反义核酸基因治疗中电子计算机的辅助设计

本文概述了反义寡核苷酸作为基因治疗药物的状况 ,归纳了目前对妨碍反义寡核苷酸作为基因治疗药物取得快速进展的主要因素 :反义寡核苷酸作为基因治疗药物的有效性 ;反义寡核苷酸作为基因治疗药物的毒副作用。从细胞和基因水平详细介绍目前对这些影响因素的分析 :①反义寡核苷酸未能有效对靶基因的同源基因的鉴别是导致其毒副作用的主要原因。②靶基因的二、三级结构严重影响反义寡核苷酸达到靶位置。③影响反义寡核苷酸的传送和快速退火的问题。也介绍如何使用电子计算机方法对反义寡核苷酸的靶基因做全面分析 ,即对靶基因的二级结构和同源性分析 ,并最终设计出反义寡核苷酸 ,达到降低反义寡核苷酸作为治疗药物的毒副作用 ,提高治疗的有效性的目的。最后归纳出计算机辅助设计的方法。

骨肉瘤反义核酸基因治疗研究进展

上世纪90年代兴起的利用反义核酸对肿瘤进行基因治疗的新技术给骨肿瘤患者带来了新的希望。本文对骨肉瘤反义基因治疗的应用策略进行了较为详尽的阐述,并提出今后该领域发展的方向和前景。

血管内皮生长因子基因反义核酸的设计及其对K562细胞增殖的影响

目的 :试图用计算机设计并筛选出血管内皮生长因子 (VEGF)的高效反义核酸 ;用实验方法研究VEGF反义核酸对K5 6 2细胞增殖的影响。方法 :用RNAstructure (version 3.7)软件 ,选择总自由能 (overall△G3 7)相对低的反义核酸 ,共计 7条 ,长度 18- 2 0核苷酸 ,全硫代修饰 ;细胞培养 72h ,采用台盼蓝拒染法观察存活细胞 ,用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白水平 ,分析反义核酸对K5 6 2细胞的作用。结果 :筛选出 6条反义药物对K5 6 2细胞生长有明显抑制作用 ,均优于阳性对照组 (X2 )。与随机对照组 (X1)相比 ,最优序列X7组细胞生长抑制率达31 9%、培养液中VEGF蛋白表达抑制率达 5 1.4 % ,overall△G3 7与反义药物活性密切相关 (r=0 887,P <0 0 1)。结论 :计算机辅助设计有助于获得更好反义药物 ,VEGF反义药物可抑制K5 6 2细胞生长及VEGF蛋白表达 ,内源性VEGF蛋白具有促进K5 6

肿瘤基因治疗浅谈

随着现代分子生物学的迅速发展,基因治疗的出现为肿瘤疾病提供了一个全新治疗方法.肿瘤基因治疗是指将各种各样的目的基因通过某种方法导入靶细胞,使目的基因在靶细胞中转录、表达.产生相应的RNA或蛋白质,以达到直接或间接抑制肿瘤发生发展或杀伤肿瘤细胞的目的.欧美等许多国家做了大量研究工作,使该治疗方法从实险室研究进入临床试验阶段.目前,涉及基因治疗的肿瘤有黑素瘤、白血病、肺癌、脑胶质瘤、肝癌等.本文将简述基因治疗的发展.

Stathmin蛋白与肿瘤的研究进展

Stathmin蛋白不同的研究组给予其不同的命名．主要有P17、P18、P19、P19K、metablastin、癌蛋白18（Op18）、LAP18等。研究发现．由于其特有的微管解聚活性．在细胞周期纺锤体的形成过程中发挥十分重要的作用。多种恶性肿瘤中Stathmin都有高水平表达，通过抑制其表达可以干扰恶性细胞的分裂，从而使细胞生长停滞于G3/M期。Stathmin的过表达会影响作用于微管化疗药物的疗效。Stathmin基因反义核酸对多种恶性肿瘤有抗细胞增殖和抗肿瘤效应．为肿瘤生物治疗提供了一个分子新靶点。

口腔医学基础：口腔解剖生理学

20062238牙本质基质蛋白1基因反义核酸对MDPC-23细胞内、外钙离子浓度的影响；20062239单侧咀嚼肌痉挛患者在不同条件下咀嚼运动的功能性磁共振成像研究；20062240 6453名17421岁青年人恒牙发育异常的调查；20062241应激中述情障碍对唾液SIgA及Cor的影响.

胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达变化及其临床意义

目的观察胃癌组织长链非编码RNA(lncRNA)碱性亮氨酸拉链家族转录因子V-Maf鸟类肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物G-反义核糖核酸1(MAFG-AS1)、微小RNA-143-3p(miR-143-3p)表达变化,并探讨二者表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择胃癌患者105例,取手术切除的胃癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR技术检测lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达。收集胃癌患者临床病理资料和术后随访资料,分析胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果胃癌组织lncRNA MAFG-AS1相对表达量高于癌旁正常组织,miR-143-3p相对表达量低于癌旁正常组织(P均<0.05)。胃癌组织lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p表达与肿瘤组织分化程度、浸润深度、pTNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、肿瘤直径无关(P均>0.05)。胃癌组织lncRNA MAFG-AS1表达与miR-143-3p表达呈负相关关系(r=-0.699,P<0.05)。以lncRNA MAFG-AS1、miR-143-3p相对表达量的均数为临界值,将患者分为lncRNA MAFG-AS1高表达者55例与lncRNA MAFG-AS1低表达者50例、miR-143-3p高表达者48例与miR-143-3p低表达者57例。lncRNA MAFG-AS1高表达者3年总生存率低于lncRNA MAFG-AS1低表达者,miR-143-3p高表达者3年总生存率高于miR-143-3p低表达者(χ^(2)分别为4.783、5.383,P均<0.05)。结论胃癌组织lncRNA MAFG-AS1表达上调、miR-143-3p表达下调,二者表达变化与胃癌恶性生物学行为和患者预后不良有关。

lncRNA HOTAIR调节miR-20a-5p/TGF-β1轴改善新生癫痫大鼠认知能力

为探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)同源异型盒基因转录反义基因间RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)对miR-20a-5p/TGF-β1信号轴的调控作用及对新生癫痫大鼠认知能力的影响,采集20例癫痫患者及20例健康对照者肘静脉血,分离血清,qRT-PCR法检测lncRNA HOTAIR的表达;予新生大鼠腹腔注射海人酸构建癫痫模型,并随机分为正常对照组、模型组、lncRNA HOTAIR过表达(Lv-HOTAIR)组、阴性对照(Lv-NC)组、TGF-β1抑制剂组和Lv-HOTAIR+TGF-β1抑制剂组,每组20只。Racine分级标准评估大鼠的癫痫发作程度;水迷宫试验评估大鼠的认知功能;Timm染色观察大鼠海马组织苔藓纤维的发芽情况;免疫组化法检测M2型小胶质细胞特异性标志蛋白精氨酸酶1(Arginase 1,Arg-1)的阳性表达情况;TUNEL法评估大鼠海马神经元的凋亡情况;qRT-PCR法检测海马组织lncRNA HOTAIR、miR-20a-5p的表达;Western blotting检测海马组织TGF-β1、M1型小胶质细胞极化标志蛋白CD11、M2型小胶质细胞极化标志蛋白CD206、IL-6和IL-1β的表达;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA HOTAIR对miR-20a-5p的靶向调控作用以及miR-20a-5p对TGF-β1的靶向调控作用。建立癫痫体外细胞模型,同时上调lncRNA HOTAIR及miR-20a-5p表达,验证miR-20a-5p对lncRNA HOTAIR抗癫痫作用的逆转。结果显示,lncRNA HOTAIR在癫痫患者血清中的表达显著低于健康对照者(P<0.05);lncRNA HOTAIR可靶向负调控miR-20a-5p表达,miR-20a-5p可靶向负调控TGF-β1表达。与正常对照组相比,模型组大鼠癫痫发作等级评分升高,认知功能降低,苔藓纤维发芽及神经元凋亡严重,miR-20a-5p表达升高,lncRNA HOTAIR及TGF-β1表达降低,小胶质细胞M2型抑炎表型活性降低(均P<0.05)。上调lncRNA HOTAIR表达可降低癫痫大鼠疾病发作等级,提高认知功能,改善苔藓纤维发芽及减少神经元凋亡,抑制miR-20a-5p表达并增加TGF-β1介导的小胶质细胞M2型抑炎表型活化,发挥抗癫痫作用(均P<0.05)。TGF-β1抑制剂干预或上调miR-20a-5p表达均可削弱lncRNA HOTAIR发挥的促神经元存活及抗癫痫作用(均P<0.05)。由此,lncRNA HOTAIR可能通过下调miR-20a-5p表达,靶向上调TGF-β1表达增加小胶质细胞M2型抑炎表型活化,发挥抗癫痫作用。