BTEB2反义基因转染对大鼠颈动脉球囊损伤后内皮修复的影响

目的构建反义基本转录元件结合蛋白2(BTEB2)重组腺病毒载体,并研究BTEB2反义RNA对动脉损伤后内皮修复的影响。方法通过RTPCR从培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)中制备BTEB2cDNA,将其反向克隆至腺病毒载体,构建反义BTEB2重组腺病毒;用重组腺病毒局部转染球囊损伤的大鼠颈动脉,观察反义BTEB2基因转染对BTEB2蛋白表达及损伤内皮修复的影响。结果构建的BTEB2反义重组腺病毒经鉴定正确,其滴度为5×1010pfumL;反义BTEB2重组腺病毒转染可显著抑制BTEB2蛋白表达,明显促进内皮的修复,改善损伤动脉的内皮依赖性舒张功能。结论成功构建了反义BTEB2重组腺病毒载体。BTEB2反义基因转染可显著促进大鼠颈动脉球囊损伤后的内皮修复。

c-jun反义基因转染与缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞凋亡关系的研究

目的 探讨c jun反义基因转染与缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞凋亡的关系。方法 烧伤血清采自 3 0 %TBSAⅢ度烫伤Wistar大鼠 ;采用含 1%O2 的混和气体造成缺氧模型 ;采用基因重组技术构建c jun反义基因重组体 ;用Li pofectaminekit介导心肌细胞转染 ;用核苷酸末端转移酶介导的dUTP末端标记法 (TUNEL)检测心肌细胞的凋亡情况 ,同时对凋亡心肌细胞进行计数并作统计学分析。结果 加入烧伤血清并造成缺氧 (下文称非转染组 )后 12h ,2 4h和 48h ,凋亡心肌细胞数 (每高倍视野均数 )分别为 ( 7 1± 0 842 ) ,( 2 8 4± 1 63 5 )和 ( 13 2± 1 5 2 5 ) ;转染c jun反义基因 (下文称转染组 )后 12h ,2 4h和 48h ,凋亡心肌细胞数分别为 ( 4 1± 0 716) ,( 12 3± 1 45 5 )和 ( 8 5± 1 3 41) ,两组比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 c jun反义基因转染可以减轻缺氧复合烧伤血清处理心肌细胞凋亡性损伤。

反义基因转染抑制骨肉瘤中血管内皮生长因子表达的研究

目的 观察以腺相关病毒 (rAAV)为载体的血管内皮生长因子 (VEGF)反义基因转染的骨肉瘤细胞中VEGF蛋白的表达。方法 用不同量 (0、2 0、5 0、10 0、2 0 0、2 40 μl)的以rAAV为载体包装的反义VEGF基因 (rAAV antiVEGF)转染人骨肉瘤细胞系MG 63细胞 ,收集转染前后的培养细胞及上清 ,用链霉素抗生素蛋白 过氧化酶连接法 (SP)和免疫印迹法 (Western blot)检测VEGF蛋白的表达 ;用逆转录聚合酶链式反应 (PCR)检测VEGFmRNA表达。结果 SP结果表明转染rAAV antiVEGF基因的量越多 ,显色越淡 ;Western Blot结果表明转染rAAV antiVEGF基因的量越多 ,其灰度越低。测得不同量 (0、2 0、5 0、10 0、2 0 0、2 40 μl)的转染基因其相应的吸光度值分别为 86614± 13 776、73 2 45± 15 414、610 78± 12 12 4、5 465 7± 10 95 3、3 980 2± 113 0 8、3 2 0 14±15 0 5 7,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;PCR检测其灰度值分别为 0 .986、0 .913、0 .784、0 .60 6、0 .43 1、0 .40 8,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 rAAV antiVEGF可封闭VEGFmRNA ,使已转染rAAV antiVEGF的MG 63细胞表达的VEGF蛋白减少。

反义T-STAR基因转染降低肺腺癌A549细胞端粒酶活性

目的 通过反义技术抑制肺腺癌A5 49细胞T STAR (testes signaltransductionandactivatorofRNA)基因内源性表达,观察对细胞端粒酶活性的影响。方法 用阳性脂质体法将T STAR反义基因转染入A5 49细胞,用RT PCR及Westernblot方法检测转染细胞内源性T STAR基因mRNA和蛋白表达水平,并用PCR ELISA法检测细胞端粒酶活性改变。结果 反义基因可在mRNA及蛋白水平有效抑制肺腺癌A5 49T STAR基因的表达,同时明显降低细胞端粒酶活性。结论 肺腺癌A5 49细胞T STAR基因表达的抑制可能下调端粒酶活性。

高迁移率族蛋白框1反义核酸抑制人胰腺癌细胞系PCNA-1侵袭的研究

背景与目的:研究证明高迁移率族蛋白框1(highmobilitygroupbox1,HMGB1)在大多数未成熟及恶性肿瘤细胞中高表达,它与细胞增殖、侵袭、转移有密切关系。我们前期的研究证明HMGB1在胰腺癌组织中高表达并与肿瘤的侵袭及转移显著性相关。本研究的目的是观察HMGB1反义核酸对胰腺癌PCNA-1细胞体外侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法:以脂质体介导方法将HMGB1反义表达载体转染胰腺癌细胞株PCNA-1,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HMGB1、基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase-2,-9,MMP-2,MMP-9)mRNA的表达,Westernblot法检测HMGB1蛋白表达,明胶酶谱法(gelatinzymography)检测MMP-2和MMP-9活性的变化,Boyden小室法检测PCNA-1的体外侵袭能力。结果:HMGB1反义核酸明显抑制PCNA-1细胞HMGB1mRNA和蛋白的表达。转染后,MMP-2及MMP-9mRNA表达和酶活性亦受到显著抑制(P<0.01)。另外,HMGB1反义核酸的导入显著减弱了胰腺癌细胞的跨膜侵袭能力(P<0.01)。结论:HMGB1在胰腺癌侵袭转移中,阻断HMGB1基因的表达,可能是阻抑胰腺癌转移的一种新策略。

骨肿瘤

经后路一期全脊椎切除治疗胸椎肿瘤；胫骨平滑肌肉瘤伴全身多发骨转移一例；组织蛋白酶L反义基因转染对高转移人骨肉瘤细胞生物学行为的影响；四种不同尤文肉瘤树突状细胞免疫疫苗的体内外抗肿瘤免疫应答研究；骨旁脂肪瘤临床影像学表现与病理分析（文献综述附14例报告）；