渗透胁迫下玉米自然反义转录本cis-NAT_(ZmNAC48)启动子的功能分析

前期研究发现自然反义转录本cis-NAT_(ZmNAC48)可负调控干旱响应基因ZmNAC48,为了进一步探索cisNAT_(ZmNAC48)的功能,本研究以cis-NAT_(ZmNAC48)cDNA序列、ZmNAC48蛋白质编码序列检索玉米B73参考基因组,获取基因上游启动子序列,并利用PlantCARE[1]和New PLACE[2]预测启动子调控元件,发现cis-NAT_(ZmNAC48)和ZmNAC48启动子序列中除含有CAAT-box,TATA-box等基本元件外,还含有激素响应元件以及转录因子结合元件等。构建cis-NAT_(ZmNAC48)和ZmNAC48启动子融合GUS的表达载体,并通过花序侵染法获得转基因拟南芥。分析GUS染色和GUS酶活性发现,Pro_(cis-NAT_(ZmNAC48)):GUS和Pro_(ZmNAC48):GUS转基因拟南芥根、茎、叶中均有GUS表达,且渗透胁迫处理后Pro_(cis-NAT_(ZmNAC48)):GUS转基因拟南芥中GUS基因的表达量和GUS酶活性显著降低,而Pro_(ZmNAC48):GUS转基因拟南芥中GUS基因的表达量和GUS酶活性显著增加,可见cis-NAT_(ZmNAC48)和ZmNAC48启动子均响应渗透胁迫。DNA甲基化是影响启动子活性的调控事件之一,本研究通过分析cis-NAT_(ZmNAC48)启动子区域DNA甲基化情况,发现在cis-NAT_(ZmNAC48)序列前400~1000 bp存在DNA甲基化修饰,渗透胁迫处理后,该甲基化区域甲基化富集情况发生了显著的变化,但发生显著性变化的甲基化位点并未在顺式调控元件上。这些结果为后续cis-NAT_(ZmNAC48)的调控分析奠定了重要的基础。

高血压性脑出血患者长链非编码RNA锌指结构反义转录本1的表达与颅内动脉狭窄程度及预后的关系

目的 探讨高血压性脑出血(hypertensive intracerebral hemorrhage,HICH)患者长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)锌指结构反义转录本1(zine finger antisense 1,ZFAS1)表达量与颅内动脉狭窄程度及复发性高血压性脑出血(recurrent hypertensive intracerebral hemorrhage,RHCH)的关系。方法 回顾性分析2014年2月至2020年2月河北省保定市第二中心医院收治的192例HICH患者的临床资料和随访资料,根据随访期间是否出现RHCH将研究对象分为RHCH组(出现RHCH,30例)和非RHCH组(未出现RHCH,162例)。比较分析两组患者的临床特征。采用Pearson相关系数法分析LncRNA ZFAS1表达量与颅内动脉狭窄程度的相关性。采用受试者工作特征曲线分析LncRNA ZFAS1表达量对RHCH的预测价值。采用多因素logistic回归方法分析RHCH的独立影响因素。结果 RHCH组患者的年龄、收缩压、血肿体积、颅内动脉狭窄程度、LncRNA ZFAS1表达量均显著大于或高于非RHCH组(P<0.05),格拉斯哥昏迷评分显著低于非RHCH组(P<0.05)。Pearson相关系数法分析结果显示,LncRNA ZFAS1表达量与颅内动脉狭窄程度呈显著正相关(r=0.615,P<0.001)。受试者工作特征曲线分析结果显示,LncRNA ZFAS1表达量预测RHCH的曲线下面积为0.881,敏感度为80.0%,特异度为82.0%。多因素logistic回归分析结果显示,年龄、收缩压、颅内动脉狭窄程度、格拉斯哥昏迷评分和LncRNA ZFAS1表达量是RHCH的独立影响因素(P<0.05)。结论 LncRNA ZFAS1表达量与颅内动脉狭窄程度和RHCH的发生相关,且对RHCH的发生具有一定预测价值。

外泌体源性长链非编码RNA同源框基因A-反义转录本3通过吸附微小RNA-29b-3p调节前列腺癌去势抵抗的作用机制

目的探讨外泌体来源长链非编码RNA(lncRNA)同源框基因A-反义转录本3(HOXA-AS3)对前列腺癌(PCa)去势抵抗的作用机制。方法建立PC-3与LNCaP共培养体系,用双荧光素酶报告基因检测、荧光定量聚合酶链反应(PCR)和挽救实验等验证HOXA-AS3参与PCa去势抵抗和进展的机制。采用动物实验和人PCa组织切片,探究HOXA-AS3在由雄激素依赖性向非依赖性的转化过程中的作用。采用两样本t检验和单因素方差分析(One-WayANOVA)进行统计分析。结果ASO-NC转染组LNCaP细胞侵袭数量显著低于ASO-miR-29b-3p转染组[(116.00±5.10)个比(146.33±4.78)个,t=6.135,P<0.05],NC转染PC-3组显著高于miR-29b-3pmimic转染组[(394.33±11.95)个比(111.67±7.41)个,t=28.425,P<0.05]。LNCaP-HOXA-AS3-exo中HOXA-AS3显著高于LNCaP-exo(1.46±0.08比1.01±0.02,t=7.634,P<0.05),而PC-3-HOXA-AS3-ASO-exo中HOXA-AS3显著低于PC-3-exo(0.53±0.06比1.00±0.09,t=5.943,P<0.05)。转染miR-29b-3p-mimic组的野生型HOXA-AS3、野生型STAT3-3和野生型Mcl-1组的细胞荧光素酶活性低于对照组(1.00±0.04比0.51±0.02、1.00±0.02比0.56±0.04、1.00±0.02比0.57±0.02,t=18.058、15.857、26.081,P<0.01)。同时转染pcDNA3.1-STAT3和Mcl-1-promotor载体组免疫荧光强度高于对照组(1.72±0.05比1.00±0.03,t=18.717,P<0.05),并且cytochromec和Caspase-9的表达低于对照组(0.46±0.01比0.81±0.01、0.28±0.01比0.59±0.01,t=92.492、97.212,P<0.01)。结论HOXA-AS3通过吸附miR-29b-3p调节STAT3/Mcl-1/cytochromec/Caspase-9轴,调节PCa的去势抵抗。

天然反义转录本Tetraspanin31调控CDK4的分子机制

目的:探讨天然反义转录本Tetraspanin31调控CDK4的分子机制。方法:针对TSPAN31设计合成靶向干扰的siRNA,转染肝癌细胞,qRT-PCR和免疫印迹检测肝癌细胞实验组与对照组细胞CDK4的转录和翻译水平,免疫印迹检测细胞周期蛋白Cyclin D1、转录因子E2F1蛋白表达水平;在HEK293T细胞、Hela细胞中转染过表达TSPAN31全长、编码区及3’末端非翻译区质粒,qRT-PCR及免疫印迹检测CDK4基因转录和翻译水平。结果:与对照组相比,肝癌细胞siRNA干扰后TSPAN31蛋白相对表达量显著降低,CDK4相对表达量显著升高,Cyclin D1、E2F1蛋白相对表达量升高(均P<0.05)。与对照组相比,HEK293T细胞、Hela细胞转染过表达TSPAN313’末端非翻译区质粒组及过表达TSPAN31全长质粒组CDK4转录及翻译的相对表达水平显著降低(均P<0.05),而转染过表达TSPAN31编码区质粒组没有显著差异(均P>0.05)。结论:TSPAN31可在肝癌细胞中调控信号通路蛋白Cyclin D1、CDK4及E2F1蛋白表达,TSPAN31对CDK4的调控作用可能主要是通过转录产物的3’末端非翻译区进行的。

基于长链非编码RNA HOX转录反义RNA探讨次乌头原碱对人肝癌SK-Hep-1细胞自噬的影响实验研究

目的:基于长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)探讨次乌头原碱对人肝癌SK-Hep-1细胞自噬的影响。方法:取对数期人肝癌SK-Hep-1细胞,将lncRNA HOTAIR抑制质粒lncRNA HOTAIR-shRNA转染至SK-Hep-1细胞,随机分为转染组和联合组,转染组常规培养,联合组加入次乌头原碱(终浓度200μmol/L)。另取SK-Hep-1细胞随机分为空白组和次乌头原碱组,空白组常规培养,次乌头原碱组加入次乌头原碱(终浓度200μmol/L)。48 h后收集细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组lncRNA HOTAIR表达量;流式细胞仪检测各组凋亡率;绿色荧光蛋白(GFP)-微管相关蛋白1轻链3(LC3)转染检测各组自噬情况;免疫印迹法检测细胞Beclin1、P62、微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)蛋白相对表达量。结果:与空白组比较,次乌头原碱组lncRNA HOTAIR表达量升高,转染组lncRNA HOTAIR表达量降低(均P<0.05)。与次乌头原碱组比较,联合组lncRNA HOTAIR表达量降低(P<0.05)。与转染组比较,联合组lncRNA HOTAIR表达量升高(P<0.05)。与空白组比较,次乌头原碱组细胞凋亡率及Beclin1、P62、LC3Ⅰ蛋白相对表达量升高,GFP-LC3斑点数增加(均P<0.05);转染组细胞凋亡率及Beclin1、P62、LC3Ⅰ蛋白表达量降低,GFP-LC3斑点数减少(均P<0.05)。与次乌头原碱组比较,联合组细胞凋亡率及Beclin1、P62、LC3Ⅰ蛋白相对表达量降低,GFP-LC3斑点数减少(均P<0.05)。与转染组比较,联合组细胞凋亡率及Beclin1、P62、LC3Ⅰ蛋白相对表达量升高,GFP-LC3斑点数增加(均P<0.05)。结论:次乌头原碱可能通过诱导人肝癌SK-Hep-1细胞过度自噬而促进细胞凋亡,其作用机制可能与上调LncRNA HOTAIR表达有关。

长链非编码RNA HOX转录反义RNA靶向miR-206对结直肠癌细胞迁移、侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)靶向miR-206对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法常规培养人结直肠癌HT-29细胞,将合成的HOTAIR si RNA和siRNA control转染于HT-29细胞,设置为si-HOTAIR组、si-con组,未进行转染的HT-29细胞设置为空白组。实时荧光定量聚合酶链反应测定转染效果,Transwell和划痕愈合实验检测HT-29细胞侵袭和迁移情况。生物信息学软件分析HOTAIR与miR-206区域结合位点,构建突变型(HOTAIR 3’UTR mut)和野生型(HOTAIR 3’UTR wt)萤光素酶报告载体,将HOTAIR 3’UTR wt、HOTAIR 3’UTR mut与miR-206 mimic或miR-NC载体共转染至HT-29细胞中,设为HOTAIR 3’UTRwt/miR-NC组、HOTAIR3’UTRwt/miR-206组、HOTAIR3’UTRmut/miR-NC组,HOTAIR3’UTRmut/miR-206组,培养48 h后检测萤光素酶活性。将HOTAIR si RNA和miR-206 inhibitor共转染于HT-29细胞,设置si-HOTAIR+anti-NC组和si-HOTAIR+anti-miR-206组,用Transwell和划痕愈合实验分析细胞侵袭、迁移水平。结果空白组与si-con组HT-29细胞中HOTAIR m RNA的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);与si-con组比较,si-HOTAIR组HT-29细胞中HOTAIR m RNA的表达水平降低(P<0.01)。空白组与si-con组HT-29细胞侵袭数目、细胞划痕愈合率比较,差异无统计学意义(P>0.05);与si-con组比较,si-HOTAIR组HT-29细胞侵袭数目减少,细胞划痕愈合率降低(P<0.01)。与HOTAIR 3’UTR wt/miR-NC组比较,HOTAIR 3’UTR wt/miR-206组中HOTAIR wt的萤光素酶活性下降(P<0.01);而HOTAIR 3’UTR mut/miR-NC组与HOTAIR 3’UTR mut/miR-206组萤光素酶活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与si-HOTAIR+anti-NC组比较,si-HOTAIR+anti-miR-206组中miR-206的表达水平降低(P<0.01)。与si-HOTAIR+anti-NC组比较,si-HOTAIR+anti-miR-206组中HT-29细胞的侵袭和迁移率增加(P<0.01)。结论HOTAIR通过负调控miR-206促进HT-29细胞的侵袭和迁移能力。

长链非编码RNA HOX转录反义RNA对成骨分化及骨性疾病影响的研究进展

干细胞的成骨分化需要转录因子、信号通路和生物学信号的紧密协调。这种交互网络的失调会影响干细胞和成骨细胞的增殖和凋亡,从而破坏骨代谢和稳态。lncRNAs广泛参与干细胞的成骨分化过程,从而在骨关节炎、骨肿瘤等骨疾病的发生、发展和进展中发挥重要作用。长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)调节干细胞的成骨分化,并在骨形成和相关疾病的发展中起重要的中介作用。现就lncRNA HOTAIR在成骨分化及骨病中的具体作用和机制的相关研究作一综述,以期为未来骨与关节疾病的防治提供新的思路。

GA结合蛋白转录因子亚基β1的反义RNA对过氧化氢诱导的大鼠脑微血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨GA结合蛋白转录因子亚基β1的反义RNA(GABPB1-AS1)对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠脑微血管内皮细胞损伤的影响及可能机制。方法体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,分为对照(Con)组、模型(Model)组、A组(Model加用si-NC)、B组(Model加用si-GABPB1-AS1)、C组(Model加用si-GABPB1-AS1及anti-miR-NC)和D组(Model加用si-GABPB1-AS1及anti-miR-101-3p)。RT-qPCR检测细胞中GABPB1-AS1和miR-101-3p表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、活化的半胱天冬酶3(Cleaved-caspase 3)和活化的半胱天冬酶9(Cleaved-caspase 9)蛋白表达,试剂盒检测上清液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平及细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证GABPB1-AS1和miR-101-3p靶向调控关系。结果Con组、Model组、A组及B组GABPB1-AS1、miR-101-3p、细胞凋亡率、Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 3、Cleaved-caspase 9、MDA、SOD、IL-1β和TNF-α水平差异均有统计学意义(F=724.541、450.866、368.481、154.595、107.850、103.824、62.514、371.871、210.219、1726.871、488.217,P<0.05)。与Con组比较,Model组细胞中GABPB1-AS1表达升高,miR-101-3p表达降低,细胞凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3和Cleaved-caspase 9蛋白水平、MDA含量及IL-1β和TNF-α水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平和SOD活性降低(P<0.05)。与A组和Model组比较,B组GABPB1-AS1表达、细胞凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3和Cleaved-caspase 9蛋白水平、MDA含量及IL-1β和TNF-α水平降低,miR-101-3p表达、Bcl-2蛋白水平和SOD活性升高(P<0.05)。GABPB1-AS1靶向负调控miR-101-3p表达。与C组比较,D组细胞凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3和Cleaved-caspase 9蛋白水平、MDA含量及IL-1β和TNF-α水平升高(t=13.360、9.779、5.644、5.156、13.545、37.810、25.132,P<0.05),Bcl-2蛋白水平和SOD活性降低(t=9.311、12.752,P<0.05)。结论干扰GABPB1-AS1可能通过上调miR-101-3p表达抑制H2O2诱导的大鼠脑微血管内皮细胞凋亡、氧化应激反应及炎症因子表达。

PHO1反义转录本的功能研究

磷是植物生长发育必需的大量元素之一.而PHO1是磷从地下部往地上部运输的重要因子.与拟南芥不同,水稻PHO1存在天然顺式反义转录本.为了阐明PHO1反义转录本是否在植物响应磷胁迫中起调控作用,克隆了PHO1-2的反义转录本,分析了该反义转录本对缺磷的响应,并获得了该反义转录本增强表达的转基因苗.磷含量测定结果表明,转基因苗叶片中磷含量比野生型显著降低,但根中磷含量比野生型要高.这和PHO1功能缺失材料的表型一致.定量RT-PCR结果表明,在反义转录本增强表达的材料中PHO1的表达显著降低.结果表明,PHO1反义转录本可能通过调控PHO1的表达来调控体内磷的平衡.

小鼠大脑皮层层次特异表达基因天然反义转录物的筛选与鉴定

目的筛选并鉴定小鼠大脑皮层发育过程中皮层层次特异表达的基因是否存在天然反义转录物(NAT)。方法对63个小鼠大脑皮层层次特异表达的基因进行生物信息学预测,筛选出31个可能存在NAT的基因,从小鼠脑组织及神经系统来源的细胞系提取总RNA,采用RT-PCR方法对筛选阳性基因进行鉴定并克隆到pGEM-T载体中进行测序。结果 31个经生物信息学预测的基因中,8个为NAT阳性。结论小鼠大脑皮层发育过程中皮层层次特异表达的基因存在NAT,NAT可能通过调控编码基因影响小鼠皮层发育。

三氧化二砷对乳腺癌细胞长链非编码RNA HOX转录反义RNA的作用

目的:探讨长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)在乳腺癌组织和细胞中的表达情况及三氧化二砷(As2O3)对HOTAIR基因表达的影响。方法:实时定量PCR检测在乳腺癌癌旁组织与癌组织中长链非编码RNA HOTAIR mRNA的表达,筛选高表达HOTAIR的乳腺癌细胞株,检测As2O3对HOTAIR mRNA表达的作用。先观察比较乳腺癌与癌旁组织中HOTAIR的表达,再检测乳腺癌细胞株中HOTAIR的表达,以及As2O3作用后MCF-7细胞中HOTAIR的表达变化。结果:乳腺癌组织中HOTAIR mRNA表达量为0.011±0.005,癌旁组织未见表达;乳腺癌细胞株SKBR-3和MAD-MB-231细胞均未表达HOTAIR mRNA,MCF-7细胞株高表达HOTAIR mRNA(1±0.236);在As2O3作用下,MCF-7细胞中HOTAIR mRNA表达较空白组明显下降(P<0.01)。结论:HOTAIR与乳腺癌的发展可能相关,As2O3可以抑制其表达。

外周血长链非编码RNA-同源盒基因反义转录RNA与卵巢癌术后转归关系及意义

目的探讨外周血长链非编码RNA(Lnc RNA)-同源盒基因反义转录RNA(HOTAIR)与卵巢癌术后转归的关系及意义。方法选取自2014年5月至2016年5月武汉大学中南医院收治的138例卵巢癌患者为研究对象,根据复发情况将患者分为复发组(n=37)和未复发组(n=101)。比较两组患者术前、后的血清糖类抗原125(CA125)水平及Lnc RNA-HOTAIR表达情况;应用受试者工作特征曲线(ROC)分析CA125和Lnc RNA-HOTAIR对患者术后转归的预测价值。结果复发组的血清CA125水平、外周血Lnc RNA-HOTAIR表达均高于非复发组,组间比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。ROC曲线分析结果显示,术前、术后Lnc RNA-HOTAIR和CA125对卵巢癌术后复发均有较高的预测价值,术前Lnc RNA-HOTAIR和CA125的最佳工作点分别为2. 75和356. 7 U/ml,术后Lnc RNA-HOTAIR和CA125的最佳工作点分别为1. 62和46. 3 U/ml。结论外周血Lnc RNA-HOTAIR表达水平与卵巢癌术后转归密切相关,可作为血清CA125的辅助指标对术后复发做出预测。

天然反义转录物及其调控基因的表达机制

天然反义转录(NATs)是一组编码蛋白质或非编码蛋白质的RNAs,与其他(有义)转录物具有互补序列,可以调节有义链的表达。这种调节可以发生在转录水平或转录后水平,调节方式有转录干扰、RNA封闭、双链依赖机制或染色质重建(修饰)等。正义链和反义链分别加工成小RNAs调节基因表达,也是NATs调节基因表达的重要方式,如piRNAs的"乒乓机制"。实验或计算机研究已经证明了NATs在生物中广泛存在,是一种重要的基因表达调节方式。文章论述了NATs的重要作用和机理,重点论述了NATs的调节机制和相关的小RNAs。

非小细胞肺癌组织中HOX转录反义RNA的表达变化及意义

目的观察HOX转录反义RNA(HOTAIR)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达变化,并探讨其临床意义。方法收集125例NSCLC患者的肿瘤组织及其瘤旁正常肺组织,采用实时RT-PCR法检测HOTAIR的表达。检索高通量基因表达数据库(GEO)、Array Express数据库中NSCLC组织与HOTAIR表达相关的芯片数据。结果125例患者中,HOTAIR在NSCLC组织中的表达高于癌旁正常肺组织(P<0.05)。HOTAIR表达水平与NSCLC患者年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、TNM分期有关(P均<0.05)。从数据库检索出的基因芯片显示HOTAIR表达水平与肿瘤病理类型不相关(P>0.05)。结论 HOTAIR在NSCLC组织中呈现高表达,可能参与NSCLC的发生发展。

LRR受体蛋白基因HSL2存在自然反义转录本的初步分析

自然反义转录本(Natural Antisense Transcripts,NAT)是一类与编码蛋白的mRNA互补的转录本.基于生物信息学,Tilling arrays和高通量测序等方法发现在人类、小鼠和植物基因组中NAT存在广泛的表达.本实验发现在拟南芥基因组中富亮氨酸重复类受体蛋白激酶(LRR-RLK)和富亮氨酸重复类受体蛋白(LRRRLP)家族基因中分别有22和14个基因存在NAT的表达.通过半定量RT-PCR和荧光定量PCR(Real-time PCR)等技术验证了NAT的存在.通过快速扩增cDNA末端(3’RACE)方法进一步确认了NAT的存在并且获得了这些NAT的3’末端序列.过表达LRR-RLK家族调控拟南芥花瓣脱落HSL2基因位点的NAT能够降低HSL2和它的同源基因HAE的表达.

HOX转录反义RNA与EZH2分子在肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)通过影响表观遗传修饰在多种肿瘤的发生发展中起到重要作用,HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)是其中研究较为深入的一种,其在多种肿瘤中的作用已明确。很多lncRNA包括HOTAIR可与多梳蛋白抑制复合物2(polycomb repress complex2,PRC2)结合,组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶EZH2是PRC2中起催化作用的关键亚基,其介导的组蛋白H3甲基化作用与多种肿瘤的发生发展密切相关,同时HOTAIR与EZH2的相互作用关系已在多种肿瘤中被研究证实。本文对HOTAIR及EZH2在不同肿瘤中的作用及二者的相互关系进行综述,并探索二者在肿瘤中的研究应用前景。

HOX转录反义RNA表达对胸腔镜食管癌切除术后风险的预测价值研究

目的探讨HOX转录反义RNA表达对胸腔镜食管癌切除术后风险的预测价值。方法收集该院接受胸腔镜食管癌切除术患者92例,采用RT-PCR检测术后组织中HOX转录反义RNA表达情况,分析HOX转录反义RNA表达与食管癌术后复发、生存状况之间的关系。结果 RT-PCR显示,癌组织HOTAIR相对表达量为(0.673±0.076),而癌旁组织为(0.387±0.058),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。HOTAIR对术后复发诊断的曲线下面积为0.727(95%CI:0.684,0.884),对术后生存诊断的曲线下面积为0.769(95%CI:0.692,0.901)。术后3年内,HOTAIR相对表达量≤0.5组复发率低于HOTAIR相对表达量>0.5组(P<0.05)。Cox模型分析显示,分化程度、临床分期、肿瘤直径、淋巴结转移及HOTAIR为预后的危险因素,而术后辅助放、化疗为预后的保护因素。结论 HOTAIR为胸腔镜食管癌切除术后复发、生存状况的影响因素,通过对HOTAIR的检测可以为临床选择合理的治疗方案提供参考依据。

下调HOX转录反义RNA对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、周期及侵袭能力的影响

目的研究下调HOX转录反义RNA(HOTAIR)水平对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231增殖、周期及侵袭能力的影响。方法si-HOTAIR对MDA-MB-231细胞转染,实验分为对照组、si-阴性对照组、si-HOTAIR组,实时荧光定量法测定转染后MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平;分别用MTT法、流式细胞仪、Transwell小室实验测定转染后MDA-MB-231细胞活性、周期、侵袭能力;蛋白印迹法(WB)测定转染后MDA-MB-231细胞中c-myc、Ki-67、PCNA、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达水平。结果与MCF-10A细胞组相比,对照组MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平升高[(1.85±0.21)比(1.06±0.13),P<0.05]。与对照组、si-阴性对照组相比,si-HOTAIR组MDA-MB-231细胞中HOTAIR表达水平(1.34±0.15)、细胞活性(98.04±6.28)%、侵袭能力(35.66±8.04)降低(P<0.05),细胞G0/G1期下调,阻滞在G2/M期;与对照组、si-阴性对照组相比,si-HOTAIR组MDA-MB-231细胞中c-myc、Ki-67、PCNA、MMP-9、MMP-2表达水平降低(P<0.05)。结论HOTAIR在MDA-MB-231细胞中高表达,下调HOTAIR表达水平可抑制MDA-MB-231细胞增殖、阻滞细胞周期、降低肿瘤细胞侵袭能力。

阿托伐他汀调节巨噬细胞载脂蛋白A1天然反义转录表达的研究

目的:探讨阿托伐他汀调节人急性单核细胞白血病细胞1(THP1)诱导的巨噬细胞载脂蛋白A1(apoA1)天然反义转录(apoA1-NAT)表达的研究。方法:检索基因序列,设计引物,用不同浓度0、1、10、100 nmol/L阿托伐他汀干预THP1诱导的巨噬细胞,提取不同浓度和时间点(6、12、24、48 h)的RNA,检测apoA1-NAT、apoA1信使核糖核酸(mRNA)表达。同时检测与胆固醇代谢相关的三磷酸腺苷绑定的盒式转运体A1(ABCA1)、清道夫受体B1 (SRB1)及低密度脂蛋白受体(LDLR)mRNA的表达。结果:THP1诱导的巨噬细胞在10 nmol/L阿托伐他汀干预24 h,apoA1-NAT表达明显降低,同时apoA1 mRNA表达量显著升高(P<0.01),ABCA1、SRB1及LDLR mRNA表达量也出现不同程度的升高(P均<0.05)。结论:阿托伐他汀抑制巨噬细胞apoA1-NAT表达的同时,可升高apoA1、ABCA1、SRB1及LDLR mRNA表达,进而能促进巨噬细胞胆固醇的外流。

类风湿关节炎患者血清长链非编码RNA-Hox转录反义RNA表达变化及其意义

目的观察类风湿关节炎(RA)患者血清长链非编码RNA(LncRNA)-Hox转录反义RNA(HOTAIR)的表达变化,并探讨其临床意义。方法选择RA患者(RA组)132例,同期健康体检者50例(对照组)。取RA组入院第二天,对照组入院当天的空腹静脉血,采用实时RT-PCR法检测血清LncRNA-HOTAIR,ELISA法检测抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体,速率散射比浊法检测RF、CRP,魏氏法检测ESR。分析RA患者血清LncRNA-HOTAIR水平与患者临床参数(DAS28,炎性指标及年龄、性别、病程、疼痛关节数)的关系。ROC分析血清LncRNA-HOTAIR水平对RA的诊断价值。结果RA组血清LncRNA-HOTAIR、抗CCP抗体、RF、CRP、ESR水平高于对照组(P均<0.05)。RA组病情高度活动者血清LncRNA-HOTAIR水平高于中度及低度活动者(P均<0.05)。RA组血清LncRNA-HOTAIR水平与DAS28呈正相关(r=0.645,P=0.009)。血清LncRNA-HOTAIR诊断RA的ROC下面积为0.706,敏感度71%,特异度82%。结论RA患者血清LncRNA-HOTAIR水平升高,其水平变化与疾病活动程度有关,对RA的诊断准确度较高。