新辅助治疗后外周血双阴性T细胞比例与进展期直肠癌预后的关系研究

目的探究新辅助治疗后外周血双阴性T细胞(DNT)比例与进展期直肠癌预后的关系。方法回顾性收集2017年1月至2021年12月山西省肿瘤医院结直肠外科收治的219例直肠癌患者的临床资料,采集其新辅助治疗后的DNT比例指标,取中位数为截断值,将其分为DNT高水平组(DNT≥3%)125例和DNT低水平组(DNT<3%)94例,比较两组TNM分期、病理肿瘤退缩分级(TRG)、神经脉管侵犯、生存预后等指标。结果两组性别、年龄、体质量指数、肿瘤下界距肛门距离、术前肿瘤分期(cT分期、cN分期)、直肠周围筋膜侵犯情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。相较于DNT高水平组,DNT低水平组患者的神经脉管侵犯率较低(P=0.014),且有更好的生存预后(P=0.014)。结论新辅助治疗后外周血DNT比例与直肠癌患者的神经脉管侵犯及生存预后显著相关。DNT低水平组患者的神经脉管侵犯率更低,总体生存期更长。

早期ART对HIV急性期感染者双阴性T细胞频率和表型的影响

目的:评价早期抗病毒治疗(ART)对HIV感染者双阴性(DN)T细胞频率和表型的影响。方法:入组接受早期ART的HIV急性期感染者,流式细胞术检测DN T细胞的频率和表型。结果:HIV急性期感染者DN T细胞的比例较健康对照组显著降低,但早期ART不能使其完全恢复。HIV急性期感染者DN T细胞亚群Vδ1和Vδ2 T细胞的活化水平升高,与基线CD4^(+)T细胞数量呈负相关。尽管早期ART能使Vδ1和Vδ2 T细胞的活化正常化,但Vδ1/2^(neg)T细胞活化水平仍显著高于健康对照组,并与ART后CD4^(+)T细胞的数量呈负相关。结论:DN T细胞亚群频率和表型的变化与HIV感染者疾病进展和ART后CD4^(+)T细胞数量恢复有关。

银屑病患者外周血CD3^+CD(16+56)^+NK T细胞和CD3^+CD4^-CD8^-双阴性T细胞显著减少

目的分析银屑病患者外周血中CD3+CD(16+56)+自然杀伤T细胞(NK T)和CD3+CD4-CD8-双阴性(DN)T细胞的变化。方法应用三色流式细胞术分析结合CD45/侧向散射信号(SSC)和CD3/SSC设门分析外周血淋巴细胞亚群并应用Flow Count(荧光球进行绝对计数。结果银屑病组NK T细胞的比例3.58%±2.09%,显著低于健康对照组7.73%±5.8%(P<0.01);银屑病组NK T细胞绝对数(72.68±51.18)细胞/mm3也显著低于健康对照(193.15±160.09)细胞/mm3(P<0.01)。银屑病组DN T细胞绝对数(78.92±58.67)细胞/mm3同样显著低于健康对照组(148.33±118.00)细胞/mm3(P<0.01);而其比例在两组间差异无统计学意义。银屑病组总T细胞(1 254.73±411.73)细胞/mm3和抑制性T细胞(Ts)(465.23±212.65)细胞/mm3均分别显著低于健康对照组[T:(1 721.72±712.45)细胞/mm3;Ts:(800.23±581.79)细胞/mm3],P值均<0.01,银屑病组CD4/CD8比值显著升高(P<0.05)。结论银屑病患者外周血NK T细胞和DN T细胞显著减低。我们推测这两类细胞的异常减低与银屑病患者体内免疫调节功能失衡有关。

人体外周血CD3^+CD4^-CD8^-双阴性T细胞体外扩增的实验研究

目的探讨人体外周血CD3^+CD4^-CD8^-双阴性T细胞(DNT细胞)在体外进行分离和扩增的方法。方法取健康的成人外周血20ml,应用Rosettesep抗体吸附法去除CD4^+T细胞和CD8^+T细胞;再将DNT细胞放入anti-CD3mAb包被的培养板中,并加入rhIL-2、rhIL-4,共同培养,第10天和第14天计数细胞扩增倍数及记录扩增曲线;利用Easysep免疫磁珠法纯化,采用流式细胞仪检测其纯度。结果经分选、纯化后的DNT细胞,纯度可达94%以上;体外培养第10天和第14天,DNT细胞扩增倍数分别为53倍和41倍。结论通过Rosettesep抗体吸附法及Easysep免疫磁珠法分离及纯化DNT细胞是可行的,可获得大量高纯度的DNT细胞。

αβ-TCR^+CD3^+CD4^-CD8^-双阴性T细胞:一种新发现的免疫调节T细胞

免疫系统对自身或异体抗原产生免疫耐受的主要机制之一 ,是免疫调节T细胞的抑制性调节反应。此理论已在数种进行器官移植和自身免疫研究的动物模型中被证实。现已明确 ,免疫调节T细胞由多种不同的细胞亚型所组成。最近发现 ,一种新的抗原特异性αβ TCR+ CD4 CD8 免疫调节T细胞 (双阴性T细胞 ,DNT )能够抑制具有相同T细胞受者特异性的CD8+和CD4 + T细胞 ,从而抑制异体皮肤移植的排斥反应。有关DN调节T细胞及其独特抑制机制的研究 ,对于了解受者如何获得针对供体移植器官的特异性耐受 ,及正确理解如何保持对自身抗原的外周免疫耐受 。

双阴性T细胞对抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎的影响

目的分析抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎(AAV)患者外周血中双阴性T细胞(DNT)的表达情况。方法选取50例AAV患者(AAV组),按照疾病活动情况分为活动组36例和缓解组14例;按照有无肾损害分为肾损害组32例和非肾损害组18例。同期招募30例健康志愿者作为对照组。比较AAV组患者与对照组DNT细胞及胞内细胞因子白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素4(IL-4)和γ干扰素(IFN-γ)水平的差异及与患者临床指标的相关性。结果AAV组患者DNT、IL-17及IFN-γ水平高于对照组(P<0.05),而IL-4低于对照组(P<0.05)。AAV患者活动组DNT、IL-17水平高于缓解组(P<0.05)。AAV患者肾损害组DNT和IL-17水平高于非肾损害组(P<0.05)。AAV患者DNT与红细胞沉降率(ESR)、血清肌酐(Scr)、24h尿蛋白、伯明翰评分、抗中性粒细胞胞质抗体滴度呈正相关(P<0.05);IL-17与Scr、24h尿蛋白呈正相关(P<0.05),而IL-4、IFN-γ与临床指标无相关性(P>0.05)。结论DNT与AAV的发病有相关性。

系统性红斑狼疮患者CD4^- CD8^-双阴性T细胞检测及其临床应用价值

目的评估活动期系统性红斑狼疮患者的双阴性T细胞的临床应用价值。方法选取2012年1月-2016年12月收治的90例活动期系统性红斑狼疮患者作为研究组。同时抽取90例健康体检者作为对照组。统计分析研究组和对照组细胞免疫指标的情况。统计学分析采用描述性统计分析及t检验。结果与健康对照组比较,活动期SLE患者CD3^+CD4^-CD8^+T细胞,CD3^-CD19^+B细胞升高(P<0.05);CD4^+/CD8^+降低(P<0.05);CD3^+CD4^-CD8^-T细胞(Double negative T cell,DNT)升高(P<0.01)。结论细胞免疫指标对系统性红斑狼疮患者的免疫状态评价具有重要临床应用价值。其中,CD3^+CD4^-CD8^-双阴性T细胞(DNT)的检测尤为重要,应该重视。

CD4-CD8-双阴性T细胞在B细胞介导免疫反应中的作用

最近研究表明调节T细胞在免疫反应中发挥重要作用。CD4-CD8-双阴性T细胞(double negative T cell,DNT细胞),1种较少的调节T细胞亚群,在移植、肿瘤及自身免疫过程中发挥抗原特异性免疫调节功能。目前,在人类及小鼠的研究中发现DNT细胞不仅能抑制细胞和体液免疫应答,而且可以输入体内作为一种体细胞治疗来实现诱导免疫耐受和预防疾病。在这篇综述中,我们主要关注DNT细胞的起源,分子表型及其在B细胞相关免疫反应中的作用机制,以期利用DNT细胞更好地治疗B细胞介导的免疫性疾病。

外周血双阴性T细胞升高与临床疾病的关系

目的了解外周血双阴性T细胞(DNT)含量升高的临床疾病谱,探讨DNT升高的临床意义。方法回顾性分析2010年1月至2012年2月,收治患者中接受外周血T淋巴细胞亚群检测且DNT升高的病历资料,以临床诊断为金标准,按照疾病分类统计分析。T淋巴细胞亚群检测采用流式细胞学检测技术。结果健康人外周血DNT占淋巴细胞的(7.36±2.13)%,含量达(0.13±0.06)×109/L。送检患者中约有5.45%的外周血DNT增高,主要见于肺部细菌感染、全身性病毒感染、不明原因发热、胸膜炎、急性扁桃体炎、创伤、脑膜炎等。DNT在外周血淋巴细胞中的比例增高和绝对含量增高均以急性扁桃体炎为最高,不明原因的发热次之。增高患者中又以13～17岁青少年患者DNT升幅为最大。结论外周血DNT主要是在临床急性炎症性疾病时明显升高,可能参与了急性感染、严重创伤等患者的细胞免疫调节。

双阴性T细胞促进Babl/C小鼠B16F10种植瘤生长的机制研究

目的:探讨双阴性T细胞(DNT)促进B16F10黑色素瘤生长的可能机制。方法:以B16F10-luc-G5细胞系接种Babl/C小鼠建立种植瘤模型,IVIS监测生长动态。流式细胞仪检测外周血中T淋巴细胞的比例。流式分选正常小鼠的DNT及CD4+细胞。在体内,以从正常小鼠体内获得的外源性DNT干预种植瘤,IVIS监测肿瘤的生长动态,病理切片分析肿瘤组织病变。在体外,建立混合培养系统,观察DNT对淋巴细胞的杀伤功能及分化的影响,以及对CD4+细胞杀伤功能的影响。结果:荷瘤鼠DNT含量高于正常鼠(P<0.05);CD4+细胞含量与肿瘤大小高度负相关(R2=-0.99)。外源性DNT干预后种植瘤生长速度加快(P<0.05),病理显示肿瘤组织中淋巴细胞浸润较对照组少。体外实验中,DNT抑制总淋巴细胞的杀伤功能;DNT细胞直接抑制CD4+细胞杀伤功能。结论:DNT促进B16F10种植瘤生长主要机制之一可能为DNT直接抑制CD4+细胞杀伤功能,从而减少了CD4+细胞对肿瘤的杀伤作用。

OX40调控双阴性T细胞的转化及抑制功能研究

目的探讨免疫共刺激分子OX40对双阴性T细胞(DN T细胞)转化、抑制功能的影响及可能的作用机制。方法通过中和抗体及基因敲除的方式将OX40作用阻断,检测在这一过程中DN T细胞的转化效率、抑制功能的变化及OX40对DN T细胞存活的影响。结果通过DN T细胞的转化实验发现,将OX40阻断,DN T细胞的转化效率分别从20.2%、29.1%降为10.5%、15.9%。同时与CD4 T细胞相比,OX40在DN T细胞中高表达,其阳性率为27.0%。通过DN T细胞的体外抑制实验发现,OX40敲除后的DN T对CD4 T细胞的抑制作用明显减弱。通过Annexin V染色发现,OX40敲除后DN T细胞的凋亡率分别从14.6%、22.3%增加为21.1%、35.1%,同时OX40敲除使DN T细胞抗凋亡基因表达降低。结论 OX40敲除能降低DN T细胞的转化效率,减弱其对CD4 T细胞抑制功能,这有可能与OX40敲除所致DN T细胞凋亡增加有关。

sFasL及其受体在双阴性T细胞杀伤胰腺癌细胞中的作用及意义

目的探讨s Fas L(CD178)及其受体Fas(CD95,APO-1)在双阴性T细胞(DNT cell)杀伤胰腺癌细胞中的作用及意义。方法采用OKT3抗体吸附法培养DNT细胞。ELISA法检测DNT细胞上清液中的s Fas L的含量。Western blot和qRT-PCR法检测3株胰腺癌细胞中Fas的表达量。免疫组化法检测60例胰腺癌组织中Fas的表达情况,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果 ELISA法显示DNT细胞上清液中s Fas L含量比对照组高(t=3.00,P<0.01)。Western blot法检测Fas在3株胰腺癌细胞中均有较高表达,从低到高依次为Capan-1、BXPC-3、Panc-1。qRT-PCR法检测Fas mRNA在3株胰腺癌细胞中均有表达,从低到高依次为Capan-1、BXPC-3、Panc-1,且两两之间的差异均有统计学意义(F=211.56,P<0.05)。免疫组化法检测Fas在癌旁组织的阳性表达率高于癌组织(χ~2=8.62,P<0.05)。结论s Fas L/Fas途径可能是DNT细胞杀伤胰腺癌细胞的机制之一。

双阴性T细胞检测在自身免疫性淋巴细胞增生综合征诊断中的重要性:1例报告并文献复习

目的提高对自身免疫性淋巴细胞增生综合征(ALPS)的认识、减少漏诊,并认识TCRαβ+CD3+CD4-CD8-T细胞(DNTs)检测在本病诊断中的重要性。方法对1例ALPS患者资料进行临床分析及文献复习。结果该例患儿反复发生溶血性贫血、血小板减少。通过颈部淋巴结活检、骨髓形态及病理、染色体核型及DNTs比例、免疫球蛋白定量检测,发现患儿病史长达7年余,反复发生溶血性贫血、血小板减少、淋巴结及肝脾肿大。外周血DNTs比例为8.99%(>5%),IgG升高。糖皮质激素治疗有效。结论临床上出现无法解释的淋巴结肿大、肝脾肿大及自身免疫性溶血、血小板减少的患者应考虑ALPS可能,外周血DNTs比例检测有助于ALPS的早期诊断。

双阴性T细胞在恶性肿瘤中的治疗机制及其临床应用进展

双阴性T细胞(DNT),即TCR+CD3+CD4-CD8-T细胞,具有特殊的调节功能,其表面表达独特的标志物,分泌特有的细胞因子,在恶性肿瘤的诊断和过继免疫治疗中具有重要作用。近年来,DNT细胞的临床应用价值不断被挖掘,为恶性肿瘤的治疗带来了新的希望。深入研究DNT细胞的调控机制,将有助于临床解决恶性肿瘤的复发和转移这一难题。本文主要对DNT细胞免疫治疗调控机制及其临床应用做简要描述。

局灶性癫痫患者外周血双阴性T细胞的检测及临床意义

目的检测局灶性癫痫患者外周血双阴性T细胞(DNT、CD4-CD8-)的表达水平,探讨其在癫痫发病中的临床意义。方法选取2021年11月-2023年3月于徐州医科大学附属医院神经内科就诊、结合临床发作形式及辅助检查诊断为局灶性癫痫的患者89例为研究对象,选取同期健康体检者42人作为对照组。收集研究对象的外周血标本,检测外周血中T淋巴细胞亚群、细胞因子[白细胞介素1β(IL-1β)、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-17、干扰素-α(IFN-α)、IFN-γ、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,并进行DNT细胞与细胞因子、T淋巴细胞亚群的相关性分析,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价其预测价值。结果局灶性癫痫患者DNT、IL-1β、IL-5、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(Z=-6.15、-3.20、-3.09、-3.20、-2.41、-2.44,P均<0.05);两组间IL-2、IL-4、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-17、IFN-α、CD4^(+)、CD8^(+)细胞水平差异均无统计学意义(P均>0.05)。DNT细胞与IL-17、TNF-α成正相关(r=0.221、0.258,P均<0.05),与CD4^(+)成负相关(r=-0.332,P<0.05),与其余指标均无明显相关性(P>0.05)。ROC曲线分析显示,DNT、TNF-α、IL-1β、IL-5、IL-6、IFN-γ以及联合检测诊断局灶性癫痫的曲线下面积分别为0.816、0.785、0.674、0.668、0.674、0.631、0.858,对应的敏感度分别为64.04%、77.53%、64.04%、69.66%、48.31%、68.54%、67.42%,特异度分别为92.31%、69.05%、71.43%、57.14%、83.33%、57.14%、95.24%。结论局灶性癫痫患者外周血DNT细胞水平明显增高,DNT细胞与IL-17、TNF-α、CD4^(+)T细胞有相关性,可能在局灶性癫痫发病机制中参与重要作用。

双阴性调节性T细胞(DN Tregs)在系统性红斑狼疮患者外周血中的变化及意义

目的研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血中TCRαβ^+CD3^+CD4^-CD8^-T细胞即双阴性调节性T细胞(double negative regulatory T cells,DN Tregs)的表达水平及功能,并探讨DN Tregs在SLE疾病进程中的作用。方法通过流式细胞术检测20例SLE患者及20例健康对照者外周血CD3^+TCRαβ^+细胞中DN Tregs细胞的比例;采用ELISA的方法检测SILE患者及健康对照者血浆中IFN-γ,TNF-α,IL-6和IL-17A的表达水平,并分析DN Tregs与各细胞因子的相关性。结果与健康对照组相比,SLE患者组DN Tregs占TCRαβ^+细胞的比例升高,两组之间差异有统计学意义(t=3.54,P<0.01),SLE患者血浆中IFN-γ,TNF-α和L-6水平高于对照组,两组之间差异均具有统计学意义(t=2.824,2.085,2.304,均P<0.05)。DN Tregs的水平与IFN-γ的含量呈正相关(r=0.52,P=0.02),而与TNF-α,IL-6的含量无相关性(r值分别为0.17和0.16,P值分别为0.47和0.49)。结论 SLE患者外周血DN Tregs细胞比例显著上升,DN Tregs细胞可能在SLE发病及进展中发挥重要作用。

CD4^- CD8^-双阴性T细胞在移植免疫耐受形成中的作用

体内移植物抗宿主反应和宿主抗移植物反应主要是由T淋巴细胞介导。在同种异体移植时,因移植物的组织相容性抗原与受者不符,而刺激受者免疫系统发生排斥反应。由于移植物的细胞构成不同,触发的免疫反应会有所差异。去除T细胞或抑制T细胞的功能均能使移植物的存活时间延长。最近研究发现一种T细胞亚群——αβTCR^＋CD3^＋CD4^- CD8^-双阴性T细胞（double-nega-tiveTcell,DNT）可通过抑制同系基因型CD4^＋ T细胞或CD8^＋ T细胞从而抑制移植物排斥反应的发生,因此研究DNT细胞在移植免疫耐受形成中的作用将有重要意义。

双阴性T细胞与HIV-1疾病进程相关

目的探讨双阴性T细胞(double negative T cells,DNT)与人类免疫缺陷病毒(HIV-1)疾病进程相关性。方法 HIV-1感染者(150例)源于北京佑安医院男男性接触者(MSM)高危人群筛查队列。留取患者第一次血清抗体阳转随访点及1、2、4、8、12、24、36、48、60、72、96、108周随访点血液标本。分别用CD3-APC、CD4-FITC和CD8-PE抗体进行细胞表面染色,并通过流式细胞仪检测T细胞及DNT细胞数量。血浆病毒载量通过实时定量PCR方法进行检测。利用SPSS 11.5软件对数据进行分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果 DNT细胞的动力学变化与CD4+T细胞的动力学变化一致。DNT细胞数量与CD4+T细胞数量呈正相关,且CD4+T细胞数量较高患者其DNT细胞数量也相应较高。DNT细胞数量与病毒载量呈负相关,且病毒载量较低患者其DNT细胞数量较高。结论DNT细胞的数量与HIV-1疾病进程相关。

双阴性T细胞活化自然杀伤细胞促进小鼠暴发型肝炎的发生发展

目的检测双阴性T(double negative T,DNT)细胞对自然杀伤(natural killer,NK)细胞功 能的影响,初步探讨其在3型鼠肝炎病毒(murine hepatitis vims strain 3,MHV-3)诱导的小鼠暴发型肝炎 (fulminant viral hepatitis,FVH)模型中发挥的作用。方法通过腹腔注射MHV-3感染BALB/cJ小鼠诱 导FVH,尾静脉转移过继FVH小鼠脾脏DNT细胞,观察小鼠生存时间和肝脏组织病理学改变,流式细胞术检测小鼠肝脏NK细胞CD69表达情况。磁珠分选肝脏DNT细胞和NK细胞,共培养24h后,检测NK细胞CD69、胞内干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的表 达水平,利用乳酸脱氢酶释放实验检测NK细胞对原代肝细胞的杀伤作用。结果转移过继DNT细胞,FVH小鼠生存时间缩短,在三天内全部死亡。转移过继组小鼠肝脏NK细胞CD69表达比例较对照组显 著升高[(80.60±5.56)%比(4.53±4.82)%,P<0.05]。肝脏DNT细胞和NK细胞以10: 1比例共培养,NK细胞CD69表达比例较NK单独培养显著增加[(23.1±3.7)%比(4. 53±4.82)%<0.05], TNF-α表达水平升高[(8.9 ±2.3)%比(3.0 ±0.2)%,P<0.05],NK细胞对原代肝细胞的杀伤活性明 显增强[(7. 6±0.5)%比(3.7±0.4)%,P<0. 05]。结论DNT细胞可促进NK细胞活化和TNF-α表 达,增强NK细胞对肝细胞的杀伤作用,可能为DNT细胞参与FVH发生发展的机制之一。

外周血CD4^-CD8^-双阴性T细胞在小儿传染性单核细胞增多症患者中的表达

目的分析小儿传染性单核细胞增多症(infectiousmononucleosis,IM)患者外周血淋巴细胞亚群T、B和自然杀伤细胞(natural killer cells,NK)以及CD4^-CD8^-双阴性T细胞(double negative T cells,DNT)的表达水平,探讨DNT在IM发病中的作用.方法收集2017年12月1日至2018年4月30日在苏州九龙医院治疗并明确诊断为IM住院患者65例作为病例组,同时收集在本院健康体检儿童65名作为对照.采用流式细胞术,分析IM患儿及健康儿童外周血淋巴细胞亚群T、B和NK以及DNT细胞的表达.结果与健康对照组相比,IM患儿组总T淋巴细胞(CD3^+T细胞)表达率、细胞毒性T细胞(CD8^+T细胞)表达率高于健康对照组(t值分别为4.60和4.74,P值均<0.05).辅助性T细胞(CD4+T细胞)表达率、B细胞(CD19^+T细胞)表达率、NK细胞(CD56+T细胞)表达率、CD4/CD8比率均低于健康对照组,差异具有统计学意义(t值分别为5.28,2.57,4.61和4.16,P值均<0.05).IM患儿和健康儿童体内均有DNT细胞的表达,为γδ-T细胞表面受体(T cell receptor,TCR)型,且IM患儿体内高表达γδ-TCR型DNT细胞与健康儿童组相比,差异具有统计学意义(t=9.22,P<0.05).结论 IM患儿体内各淋巴亚群比例变化显著,IM患儿体内存在高表达γδ-TCR型DNT细胞,这有可能为传染性单核细胞增多症的实验室诊断提供新的方法.