长链非编码RNA同源盒基因A11反义RNA在急性淋巴细胞白血病患儿骨髓中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源盒基因A11反义RNA(HOXA11-AS)在急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿骨髓中的表达及意义。方法选取108例初治ALL患儿及57例非肿瘤性疾病患儿,比较ALL患儿与非肿瘤性疾病患儿、不同ALL病理类型、治疗后不同疗效ALL患儿HOXA11-AS的相对表达量。实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测108例不同临床特征ALL患儿骨髓中HOXA11-AS的相对表达量。结果108例初治ALL患儿骨髓HOXA11-AS的相对表达量明显高于非肿瘤性疾病患儿(P﹤0.01),其中,B-ALL型初治ALL患儿骨髓HOXA11-AS的相对表达量明显低于T-ALL型患儿(P﹤0.01)。108例初治ALL患儿经2个周期的化疗后完全缓解46例,未完全缓解62例,完全缓解患儿HOXA11-AS的相对表达量明显低于未完全缓解和初治ALL患儿(P﹤0.01)。BCR/ABL融合基因阳性表达初治ALL患儿骨髓HOXA11-AS的相对表达量,明显高于BCR/ABL融合基因阴性表达患儿(P﹤0.05)。结论HOXA11-AS在ALL患儿中表达上调,并与ALL分型有关,其可能参与ALL的发生发展过程。

lncRNA HOXA11-AS和miR-98-5p在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源异形盒基因A11反义RNA(HOXA11-AS)和微小RNA-98-5p(miR-98-5p)在乳腺癌中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。方法 回顾性选取2014年1月至2016年10月青岛大学附属青岛市中心医院(青岛市肿瘤医院)接收的120例乳腺癌患者作为研究对象。收集乳腺癌患者的临床病理资料,如年龄、肿瘤大小、TNM分期、病理分级、病理类型、孕激素受体(PR)表达、人类表皮生长因子受体2(HER-2)表达、雌激素受体(ER)表达、Ki-67表达等。采用实时荧光定量PCR法检测所有组织HOXA11-AS、miR-98-5p表达水平。比较HOXA11-AS、miR-98-5p在乳腺癌组织及乳腺癌各分子分型上的表达水平。采用Spearman法分析癌组织中HOXA11-AS与miR-98-5p的相关性。分析HOXA11-AS、miR-98-5p表达水平与乳腺癌临床病理特征关系。结果 癌组织中HOXA11-AS的水平为2.21±0.53,较癌旁组织(1.02±0.21)显著升高,而miR-98-5p水平为0.58±0.12,较癌旁组织(1.03±0.19)显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。HER-2阳性、Luminal A型、Luminal B型、Basal-like型的癌组织中HOXA11-AS表达水平较癌旁组织显著升高,miR-98-5p表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。以表达水平将乳腺癌患者分别分为HOXA11-AS高表达组(n=67)和HOXA11-AS低表达组(n=53),miR-98-5p低表达组(n=63)和miR-98-5p高表达组(n=57)。HOXA11-AS、miR-98-5p均与乳腺癌TNM分期、HER-2表达、Ki-67表达、ER表达、PR表达相关(P<0.05)。乳腺癌组织中HOXA11-AS与miR-98-5p表达水平呈负相关(r=-0.571,P<0.05)。Kaplan-Meier分析表明,HOXA11-AS低表达组的平均生存时间为(53.61±1.58)个月,高于HOXA11-AS高表达组[(42.11±2.14)个月],差异有统计学意义(P<0.05);miR-98-5p高表达组的平均生存时间为(52.65±1.62)个月,高于miR-98-5p低表达组[(42.25±2.23)个月],差异有统计学意义(P<0.05)。TNM分期、病理分级、病理类型、PR表达、HER-2表达、ER表达、Ki-67、HOXA11-AS、miR-98-5p是乳腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 乳腺癌组织HOXA11-AS呈高表达、miR-98-5p呈低表达,HOXA11-AS、miR-98-5p与患者生存期密切相关,是影响乳腺癌预后的独立因素,可能成为新的乳腺癌治疗靶点。

长链非编码RNA同源盒基因A11反义RNA对肝癌细胞增殖和肝癌相关基因表达的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)同源盒基因A11反义RNA(HOXA11-AS)对肝细胞癌(HCC)细胞增殖及HCC相关基因表达的影响。方法15例人HCC组织及癌旁组织由西安交通大学第二附属医院生物诊疗中心样本库于2017年6月至2019年11月收集。采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测HOXA11-AS的表达并用RNA荧光原位杂交进行亚细胞定位;通过转染lncRNA Smart Silencer敲低Bel-7402和Hep3细胞中HOXA11-AS的表达,并采用细胞计数试剂(CCK-8)、平板克隆形成实验、流式细胞术检测细胞的增殖、周期及凋亡情况;利用qPCR芯片检测敲低HOXA11-AS对HCC相关基因表达的影响,使用R语言clusterProfiler包对差异基因进行功能富集分析,并通过rescue实验验证差异基因介导HOXA11-AS调控HCC细胞增殖的作用。分别采用t检验和Turkey检验分析两组或多组间差异。结果HOXA11-AS在HCC组织中的表达明显高于癌旁组织(9.72±5.99比5.53±4.92,t=2.09,P<0.05),在3种HCC细胞系(Bel-7402、HepG2和Hep3B)中的表达显著高于与正常肝细胞系L-O2(1.81±0.33、1.49±0.17、3.53±0.30比1.00±0.02,t=4.20、4.94、14.34,P均<0.05)。RNA荧光原位杂交显示HOXA11-AS在HCC细胞的胞核和胞质均有分布。HOXA11-AS功能缺失实验提示敲低组细胞增殖活性明显低于对照组(Bel-7402:0.95±0.03比1.27±0.07,t=8.60,P<0.01;Hep3B:0.59±0.04比0.74±0.03,t=6.00,P<0.01);敲低组细胞克隆形成数量显著低于对照组(Bel-7402:228.33±25.18比572.33±26.08,t=19.74,P<0.01;Hep3B:112.33±11.50比214.33±14.64,t=9.49,P<0.01);敲低组S期细胞比例显著高于对照组[Bel-7402:(33.13±2.37)%比(18.92±0.49)%,t=10.15,P<0.01;Hep3B:(27.66±0.85)%比(21.88±0.81)%,t=8.48,P<0.01];敲低组凋亡细胞比例显著高于对照组[Bel-7402:(18.50±0.95)%比(15.43±1.24)%,t=3.41,P<0.05;Hep3B:(8.65±0.88)%比(3.28±0.34)%,t=9.82,P<0.01]。qPCR芯片检测显示敲低HOXA11-AS可显著改变46个HCC相关基因的表达,这些基因显著富集于细胞增殖、周期和凋亡等相关生物学过程以及肿瘤坏死因子(TNF)、酪氨酸激酶(JAK)/信号转导与转录激活因子(STAT)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和Ras等肿瘤相关通路。过表达KIT、SPARC、HDAC10可逆转HOXA11-AS敲低对HCC细胞增殖的抑制作用。结论HOXA11-AS在HCC细胞中高表达,可通过影响细胞周期、凋亡以及HCC相关基因的表达促进HCC细胞增殖。

长链非编码RNA HOXA11-AS在乙肝继发小肝癌中的表达意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源异形盒基因A11反义RNA(HOXA11-AS)在乙肝继发小肝癌中的表达意义。方法选择乙肝肝硬化患者268例,其中200例为单纯乙肝肝硬化患者(肝硬化组),68例为乙肝继发小肝癌患者(小肝癌组),检测2组血细胞中lncRNA HOXA11-AS表达水平,并对其与患者的临床病理特征进行相关性分析。结果2组的性别、年龄、体重指数、AFP、ALT、AST值对比差异无统计学意义(P>0.05)。小肝癌组的lncRNA HOXA11-AS相对表达水平高于肝硬化组(P<0.05)。在小肝癌组中,lncRNA HOXA11-AS相对表达水平与肿瘤最大直径、临床分期、远端转移、肿瘤包膜、组织学分化存在相关性(P<0.05)。单因素和Cox多因素分析显示临床分期、远端转移、组织学分化、肿瘤包膜为影响lncRNA HOXA11-AS相对表达水平的主要因素(P<0.05)。结论lncRNA HOXA11-AS在乙肝继发小肝癌患者中呈现高表达情况。临床分期、远端转移、组织学分化、肿瘤包膜与lncRNA HOXA11-AS表达存在相关性,也是影响lncRNA HOXA11-AS的主要因素。

同源盒基因A11反义RNA在脑胶质瘤中的表达及生物学功能

目的探讨长链非编码RNA同源盒基因A11反义RNA(HOXA11-AS)在脑胶质瘤中的表达及生物学功能。方法首先分析HOXA11-AS在癌症基因组图谱(TCGA)计划数据库(689例)的低级别脑胶质瘤、胶质母细胞瘤以及GTEx数据库(255例)的正常脑组织样本中的表达情况。基于TCGA数据库,进一步分析HOXA11-AS在世界卫生组织(WHO)Ⅱ~Ⅳ级的脑胶质瘤样本中的表达情况。根据HOXA11-AS表达量的中位数分为高表达组和低表达组,并绘制Kaplan-Meier生存曲线,采用log-rank检验比较HOXA11-AS低表达组与高表达组脑胶质瘤患者的生存差异。进一步的体外实验以人星形胶质细胞为对照组,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验验证HOXA11-AS在脑胶质瘤U251、U87及LN229细胞株中的表达。U87和LN229细胞株中分别使用携带HOXA11-AS cDNA序列的过表达慢病毒载体构建过表达HOXA11-AS的细胞株,使用空载慢病毒载体构建对照细胞株。U87和LN229细胞株中分别使用siRNA转染敲低HOXA11-AS的表达。进一步通过EdU增殖实验、细胞划痕实验和Transwell实验研究HOXA11-AS对胶质瘤细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响。结果HOXA11-AS在正常脑组织、低级别脑胶质瘤及胶质母细胞瘤中表达量的差异具有统计学意义(P<0.001)。TCGA数据库中,WHOⅢ、Ⅳ级脑胶质瘤的HOXA11-AS表达量均高于Ⅱ级脑胶质瘤(P<0.001)。全级别脑胶质瘤患者中,HOXA11-AS高表达组(n=344)的总生存期短于低表达组(n=345,P<0.001)。进一步的体外实验中,qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,U87组、LN229组及U251组HOXA11-AS的表达均升高(均P<0.001)。U87和LN229过表达组HOXA11-AS的表达均较其对照组上调(均P<0.001)。U87敲低组、LN229敲低组的HOXA11-AS表达均较其对照组下调(均P<0.001)。EdU增殖实验结果显示,U87和LN229过表达组的EdU阳性率分别高于U87和LN229对照组(均P<0.05);相反,U87敲低组较U87无义序列组、LN229敲低组较LN229无义序列组的EdU阳性率均下降(均P<0.001)。细胞划痕实验结果显示,U87和LN229过表达组的细胞迁移率分别高于U87和LN229对照组(均P<0.05);相反,U87敲低组较U87无义序列组、LN229敲低组较LN229无义序列组的细胞迁移率均下降(均P<0.001)。Transwell实验结果显示,U87和LN229过表达组的穿胶细胞数分别多于U87对照组和LN229对照组(均P<0.05);相反,U87敲低组较U87无义序列组、LN229敲低组较LN229无义序列组的穿胶细胞数均低(均P<0.05)。结论HOXA11-AS在脑胶质瘤中呈高表达,并可促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。

LncRNA ZEB2-AS1调控miR-574-3p/ZEB1轴对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)锌指E盒结合同源盒蛋白2反义RNA(LncRNA ZEB2-AS)1对卵巢癌细胞迁移、侵袭的影响及可能的作用机制。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3、SW626、A2780)和正常人卵巢上皮细胞(HOSEpiC),实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p和锌指E盒结合蛋白(ZEB)1的水平。取对数生长期的SW626细胞,分为对照组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-ZEB2-AS1组、si-NC组、si-ZEB2-AS1组、si-ZEB2-AS1+inhibitor-NC组、si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组。qRT-PCR检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western印迹检测细胞ZEB1和迁移、侵袭相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测验证ZEB1与miR-574-3p的靶向关系。结果与正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC相比,人卵巢癌SKOV3、SW626、A2780细胞中ZEB2-AS1、ZEB1水平明显升高,miR-574-3p水平明显降低(P<0.05),且SW626细胞中ZEB2-AS1表达水平最高。转染后,与对照组相比,pcDNA3.1-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(VIM)、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05);si-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显降低,E-cadherin表达明显增加(P<0.05)。与si-ZEB2-AS1组相比,si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05)。双荧光素酶结果显示,高表达miR-574-3p可明显抑制ZEB1 WT的荧光素酶活性(P<0.05)。结论在卵巢癌中,LncRNA ZEB2-AS1过表达可能通过下调miR-574-3p,上调ZEB1的表达,进而诱导上皮-间质转化(EMT),促进卵巢癌细胞的迁移与侵袭。

半枝莲种素调控LncRNA HOXA11-AS对肺鳞癌细胞增殖、凋亡及迁移的作用研究

目的探究半枝莲种素调控肺鳞癌发生和转移的分子机制。方法用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同细胞系中目标基因的相对表达水平。动物实验:将动物随机分成2组,半枝莲种素动物组每天灌胃给予50 mg·kg^(-1)半枝莲种素溶液,模型组每天灌胃给予等体积的0.9%NaCl,测量肿瘤体积。细胞实验:将细胞分为对照组(不做处理)、半枝莲种素组(3.0 g·L^(-1)半枝莲种素)、半枝莲种素+oe-HOXA11-AS组(3.0 g·L^(-1)半枝莲提取物处理并转染HOXA11-AS)、半枝莲种素+oe-HOXA11-AS+XAV939组(3.0 g·L^(-1)半枝莲提取物处理,转染HOXA11-AS并加入10μmol·L^(-1)XAV939)。用5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(Edu)和末端转移酶介导的dUTP末端标记法(TUNEL)实验分别检测细胞的增殖率和凋亡率,用Transwell实验检测各组人肺鳞癌细胞NCI-H520的迁移。结果各肺癌细胞系中HOXA11-AS相对表达水平相比正常肺上皮细胞均显著增多(均P<0.05)。35 d时模型组和半枝莲种素动物组肿瘤体积分别为(937.83±67.40)和(512.32±45.61)mm^(3),2组比较,在统计学上差异有统计学意义(P<0.001)。对照组、半枝莲种素组、半枝莲种素+oe-HOXA11-AS组和半枝莲种素+oe-HOXA11-AS+XAV939组细胞迁移数目分别为(127.26±8.92)、(23.76±3.31)、(131.28±9.49)和(27.69±3.57)个,增殖率分别为(56.27±7.49)%、(28.68±4.33)%、(50.12±7.86)%和(13.62±3.54)%,凋亡率分别为(10.86±2.97)%、(43.23±6.78)%、(30.92±4.53)%和(41.77±7.02)%,半枝莲种素组的上述指标与对照组比较,半枝莲种素+oe-HOXA11-AS组的上述指标与半枝莲种素组比较,枝莲种素+oe-HOXA11-AS+XAV939组的上述指标与半枝莲种素+oe-HOXA11-AS组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论半枝莲种素通过HOXA11-AS抑制Wnt/β-catenin信号通路调控肺鳞癌的发生和转移。

lncRNA HOTAIR调节miR-20a-5p/TGF-β1轴改善新生癫痫大鼠认知能力

为探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)同源异型盒基因转录反义基因间RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)对miR-20a-5p/TGF-β1信号轴的调控作用及对新生癫痫大鼠认知能力的影响,采集20例癫痫患者及20例健康对照者肘静脉血,分离血清,qRT-PCR法检测lncRNA HOTAIR的表达;予新生大鼠腹腔注射海人酸构建癫痫模型,并随机分为正常对照组、模型组、lncRNA HOTAIR过表达(Lv-HOTAIR)组、阴性对照(Lv-NC)组、TGF-β1抑制剂组和Lv-HOTAIR+TGF-β1抑制剂组,每组20只。Racine分级标准评估大鼠的癫痫发作程度;水迷宫试验评估大鼠的认知功能;Timm染色观察大鼠海马组织苔藓纤维的发芽情况;免疫组化法检测M2型小胶质细胞特异性标志蛋白精氨酸酶1(Arginase 1,Arg-1)的阳性表达情况;TUNEL法评估大鼠海马神经元的凋亡情况;qRT-PCR法检测海马组织lncRNA HOTAIR、miR-20a-5p的表达;Western blotting检测海马组织TGF-β1、M1型小胶质细胞极化标志蛋白CD11、M2型小胶质细胞极化标志蛋白CD206、IL-6和IL-1β的表达;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA HOTAIR对miR-20a-5p的靶向调控作用以及miR-20a-5p对TGF-β1的靶向调控作用。建立癫痫体外细胞模型,同时上调lncRNA HOTAIR及miR-20a-5p表达,验证miR-20a-5p对lncRNA HOTAIR抗癫痫作用的逆转。结果显示,lncRNA HOTAIR在癫痫患者血清中的表达显著低于健康对照者(P<0.05);lncRNA HOTAIR可靶向负调控miR-20a-5p表达,miR-20a-5p可靶向负调控TGF-β1表达。与正常对照组相比,模型组大鼠癫痫发作等级评分升高,认知功能降低,苔藓纤维发芽及神经元凋亡严重,miR-20a-5p表达升高,lncRNA HOTAIR及TGF-β1表达降低,小胶质细胞M2型抑炎表型活性降低(均P<0.05)。上调lncRNA HOTAIR表达可降低癫痫大鼠疾病发作等级,提高认知功能,改善苔藓纤维发芽及减少神经元凋亡,抑制miR-20a-5p表达并增加TGF-β1介导的小胶质细胞M2型抑炎表型活化,发挥抗癫痫作用(均P<0.05)。TGF-β1抑制剂干预或上调miR-20a-5p表达均可削弱lncRNA HOTAIR发挥的促神经元存活及抗癫痫作用(均P<0.05)。由此,lncRNA HOTAIR可能通过下调miR-20a-5p表达,靶向上调TGF-β1表达增加小胶质细胞M2型抑炎表型活化,发挥抗癫痫作用。