BJAB细胞在转导6A8 α-甘露糖苷酶的反义DNA后发生oncosis样死亡

目的 采用形态学和分子生物学方法 ,分析转导 6A8α 甘露糖苷酶的反义DNA导致的B细胞株BJAB死亡的性质。方法 用Giemsa染色、annexin Ⅴ荧光染色、梯形DNA电泳以及透射电子显微镜等方法 ,分析细胞死亡的性质 ;应用ConA结合试验 ,检测转基因细胞 6A8α 甘露糖苷酶活性的改变 ;应用Fluo 3探针测定细胞胞浆 [Ca2 +]i。结果 用重组腺相关病毒 (rAAV)颗粒成功地将反义 6A8DNA转导入了EB病毒转化的B细胞株BJAB。在克隆中 ,转导反义 6A8DNA的BJAB细胞在生长到 3～ 1 0个细胞时死亡 ,而野生型、转导空载或转导正义 6A8DNA的BJAB细胞生长良好。转导反义 6A8DNA的BJAB细胞呈聚集状生长 ,且有大量细胞肿胀 ,最终死亡。Giemsa染色光镜观察、an nexin Ⅴ荧光染色、梯形DNA电泳及透射电镜观察结果表明 ,这种死亡是一种oncosis(肿胀死 )样死亡。ConA结合试验表明 ,BJAB细胞在转导反义 6A8DNA后的结合率升高 ,而转导正义 6A8DNA后的结合率则下降。另外 ,转导反义 6A8DNA的细胞胞浆 [Ca2 +]i升高。结论 转导反义 6A8DNA引起BJAB细胞发生oncosis样死亡 ,这种死亡可能与 6A8α 甘露糖苷酶表达被抑制有关。