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分子信标-TaqMan探针法实时荧光定量PCR新型探针及引物
被引量:
8
1
作者
姜文灿
岳素文
+2 位作者
江洪
葛素君
王成彬
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第11期107-114,共8页
在TaqMan探针法实时荧光定量PCR中,排除由引物探针聚合延伸引起的假阳性问题以及由引物二聚体(Primer Dimer,PD)引起的假阴性问题。首先对不同探针进行引物探针聚合实验;然后通过双重PCR的干扰实验选择合适的内标基因,并使用内标质粒检...
在TaqMan探针法实时荧光定量PCR中,排除由引物探针聚合延伸引起的假阳性问题以及由引物二聚体(Primer Dimer,PD)引起的假阴性问题。首先对不同探针进行引物探针聚合实验;然后通过双重PCR的干扰实验选择合适的内标基因,并使用内标质粒检测验证中部同序引物排除PD干扰的实用性;最后比较探针法不同体系检测HBV基因的灵敏度。结果表明,引物与探针聚合实验中,含有反义碱基的HBVP4在重复实验中未出现假阳性;竞争性双重PCR和非竞争性双重PCR两模板开始出现干扰作用的浓度差分别为20倍和100倍;对于内标基因,使用中部同序引物对以及普通引物对分别可以检测到10-9和10-8稀释度;3种HBV基因检测体系,使用普通引物对可以检测到Ct33左右,加入内标系统和使用中部同序引物对均可检测到Ct35左右。在TaqMan-分子信标结构调整的基础上引入反义碱基可以在排除由引物和探针聚合延伸引起的假阳性问题;在探针法中,使用中部同序引物对和加入内标系统均可降低PD的干扰程度,提升检测的灵敏度。
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关键词
实时荧光定量PCR
TAQMAN探针
反义碱基
引物二聚体
内标系统
下载PDF
职称材料
题名
分子信标-TaqMan探针法实时荧光定量PCR新型探针及引物
被引量:
8
1
作者
姜文灿
岳素文
江洪
葛素君
王成彬
机构
中国人民解放军总医院临检科
温州医科大学检验医学院生命科学学院
北京泰格瑞分子检验有限公司
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第11期107-114,共8页
基金
国家重大科学仪器设备开发专项(2012YQ03026107)
文摘
在TaqMan探针法实时荧光定量PCR中,排除由引物探针聚合延伸引起的假阳性问题以及由引物二聚体(Primer Dimer,PD)引起的假阴性问题。首先对不同探针进行引物探针聚合实验;然后通过双重PCR的干扰实验选择合适的内标基因,并使用内标质粒检测验证中部同序引物排除PD干扰的实用性;最后比较探针法不同体系检测HBV基因的灵敏度。结果表明,引物与探针聚合实验中,含有反义碱基的HBVP4在重复实验中未出现假阳性;竞争性双重PCR和非竞争性双重PCR两模板开始出现干扰作用的浓度差分别为20倍和100倍;对于内标基因,使用中部同序引物对以及普通引物对分别可以检测到10-9和10-8稀释度;3种HBV基因检测体系,使用普通引物对可以检测到Ct33左右,加入内标系统和使用中部同序引物对均可检测到Ct35左右。在TaqMan-分子信标结构调整的基础上引入反义碱基可以在排除由引物和探针聚合延伸引起的假阳性问题;在探针法中,使用中部同序引物对和加入内标系统均可降低PD的干扰程度,提升检测的灵敏度。
关键词
实时荧光定量PCR
TAQMAN探针
反义碱基
引物二聚体
内标系统
Keywords
real time fluorescent quantitative PCR
TaqMan probe
antisense base
primer dimer
internal control
分类号
R440 [医药卫生—诊断学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
分子信标-TaqMan探针法实时荧光定量PCR新型探针及引物
姜文灿
岳素文
江洪
葛素君
王成彬
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
8
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职称材料
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参考文献
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