、应急与消防演练和救援等工作提供数据支持和技术解决手段。

某省县域医共体建设试点目标完成情况评价——基于双重差分方法的实证研究

目的:对某省县域医共体建设试点目标完成情况进行评价。方法:基于双重差分方法,对某省54家县域医共体建设情况进行评价,重点关注县域医疗卫生服务能力提升、医保基金有效利用、居民医药费用负担合理控制、有序就医格局四个建设目标。结果:与非试点医共体相比,试点医共体牵头医院出院患者三四级手术比例提升23.3%、向基层下转住院患者人次增加75.8%,试点医共体医疗卫生机构医保基金支出提升8.0%、县域门诊次均费用增长15.4%。结论:试点医共体建设对牵头医院服务能力提升及有序就医格局形成有很好的推动作用,但同时容易导致医保基金支出增加、医疗费用增长。这一结果为推进县域医共体高效建设提供了一定的政策启示。

基于DEMATEL&CIM的化工企业特种设备双重预防机制运行绩效灰色评估

针对化工企业特种设备双重预防机制特点和绩效评价影响因素的复杂性和指标的不确定性,提出基于DEMATEL&Grey-CIM的方法,用于双重预防机制运行绩效评价。建立了特种设备双重预防机制运行绩效评价的结构模型,采用DEMATEL法确定指标权重,运用Grey-CIM方法进行评价。该方法既能给出运行绩效等级分布概率,还可对双重预防机制运行的配置和调整给予指导。

猪圆环病毒2型和3型检测方法建立及初步应用

为快速检测并鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)病毒。本文研究参考GenBank中PCV2和PCV3高度保守片段分别设计了探针引物,成功建立了一种双重TaqMan荧光定量检测方法。结果显示:该方法特异性好,可鉴别PCV2、PCV3与其他猪病病毒;PCV2最低检测下限为1.00×10^(1)copies/μL,PCV3最低检测下限为1.00×10^(0)copies/μL;重复性高,批内、批间的变异系数分别为0.01%~0.02%和0.02%~0.05%;本研究采用建立的方法与商品试剂盒同步检测猪只样品440份,PCV2样品符合率为97.47%,PCV3样品符合率为96.85%;测序结果显示,PCV2均为2d亚型,PCV3均为3c亚型。结果表明,建立的双重TaqMan荧光定量检测方法具有良好的特异性、敏感性且快速、准确,节约成本,可为PCV2和PCV3的监测与防控提供技术支撑。

基于OpenMC的反应性等效物理转换方法在双重非均匀性问题中的应用

由于基体中有着大量随机分布的弥散颗粒,双重非均匀系统具有复杂的几何结构,传统中子学计算方法往往难以处理双重非均匀系统,反应性等效物理转换(RPT)方法是常用的近似处理方法。通过分析RPT方法的三个关键步骤:精确初始值的求解、等效半径的求解、燃耗算法的选取,探讨了各步骤采用不同算法对RPT方法效率和精度的影响,并基于OpenMC在Python应用程序接口之上开发了RPT模块。数值结果表明,优化后的RPT模块,在保持良好计算效率的同时,也能满足工程计算精度的需要。

非洲猪瘟病毒与猪伪狂犬病病毒双重PCR检测方法的建立

为建立一种同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的方法,本研究根据GenBank中的ASFV 72基因和PR V UL27基因的保守序列分别设计2对特异性引物,通过对双重PCR反应条件的优化,建立快速检测ASFV和PR V的双重PCR方法,并对该方法的特异性和敏感性进行验证。特异性试验结果显示,该方法对ASFV与PRV核酸的扩增能获得246 bp和401 bp的特异性目的片段,而对PRRSV、PEDV和CSFV的核酸扩增均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对ASFV和PRV核酸最低检测量分别为0.01 pg和0.12 pg。结果表明:建立的双重PCR方法具有特异性强、敏感性较好、快速简便等特点,可用于这两种病毒的同时检测和鉴别诊断。

远程光纤传感网中滤波降噪方法的优化

为实现远程光纤传感网络在噪声干扰条件下的高精度检测传输,提出一种优化差分(optimized difference,OD)的降噪方法。基于移动平均法构建新差分算法,并结合低通算法、中值算法预判边缘信息及预测信号数值;采用双重判别弥补边缘信息误判的缺陷,优化准确定位边缘信息的能力;融合加权平均法与卡尔曼滤波器(Kalman filter,KF),优化信号预测的精度。实验验证结果表明:采用该方法进行数据预处理将使系统能够正常检测数据,测量精度可达0.76%,提高检测系统的抗噪性能。与先进小波阈值降噪方法的对比实验结果表明:斜率优化方法在≥10 dB噪声干扰下,测量精度相对提高0.62倍以上。

处理板状双重非均匀性系统的方法研究

针对弥散颗粒空间自屏效应产生的双重非均匀性,需对处理板状双重非均匀性系统的方法进行研究。本文通过对给定算例的计算,研究了DRAGON程序的Hebert和Sanchez-Pomraning双重非均匀性模型、环形RPT方法、IRPT方法和杂交RPT方法、基于颗粒直径的反应性等效物理转换(DRPT)方法处理板状双重非均匀性系统的能力,并与弥散模型参考值进行对比,结果表明:使用DRAGON程序的Hebert和Sanchez-Pomraning双重非均匀性模型可能会带来较大的计算误差,具有一定的局限性;IRPT方法和杂交RPT方法在燃耗计算过程中也存在一定的计算偏差;但是,本文提出的基于颗粒直径的反应性物理等效转换方法对于板状非均匀性系统的处理具有良好的计算精度,其操作简单、效果更好且适用范围广。

一种基于城市意象和五色体系的城市色彩规划方法

在城市规划与设计中,城市色彩的展现对彰显城市地域性风貌与文化特色,塑造城市意象,推动城市精细化发展有至关重要的作用。本文以云南滇中新区小哨国际新城色彩规划设计研究为基础,提出了一种基于城市意象与“五色体系”双重控制的城市色彩研究方法,该方法旨在传承地域气候、地理、文化、传统建筑等地域色彩,创新现代化城市功能定位和未来发展需求,可为国内城市更新过程中的色彩规划和控制提供参考。

关于计算机系统数据的双重属性在药品经营监管中应用的思考

药品经营环节是连接药品生产企业与消费者的重要纽带。目前,我国药品流通行业面临重重挑战,计算机系统数据中蕴藏的海量信息可以为药品经营环节的监管工作提供新的思路。本文阐述了计算机系统数据的状态记录和流程追溯双重属性,举例分析了计算机系统数据的双重属性在药品经营监管中的应用,并讨论了在实际监管工作中对计算机系统数据的检查方法,以期为药品经营行为的规范和实现对药品经营企业更精准、更高效的监管提供参考。

双重介质油藏压力动态分析的边界元方法

为了研究任意形状双重介质油藏中流体的渗流规律,建立了任意形状双重介质油藏不稳定渗流的数学模型。利用Laplace变换,将该模型转变成Laplace空间的修正Helmholtz方程,用边界元方法获得油藏内任意点的压力,进而由杜哈美原理得到考虑井筒储存效应和表皮效应的井底压力。不同边界条件双重介质油藏井底压力的典型曲线分析表明:窜流系数控制过渡段出现的早晚,裂缝弹性容量系数控制过渡段持续时间的长短,油藏的边界条件对油藏的压力动态存在明显影响。不渗透区域的存在对双重介质油藏压力导数曲线存在明显的影响,可根据压力导数典型曲线的特征识别近井大范围局部不渗透区域的存在。

疟疾双重PCR检测方法的建立和初步应用研究

目的建立一种适合于我国恶性疟、间日疟和两者混合感染地区,一次性检测人体内或蚊体内的恶性疟原虫(P.f.)和间日疟原虫(P.v.)的双重聚合酶链反应(PCR)法.方法根据疟原虫红内期SSUrRNA基因特定片段,设计合成3条寡核苷酸特异引物,在一个反应体系中,同时检测P.f.与P.v.的双重PCR技术,操作方法按PCR常规.结果从P.f.和P.v.感染血样中,分别扩增出274bp和412bp的特异片段,检出水平达1～5个虫/μl血,而人基因组DNA、约氏疟原虫、伯氏疟原虫均未见扩增条带;但食蟹猴疟原虫(P.c.)与P.v.相似,在412bp可见扩增条带.经对采自不同疟区发热待查病人的滤纸干血滴和确诊疟疾病人的静脉血检测,344例血样中,检出阴性112例、P.f.109例、P.v.114例、P.f.+P.v.9例,阳性率67.4%;比常规镜检的阳性率66.3%稍高,尤以检出P.f.+P.v.感染病例高.分别检测人工感染P.f.与P.v.各10只大劣按蚊的阳性唾腺,均被检出同种的阳性结果.结论一次性检测P.f.DNA与P.v.DNA的双重PCR法,敏感性高,特异性强,稳定性好,具有简化操作、提高工效、降低耗费的优点.对发热待查病人诊断和蚊媒感染疟原虫调查,以及疟疾病原学的检测质控方面,均有实用价值.

双重网格的Lattice Boltzmann方法

针对均匀网格的LatticeBoltzmann方法(LBM)计算效率较低的不足,引入有限差分方法(FDM)中双重网格算法的基本思想,结合LBM在连续流场上变量也连续分布的特点,推导出双重网格的LBM.这种算法充分利用粗、细两种网格各自不同的优点,加快了收敛速度,提高了流场的计算效率.通过模拟二维Poiseulle流动和后台阶流动两个算例,证明双重网格算法的计算时间明显地少于均匀网格算法的计算时间,计算结果正确可信.

基于双重犹豫模糊语言的多属性决策方法

结合语言术语集和双重犹豫模糊集给出了双重犹豫模糊语言集的定义,并给出双重犹豫模糊语言数的运算法则和比较方法。针对属性值为双重犹豫模糊语言数的多属性决策问题,提出集结双重犹豫模糊语言信息的双重犹豫模糊语言加权平均算子以及基于此算子的多属性决策方法,并将所提的决策方法应用于选址建厂问题以说明其可行性和有效性。

基于双重属性的“过程与方法”解读及三维目标描述建议

作为第八次基础教育课程改革的特色，“过程与方法”目标虽得到一线教师的认同，但在对其理解上存在误区，从各学科教学设计的目标扫描中便可发现典型问题：等同于能力、等同于知识、等同于过程、与其他两维目标交混。三维目标都具有双重属性，在其目标描述中可有所选择。

双重时间步方法在非定常流场模拟中的应用

在非定常流动的数值模拟中引入隐式双重时间步方法 ,并对 2种经典的非定常流动现象进行计算 ,取得令人满意的结果 ,证明双重时间步方法具有较好的精度和较快的收敛速度。应用此方法对压气机动静叶非定常流场进行研究 ,结果表明高损失区集中在边界层附近及尾迹区 ;上游叶片排尾迹对下游叶片通道流动影响很大 ,它增加边界层损失 ,并在通道中与主流发生强烈掺混 ,最终使得出口流场及损失分布较为均匀。

双重PCR方法检测检疫性细菌洋葱腐烂病菌和菊基腐病菌

为建立同步检测检疫性细菌洋葱腐烂病菌和菊基腐病菌的双重PCR方法,根据Gen Bank上公布的洋葱腐烂病菌ITS序列设计1对特异性引物B3/B6,将设计的引物与已发表的检测菊基腐病菌特异性引物ADE1/ADE2结合,经过条件优化,建立了双重PCR反应体系,并进行特异性和灵敏度验证。应用双重PCR体系能从洋葱腐烂病菌和菊基腐病菌基因组DNA以及人工带菌样品中扩增到特异性条带。结果表明,建立的双重PCR检测方法能同时检测出洋葱腐烂病菌和菊基腐病菌,可应用于口岸进口郁金香种球2种检疫性细菌的检测。

BPIV-3和BVDV双重RT-PCR快速检测方法的建立

参照GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)全基因序列,分别针对BPIV3特异性NP蛋白保守基因和BVDV保守区段E2基因设计2对引物,经优化反应条件建立了快速鉴别BPIV-3和BVDV的双重RT-PCR诊断方法。最佳扩增条件为94℃30s,56.2℃30s,72℃1min,循环30次;72℃延伸5min,16℃10min;BVDV引物浓度为1.0μmol/L,BPIV-3引物浓度为0.5μmol/L。采用该方法检测BPIV-3和BVDV参考病毒株,能同时扩增出预期为425bp和294bp大小的特异性片段,而扩增牛传染性鼻气管炎病毒、牛合胞体病毒、猪瘟病毒以及牛支原体、致病性大肠埃希菌、多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌和鼠伤寒沙门菌等均呈阴性反应。对参考病毒株进行梯度稀释检测,结果证明该方法检测BPIV-3的灵敏度可达10-3 TCID50/0.1mL,而BVDV的灵敏度达102 TCID50/0.1mL。