反义转化生长因子β1基因逆转的骨肉瘤细胞对肿瘤侵袭和转移的预防意义(英文)

背景:转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)能通过自分泌和旁分泌机制促进肿瘤细胞的生长,最近有研究表明反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞后可以降低肿瘤细胞的增殖活性。目的:观察反义TGFβ1基因对骨肉瘤细胞恶性表型的逆转作用,探讨其预防骨肉瘤的发生、发展的意义。设计:完全随机设计,对照实验研究。地点和材料:研究地点为华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室。TaqDNA聚合酶、TRIzolTM试剂、SuperscriptPreamplificationSystem、胎牛血清、DMEM培养基、Lipofectamine、无血清培养基、G418、PCR引物、反义TGFβ1表达质粒pcDNA3-TGFβ1(-)、人骨肉瘤细胞系MG-63、Balb/c裸鼠、流式细胞仪、CO2培养箱、相差显微镜。方法:将反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞MG-63后,检测细胞周期、细胞凋亡和明胶酶A表达,并观察转染细胞软琼脂克隆形成数和裸鼠体内致瘤能力。主要观察指标:细胞周期和细胞凋亡检测;RT-PCR检测MMP-2基因表达;软琼脂培养克隆形成实验;裸鼠体内成瘤性的检测。结果:与MG-63和空载体转染细胞MG-pcDNA3相比,反义基因转染细胞MG-TGFβ1(-)的G0/G1期细胞从56.2%和60.1%增至71.6%,S期细胞从19.1%和17.8%降至12.9%,MMP-2mRNA表达明显减少。MG-TGFβ1(-)的软琼脂克隆形成数从48.

应用反义转化生长因子基因进行骨肉瘤基因治疗的研究

目的探讨反义转化生长因子β1基因治疗骨肉瘤的价值。方法用转基因技术将反义转化生长因子基因导入骨肉瘤细胞LM-8,构建转基因细胞株。用骨肉瘤细胞株LM8皮下注射C3H雄性小鼠建立小鼠骨肉瘤移植瘤模型。应用裸反义转化生长因子基因、灭活的转基因骨肉瘤细胞分原位和异位进行治疗。结果两种治疗措施都可表现出抑瘤作用,以灭活的转基因骨肉瘤细胞治疗效果最佳,原位治疗效果优于异位治疗。结论反义转化生长因子基因对小鼠移植性骨肉瘤有较好的实验治疗效果,为人骨肉瘤进行反义转化生长因子基因治疗提供了一定的依据。

反义转化生长因子βⅡ型受体表达质粒对实验性肝纤维化的影响

目的 观察反义转化生长因子βⅡ型受作(TGF βRⅡ)表达质粒对实验性肝纤维化的影响。方法 运用重组DNA技术中构建反义TGF βRⅡ真核细胞表达质粒,采用猪血清腹腔注射制备免疫性大鼠肝纤维化模型,实验动物分为肝纤维化模型组、反义TGF βRⅡ治疗组、pCDNA3对照组及正常对照组。反义TGF βRⅡ质粒和pCDNA3空质粒与糖化多聚赖氨酸偶联后经尾静脉分别导入大鼠体内,通过northern blot、RT-PCR、Western blot检测外源导入质粒在肝组织中的表达,检测血清转化生长因子β1(TGFβ1)、肝组织羟脯氨酸测定,Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组织化学与Van Gieson染色观察反义TGF βRⅡ质粒对大鼠肝纤维化的影响。 结果 反义TGF βRⅡ表达质粒可在肝组织中获得确切表达,其表达可使反义治疗组血清TGF β1含量下降,反义TGF βRⅡ治疗组为(23.16 ± 3.13)ng/ml,模型组为(32.96±3.79)ng/ml,F=36.73,P<0.01。肝组织羟脯氦酸含量下降,治疗组为(0.17±0.01)mg/g,模型组为(0.30±0.03)mg/g,F=15.48,P<0.01。减少了肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积,治疗组Ⅰ型胶原为650.26±51.51,Ⅲ型胶原为661.5 8±55.28,模型组Ⅰ型胶原为1209.44±16.60,Ⅲ型胶原为1175.14±121.44,F值分圳为69.87、70.46,P<0.01。并促进反义治疗组肝脏病理形态一定程度的改善。

反义转化生长因子βⅠ型受体表达质粒对实验性肝纤维化的影响

目的 观察反义转化生长因子 βⅠ型受体 (TβRⅠ )表达质粒对实验性肝纤维化的影响。方法 运用重组DNA技术构建反义TβRⅠ真核细胞表达质粒 ,经与糖化多聚赖氨酸偶联后 ,采用尾静脉注射将其导入猪血清诱导的免疫性大鼠肝纤维化模型体内 ;通过Northern印迹、RT PCR、Western印迹及免疫组化等方法检测外源导入质粒在肝组织中的表达 ,并通过检测血清TGFβ1浓度以及肝组织羟脯氨酸测定 ,Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组化与VanGieson染色观察反义TβRⅠ质粒对大鼠肝纤维化的影响。结果 反义TβRⅠ表达质粒可在肝组织中获得确切表达 ,其表达可抑制TGFβ1表达(P <0 .0 5 ) ,降低羟脯氨酸含量 (P <0 .0 1) ,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积 (P <0 .0 1) ,并促进肝脏病理形态一定程度的改善 (P <0 .0 1)。结论 反义TβRⅠ表达质粒对肝纤维化有较好的改善作用。

反义转化生长因子β1抑制人膀胱癌细胞体内外增殖的实验研究

目的 探讨反义转化生长因子 β1(TGFβ1)对人膀胱癌细胞体内外增殖的抑制作用。方法 将携TGFβ1反义基因的逆转录病毒载体pRevTβ AS转染膀胱癌EJ细胞 ,观察转染细胞体外及SCID小鼠皮下生长情况 ,通过免疫组化方法评价细胞增殖活性的改变 ;通过病理图像分析和电子显微镜技术观察体内生长的EJ细胞形态学和超微结构改变 ;采用流式细胞分析技术观察转染后细胞周期时相分布的变化。结果 pRevTβ AS能有效抑制EJ细胞TGFβ1mRNA转录和蛋白表达。体外实验表明 ,转染反义TGFβ1可使EJ细胞体外增殖活性和S期细胞比例明显降低 ;体内实验证实 ,反义组种植肿瘤的形成和生长被有效抑制 ,DNA异倍体细胞比例和基因复制活跃程度明显低于对照组。结论 转染反义TGFβ1能明显减弱EJ细胞致瘤性 。

纳米粒子载体携带反义转化生长因子-β1基因的局部定位转染对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的探讨纳米粒子携带反义转化生长因子(TGF-)β1局部定位转染对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响。方法45只大鼠制成自体静脉移植模型后,分成纳米粒子DNA组、纳米粒子空载体组和生理盐水对照组,进行局部定位转染,2周后观察移植静脉内膜的变化,应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、Westernblot以及免疫组织化学等方法检测反义基因对内源性TG-Fβ1表达的影响。结果基因转染后两周,内膜厚度为(20.5±4.7)μm,明显小于两个对照组(P<0.01)。RTPCR和Westernblot结果表明,基因转染组的TGF-β1mRNA和蛋白的表达明显低于空载体组及生理盐水对照组。结论纳米粒子可有效地作为基因的转移载体;纳米粒子携带反义TGF-β1可以减少内源性TGF-β1基因的表达,抑制细胞外基质(ECM)的合成,从而达到抑制内膜增生的目的。

反义转化生长因子-β1基因对骨肉瘤细胞表达转移相关因子的影响

目的 探讨反义转化生长因子(TGF) β1基因转染对骨肉瘤细胞MG 63表达基质金属蛋白酶(MMPs)和尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA )等肿瘤转移相关因子的影响。方法 将反义TGF β1基因转染MG 63 ,G418筛选转染细胞后,采用Northernblot法检测转染细胞MMP 2、MMP 9和uPA的表达情况。结果 反义TGF β1基因转染骨肉瘤细胞上清培养的Mv 1 Lu细胞增殖活性为0 .975±0 .0 16(对照组1.0 3 2±0 .0 2 7,P >0 .0 5 ) ;Northernblot法检测显示MMP 2和uPAmRNA的表达明显降低。结论 通过反义基因技术阻断骨肉瘤细胞TGF β1自分泌环,在降低肿瘤细胞TGF β1表达的同时,也降低了转移相关因子MMP 2、uPA的表达。

反义转化生长因子-βⅡ型受体对支气管成形术后吻合口狭窄的影响

目的评价反义转化生长因子(TGF)-βⅡ型受体腺病毒表达系统对支气管成形动物模型吻合口胶原合成的影响。方法将行左上肺支气管成形术的试验犬分为3组,A组雾化吸入蒸馏水,B组吸入腺病毒空白载体,C组吸入反义TGFβⅡ型受体腺病毒各1周,4周后取吻合口组织检测TGFβⅡRmRNA和I型胶原的合成量。结果C组的TGFβⅡRmRNA合成量(0.75±0.13)和I型胶原的合成量(829.50±78.30)较A(1.96±0.20和1167.20±94.10)B(1.89±0.17和1291.30±103.50)两组均减少,差异有统计学意义(P<0.05);AB两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论应用反义TGFβⅡ型受体腺病毒表达系统阻断TGFβ的作用可以减少细胞外胶原的合成,从而发挥抑制吻合口瘢痕增生的作用。

反义转化生长因子-β1基因逆转骨肉瘤细胞恶性表型的研究

目的 观察反义转化生长因子 (TGF) β1基因对骨肉瘤细胞恶性表型的逆转作用。方法 将反义TGF β1基因转染骨肉瘤细胞MG 63后 ,以G418(4 0 0mg/L)筛选 14d ,获得转染细胞系。分别检测细胞周期、细胞凋亡和明胶酶A(MMP 2 )表达 ,并观察转染细胞软琼脂克隆形成数和裸鼠体内致瘤能力。结果 与MG 63和空载体转染细胞MG pcDNA3相比 ,反义基因转染细胞MG TGF β1(-)的G0 /G1期细胞从 5 6.2 %和 60 .1%增至 71.6% ,S期细胞从 19.1%和 17.8%降至 12 .9% ,MMP 2mRNA表达明显减少。MG TGF β1( )的软琼脂克隆形成数从 48.6± 8.1和45 .2± 4.7减至 2 8.2± 5 .6,裸鼠体内形成肿瘤的体积 (83 .4± 2 7.4)mm3 也明显小于MG 63组(191.3± 2 1.5 )mm3 和MG pcDNA3组 (2 0 4.2± 3 0 .7)mm3 。结论 反义TGF β1基因转染骨肉瘤细胞可以逆转肿瘤细胞的恶性表型 ,抑制肿瘤的侵袭和转移。

应用反义TGF-β1基因进行骨肉瘤免疫基因治疗的研究

目的探讨反义转化生长因子β1基因治疗骨肉瘤的价值。方法用转基因技术将反义转化生长因子基因导入骨肉瘤细胞LM8,构建转基因细胞株。用骨肉瘤细胞株LM8皮下注射C3H雄性小鼠建立小鼠骨肉瘤移植瘤模型。应用灭活的转基因骨肉瘤细胞、灭活的未转基因骨肉瘤细胞分原位和异位进行治疗。结果两种治疗措施都可表现出一定程度的抑瘤作用,其中以灭活的转基因骨肉瘤细胞治疗效果最佳,原位治疗效果优于异位治疗。结论灭活的骨肉瘤细胞也有一定的免疫治疗作用;反义转化生长因子基因对小鼠移植性骨肉瘤有较好的实验治疗效果,为人骨肉瘤进行反义转化生长因子基因治疗提供了一定的依据。

lncRNA TGFB2-AS1在子痫前期胎盘中表达及与胎盘螺旋动脉重铸的关系

目的探讨子痫前期胎盘中长链非编码RNA转化生长因子β2-反义RNA1(lncRNA TGFB2-AS1)表达水平与胎盘螺旋动脉重铸的关系。方法选取2019年10月至2021年6月于枣庄市妇幼保健院住院并行剖宫产术分娩的108例重度子痫前期孕妇为研究对象,并将其分为晚发子痫前期组(晚发型重度子痫前期孕妇,56例)和早发子痫前期组(早发型重度子痫前期孕妇,52例);同期选取58例正常妊娠孕妇为正常妊娠组。收集孕妇年龄、收缩压、舒张压等一般资料;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测胎盘组织lncRNA TGFB2-AS1表达水平,扫描电子显微镜下测量螺旋动脉管腔面积和管壁厚度;采用Pearson相关分析法分析早发型和晚发型重度子痫前期孕妇胎盘组织lncRNA TGFB2-AS1水平与螺旋动脉管壁厚度、管腔面积的相关性。结果早发子痫前期组管壁厚度[(119.69±8.31)μm]、收缩压[(162.86±4.94)mmHg]、舒张压[(103.09±2.35)mmHg]、24 h尿蛋白[(2.17±0.31)g/24 h]高于晚发子痫前期组[(101.04±5.78)μm、(146.95±6.43)mmHg、(92.13±4.74)mmHg、(1.62±0.23)g/24 h]和正常妊娠组[(99.82±5.56)μm、(116.42±9.31)mmHg、(74.25±6.74)mmHg、(0.06±0.02)g/24 h];胎盘组织lncRNA TGFB2-AS1水平(0.62±0.16)及管腔面积[(133.74±20.16)μm^(2)]、分娩孕周[(32.15±1.74)周]、新生儿体质量[(2.25±0.26)g]低于晚发子痫前期组[(0.99±0.21)、(185.49±22.75)μm^(2)、(36.14±1.59)周、(3.37±0.32)g]和正常妊娠组[(1.02±0.23)、(186.42±23.71)μm^(2)、(38.19±1.56)周、(3.42±0.37)g](P<0.05)。晚发子痫前期组收缩压、舒张压、24 h尿蛋白高于正常妊娠组,分娩孕周低于正常妊娠组(P<0.05)。早发型重度子痫前期孕妇胎盘组织lncRNA TGFB2-AS1与管腔面积呈正相关,与管壁厚度呈负相关(P<0.05);晚发型重度子痫前期孕妇胎盘组织lncRNA TGFB2-AS1与管腔面积、管壁厚度均无相关性(P>0.05)。结论早发型重度子痫前期孕妇胎盘组织lncRNA TGFB2-AS1异常低表达,可能与胎盘螺旋动脉重铸不足有关。