与排异反应相关基因克隆及其反义转基因载体构建

目的克隆与排异反应密切相关的iNOS基因cDNA片段,并构建反义转基因载体。方法培养人血管内皮细胞HVEC细胞株,采用反转录-PCR方法获取iNOS cDNA基因片段,并克隆入T载体并进行序列分析。用HindIII与BamHI双酶切带有iNOS cDNA片段的T载体质粒与pCDNA5载体,回收酶切产物,连接,转化,提取质粒并酶切鉴定。结果RT-PCR获取了669bp的iNOS基因片段;序列分析表明克隆的iNOS片段序列正确;双酶切分析显示克隆入pCDNA3载体的iNOS基因片段与预期的大小一致。结论克隆了iNOS基因片段,并构建了iNOS的反义转基因载体。