逆转录病毒载体介导的反义c-myc抗白血病作用的研究

目的 :研究c-myc基因在L6 5 6 5小鼠白血病发生中的作用以及抑制其表达所起的治疗作用。方法 :用逆转录病毒载体pGNC构建一个含有小鼠反义c -myc基因的逆转录病毒表达系统pGNCas。用磷酸钙沉淀法将pGNCas导入包装细胞PA317,筛选获得病毒生产细胞。用pGNCas病毒感染L6 5 6 5白血病克隆细胞 ,筛选后 ,获得抗G418阳性克隆细胞L6 5 6 5as。PCR方法检测反义c -myc序列是否稳定整合入L6 5 6 5as细胞中。最后从细胞生长、形态、周期、软琼脂集落形成能力以及c -myc基因表达方面观察其恶性和表型的改变。结果 :L6 5 6 5as细胞形态变圆 ,大小较一致。生长曲线显示 :L6 5 6 5as细胞生长被抑制 ;流式细胞仪检测细胞周期 :L6 5 6 5as阻滞于G0 /G1期 ,S期细胞减少 ;软琼脂集落形成试验发现L6 5 6 5as细胞形成克隆数明显减少。免疫组化检测 :L6 5 6 5as细胞c-myc蛋白表达呈弱阳性 ,而对照组细胞呈强阳性。结论 :c -myc基因在L6 5 6 5小鼠白血病的发生中起着重要的作用 ;抑制c-myc的表达 ,可部分逆转L6 5 6 5白血病的恶性表型和恶性行为。