端粒酶反义脱氧核苷酸与多糖对HL-60细胞的影响

目的 研究人类端粒酶反义脱氧核苷酸及其与梁金菇多糖协同作用对HL 6 0细胞凋亡及端粒酶活性的影响。方法 端粒酶反义脱氧核苷酸单独或与梁金菇多糖协同处理HL 6 0细胞后 ,分别用涂片法、流式细胞仪法和电镜检测两种药物处理后对细胞凋亡的影响 ,以TRAP Elisa法检测对端粒酶活性的影响。结果 端粒酶反义核酸单独或与梁金菇多糖协同处理HL 6 0均可提高细胞的凋亡率并抑制端粒酶活性 ,两者协同处理效果更显著。结论 端粒酶反义核酸可降低细胞的端粒酶活性并诱导细胞调亡 ,梁金菇多糖则可加强这种作用。

c-fos基因的反义寡聚脱氧核苷酸鞘内注入减弱福尔马林引起的大鼠伤害性行为反应及脊髓背角Fos蛋白和强啡肽 A表达的研究(英文)

本研究通过鞘内注射 c-fos反义寡聚脱氧核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODN)封闭背角中 F os蛋白的表达 ,观察了 Fos蛋白合成和慢痛反应的关系 ,并分析 Fos蛋白合成和强啡肽 A(Dyn A)表达之间的关系。实验组动物 (n=5 )鞘内预先注射 c-fos的 AS-ODN(5 0μg,5μl) ,另两个对照组 (每组 n=5 )分别注射等量生理盐水和 AS-ODN的反序核苷酸 (reverseoligodeoxynucleotides,RS-ODN,5 0μg,5μl) ;4h后 ,各组动物均在一侧后肢脚掌皮下注射 formalin(5 % ,5 0μl) ,并立即用计算动物舔拭注射侧后脚掌累计时间的方法 ,检测大鼠的伤害性行为反应 ,行为检测后 1h处死动物 ,用免疫组化方法检查脊髓背角中 Fos蛋白阳性神经元的数量和强啡肽 A(1～ 8)的表达量。结果发现 ,和两个对照组相比 ,实验组动物 Formalin诱发的伤害性行为反应的第二相明显减弱 ,同时 Form alin注射侧背角 F os蛋白样免疫阳性细胞的数量和 Dyn A含量的灰度值明显减少。本研究结果提示 ,外周伤害性刺激引起的长期持续的痛反应是以 c-fos基因表达增加及受其调控的 Dyn A表达上调为基础的 ,由此推测在脊髓背角神经元中 Fos蛋白和 Dyn

Survivin反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞生长的抑制

目的：观察survivin反义寡聚脱氧核苷酸（antisense oligodeoxynueleotide，ASODN）对人胃癌细胞株SGC-7901的抑制作用。方法：用ASODN与人胃癌细胞SGC-7901共同温育一定时间后，PCR检测ASODN处理后肿瘤细胞survivin mRNA的表达，倒置显微镜、电镜观察细胞生长形态变化，DNA电泳检测细胞DNA片段化分布，流式细胞术检测ASODN作用后人胃癌细胞SGC-7901的凋亡，TRAP法测定细胞端粒酶活性，MTT法检测ASODN对胃癌细胞增殖的抑制；上述实验以胃癌细胞不加ASODN和加无关寡聚脱氧核苷酸为对照。结果：ASODN作用后，肿瘤细胞survivin mRNA的表达受到明显抑制。survivin ASODN能诱导人胃癌细胞凋亡，在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；电泳呈凋亡特征性ladder条带；流式细胞术分析显示，在G1期前出现亚2倍体凋亡峰，肿瘤细胞凋亡率显著增高[（7．01±0、21）％ vs （25．00±0．52）％，P〈0．01]。ASODN作用后SGC-7901细胞端粒酶活性明显受到抑制（P〈0．01）。ASODN作用能明显抑制胃癌细胞的增殖，而且随ASODN浓度的增加（2×10^-5－5×10^-5mol／L）和作用时间延长（24－96h）而加强（P〈0．05或P〈0．01）。结论：survivin反义寡聚脱氧核苷酸能诱导胃癌细胞凋亡，从而抑制胃癌细胞的增殖。

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞的作用

目的 观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞株的作用。方法 用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人肝癌细胞株共同温育一定时间后 ,观察细胞形态变化 ,检测细胞DNA含量的分布 ,测定端粒酶活性。结果 端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人肝癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成 ;电泳呈凋亡特征性Ladder带 ;流式细胞仪分析显示 ,在G1 期前出现亚二倍体凋亡峰 ;端粒酶活性抑制。结论 端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,抑制端粒合成 。

bcl-2反义寡聚脱氧核苷酸抑制HL-60细胞生长的研究

在体外培养中研究了基因的反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleo-tide,ASON)对HL-60细胞生长增殖的影响。根据bcl-2基因cDNA的序列分析,以bcl-2mRNA翻译起始区域前15个核苷酸为作用靶序列,人工合成了15聚ASON片段,同时合成15聚无关寡聚核苷酸(ODN)片段,以作序列特异性对照。把上述ASON和无关ODN片段与HL-60细胞共培养,同时设置空白对照组,作用一定时间后分别测定细胞动力学和~3H-TdR掺入率。实验发现:从3.5—30.0μmol/L的ASON对细胞生长有不同程度抑制作用,低于10μmol/L时抑制作用小,大于10.0μmol/L时抑制作用显著,浓度愈大,抑制程度愈大,而无关ODN作用组的细胞生长状态与空白对照组无显著差别,作用48小时后浓度3.5μmol/L抑制率为6％,而20.0μmol/L时上升为40％;作用96小时后3.5μmol/L的ASON抑制率是5.1％,30μmol/L的抑制率高达67％。相同浓度的ASON作用不同时间后,细胞生长率各不相同,当浓度达到14.0μmol/L时,48小时的细胞生长抑制率达22％,72和96小时的抑制率分别为25％和29.3％。HL-60细胞被ASON处理后,培养体系中死细胞数随时间延长而增加,浓度在10—30μmol/L范围内,死细胞率由2％增到50％,但在无关ODN及空白对照组中未观察到这种现象。

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞的影响

目的 :观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的作用。方法 :用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人胃癌细胞株共同温育一定时间后 ,观察细胞形态变化 ,检测细胞DNA含量的分布 ,测定端粒酶活性。结果 :端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人胃癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成 ;电泳呈凋亡特征性Ladder带 ;流式细胞仪分析显示 ,在G1期前出现亚 2倍体凋亡峰 ;端粒酶活性抑制。结论 :端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导胃癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,抑制端合成 。

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞株端粒酶活性作用的实验研究

观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对肝癌细胞株的作用。用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与肝癌细胞株共同孵育一定时间后 ,观察细胞形态变化、细胞DNA含量的分布 ,测定端粒酶活性。端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成 ;电泳呈凋亡特征性Ladder带 ;流式细胞仪分析显示 ,在G1期前出现亚 2倍体凋亡峰 ;端粒酶活性抑制。端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,抑制端粒合成 ,从而抑制肝癌细胞的生长。

反义寡聚脱氧核苷酸抑制脑胶质瘤多药耐药基因1的表达

目的研究多药耐药基因1(M D R1)反义寡聚脱氧核苷酸对胶质瘤耐药细胞系C6/adr中M D R1表达的抑制作用。方法以胶质瘤细胞株C6/adr作为胶质瘤体外耐药模型,针对M D R1基因m R NA的A UG起始区-9～+6序列合成反义和相应的正义寡聚脱氧核苷酸,均经硫代磷酸化修饰。反义寡聚脱氧核苷酸(M D R1-AS)序列为5'-CTCCATCA CCAC CTC-3',正义寡聚脱氧核苷酸(M D R1-S)序列为5'-G AG GTG G TG ATG G AG-3'。在脂质体介导下M DR1-A S、M D R1-S转染C6/adr细胞,48h后利用形态学观察和噻唑蓝快速比色法检测M D R1-AS的细胞毒性作用;半定量R T-PCR检测M DR1-A S处理前后的M DR1m RN A的差异表达;流式细胞术分析P糖蛋白(P-gp)的阳性细胞率。结果M D R1-AS对C6/adr细胞无毒性作用;M D R1-AS处理后M D R1m RN A的差异表达由处理前的106%降至30.44%;P-gp阳性表达率亦由处理前的100%降至32.77%。结论M D R1反义寡聚脱氧核苷酸可有效抑制M D R1m R N A及P-gp的表达,从而为基因治疗耐药胶质瘤提供了实验依据,有望开发成为逆转胶质瘤耐药的反义药物。

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对子宫内膜癌细胞株的影响

目的观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对癌细子宫内膜癌细胞株的作用。方法用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与子宫内膜细胞株共同温育一定时间后,观察细胞形态变化,检测细胞Bcl-2蛋白表达情况,测定端粒酶活性。结果端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导子宫内膜癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为出现细胞质浓缩,变圆,核染色不均匀,核物质边聚成新月形或块壮;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,反义寡核苷酸在细胞进入DNA合成期前引起DNA损伤,使细胞停滞在G0～G1期,并诱导细胞凋亡。结论端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制端粒酶活性,诱导子宫内膜癌细胞凋亡,从而抑制子宫内膜癌的增殖。

DNA聚合酶α反义寡聚脱氧核苷酸抑制人胃癌细胞生长的研究

反义药物的研究为肿瘤的特异性治疗开拓了广阔的前景。DNA聚合酶α是真核细胞DNA合成的关键酶,与肿瘤的发生及发展密切相关。我们用DNA聚合酶α(DNA pol-α)mRNA作靶核酸,合成反义聚脱氧核苷酸(ASODN),作用于胃癌细胞系SGC-7901和MGC-803,结果发现互补于pol-α mRNA翻译起始区的ASODN可特异地抑制二株人胃癌细胞系的生长,而对正常人脐静脉内皮细胞则不起作用。流式细胞仪分析癌细胞G0/1期比率升高,S期及G2M期比率降低,说明ASODN通过抑制DNA pol-α表达而抑制了细胞DNA合成。

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸诱导人肝癌细胞凋亡模型构建的实验研究

目的 观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞株的作用。方法 用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人肝癌细胞株共同孵育一定时间后 ,观察细胞形态变化 ,观察细胞 DNA含量的分布 ,测定端粒酶活性。结果 端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人肝癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成 ;电泳呈凋亡特征性 Ladder带 ;流式细胞仪分析显示 ,在 G1期前出现亚 2倍体凋亡峰 ;端粒酶活性抑制。结论 端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,抑制端粒成 ,从而抑制肝癌细胞的生长。

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的影响

目的观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的作用。方法用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人胃癌细胞株共同温育一定时间后,观察细胞形态变化,检测细胞DNA含量的分布,测定端粒酶活性。结果端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人胃癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,在G1期前出现亚二倍体凋亡峰,端粒酶活性抑制。结论端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制端粒酶活性,诱导胃癌细胞凋亡,从而抑制胃癌细胞的增殖。

Midkine反义寡聚脱氧核苷酸对糖尿病肾病大鼠肾脏CTGF表达水平的影响

目的:研究中期因子(MK)反义寡聚脱氧核苷酸(AS-ODNs)对早期糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏结缔组织生长因子(CTGF)表达水平的影响,揭示MK AS-ODNs在早期DN中的治疗前景。方法:将SD大鼠完全随机分为正常组、DN组和MK AS-ODNs组各20只,DN组和MK AS-ODNs组行单肾切+高糖高脂饲料+链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型。成模第6周,MK AS-ODNs组尾静脉注射MK AS-ODNs,正常组和DN组予等量生理盐水,干预4 d后处死并留取肾脏组织,利用实时荧光定量PCR技术检测肾脏组织MK及CTGF的表达情况。结果:DN组大鼠肾脏MK和CTGF的表达水平较正常组明显增多且差异有统计学意义(P<0.05);MK AS-ODNs组大鼠肾脏MK和CTGF的表达水平较DN组明显减少且差异有统计学意义(P<0.05);MK与CTGF在大鼠肾脏组织的表达呈正相关(r=0.498,P<0.05)。结论:早期DN大鼠肾脏MK和CTGF的表达增多,MK AS-ODNs通过抑制MK的合成降低CTGF的表达水平,延缓DN进展。

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对MGC-803胃癌细胞的影响

目的探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN)对MGC-803胃癌细胞端粒酶活性及细胞生长的影响。方法将实验分为正常对照组、端粒酶正义寡聚脱氧核苷酸(sense oligodeoxy nucleotides,SODN)组和不同剂量的ASODN组;脂质体介导的ASODN和SODN作用于MGC-803细胞后,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、酶联免疫吸附法(ELISA)、吖啶橙染色法、流式细胞术检测细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞形态、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果转染48h后,终浓度为1、3及5μmol/L的ASODN对MGC-803细胞端粒酶活性及细胞的增殖均有抑制作用,与正常对照组比较差异显著(P<0.01),并呈一定剂量依赖性;流式细胞仪检测到凋亡峰,细胞被阻滞在G1/S期;吖啶橙染色后光镜下观察发现有典型的凋亡小体。结论以端粒酶RNA模板区为靶点的ASODN明显抑制MGC-803胃癌细胞的增殖,其机制可能是通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞的凋亡,ASODN对胃癌的治疗具有重要价值。

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸诱导人胃癌细胞凋亡模型构建的研究

目的：观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对胃癌细胞株的作用。方法：用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与胃癌细胞株共同孵育一定时间后，观察细胞形态变化，观察细胞DNA含量的分布，测定端粒酶活性。结果：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导胃癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，在形态学上表现为细胞膜起泡，染色质固缩，核碎裂，凋亡及小体形成；电泳呈凋亡特征性Ladder带；流式细胞仪分析显示，在D1期前出现亚2倍体凋亡峰；端粒酶活性抑制。结论：端粒酶反义寡取脱氧核苷酸能诱导胃癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，抑制端粒合成，从而抑制胃癌细胞的生长。

p38MAPK反义寡核苷酸对鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨丝裂素活化蛋白激酶p38(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,AODN)对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞。通过脂质体转染p38MAPK AODN到血管平滑肌细胞(VMSC)。另设p38MAPK正义寡聚脱氧核苷酸(SODN)对照组和空白对照组。用流式细胞仪检测细胞增殖。结果:AODN明显抑制血管紧张素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖(P<0.05～<0.01),其抑制作用呈剂量依赖性。结论:p38MAPK反义寡聚脱氧核苷酸能抑制大鼠的VSMC增殖,提示VSMC增殖与p38信号途径有关。

hTERT反义寡聚核苷酸对子宫内膜癌细胞Bcl-2蛋白含量的影响

目的观察人端粒酶逆转录酶反义寡聚脱氧核苷酸对子宫内膜癌Ishikawa细胞株Bcl-2蛋白表达含量的影响。方法将2.5μmol/L、5μmol/L及10μmol/L人端粒酶逆转录酶反义寡聚脱氧核苷酸与Ishikawa细胞株共同培养,于24、48、72 h采用MTT法检测细胞增殖,于48 h使用流式细胞仪检测细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达。结果人端粒酶逆转录酶反义寡聚脱氧核苷酸呈时间和剂量依赖性抑制Ishikawa细胞增殖,并可呈剂量依赖性诱导Ishikawa细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达量。结论人端粒酶逆转录酶反义寡聚脱氧核苷酸可以诱导Ishikawa细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖,该作用与降低Bcl-2蛋白表达量有关。

全硫代反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生长抑制作用

目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN)对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法将实验分为空白对照组、脂质体对照组、端粒酶全硫代正义寡聚脱氧核苷酸(Phosphorathioatesense oligodeoxy nucleotides,PS-SODN)组和不同剂量的全硫代反义寡聚脱氧核苷酸(Phosphorat-hioate an-tisense oligodeoxy nucleotides,PS-ASODN)组;②脂质体介导的细胞转染后,PS-ASODN和PS-SODN分别作用于卵巢癌HO-8910细胞后并培养24、48、72h,分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)、吖啶橙染色法、四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、流式细胞术检测HO-8910细胞的端粒酶活性、细胞形态、体外增殖、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果ELISA法检测结果显示端粒酶PS-ASODN作用卵巢癌HO-8910细胞72h后端粒酶活性表达为阴性,说明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性;②吖啶橙染色观察细胞形态:PS-ASODN作用的卵巢癌HO-8910细胞有明显凋亡现象,凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩,说明PS-ASODN能够促进卵巢癌HO-8910细胞凋亡;③MTT实验:PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖(P<0.0l),并呈一定剂量和时间依赖关系;④流式细胞仪检测细胞凋亡和周期:与空白对照组比较,PS-ASODN组G0/G1期细胞明显增多,差异显著(P<0.01);在G0/G1期前出现亚二倍体凋亡峰,表明细胞被阻止在G1/S期。结论PS-ASODN作用于卵巢癌HO-8910细胞后,卵巢癌HO-8910细胞增殖受到明显抑制,并出现凋亡;②PS-ASODN对端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系,即抑制率随着反义寡核苷酸的浓度和作用时间的增加而增大;③以端粒酶RNA模板区为靶点的PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖,其机制可能是通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞的凋亡,PS-ASODN对卵巢癌的治疗具有重要价值。

全硫代反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞生长及端粒酶活性的影响

目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(ASODN)对骨肉瘤细胞HOS细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法脂质体介导的细胞转染后,PS-ASODN和PS-SODN分别作用于骨肉瘤细胞HOS细胞后并培养24、48、72h,分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)、吖啶橙染色法检测骨肉瘤细胞HOS细胞的端粒酶活性、细胞形态改变。结果端粒酶PS-ASODN作用骨肉瘤细胞HOS细胞72h后端粒酶活性表达为阴性。PS-ASODN作用的骨肉瘤细胞HOS细胞有明显凋亡现象,凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩。结论 PS-ASODN对端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系,即抑制率随着反义寡核苷酸的浓度和作用时间的增加而增大。

反义c-myb寡核苷酸对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的:研究反义c-myb寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxy-nucleotides,ODN)对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响.方法:移植静脉外周涂加有反义c-mybODN的F127凝胶,于术后1周及2周测量平均厚度、观察血管内膜内c-myb蛋白表达情况.结果:手术后1周和2周,移植静脉内膜的平均厚度、内膜中c-myb蛋白的表达在反义c-mybODN组均减少,并存在量效关系(P<0.01).而只用F127胶组及正义ODN组均无抑制作用.结论:反义c-mybODN对移植静脉内膜增生有抑制作用,并存在量效关系.此作用可能是通过抑制血管内膜内细胞c-myb蛋白的表达来实现的.