稳定表达反义ATM/PI3K细胞系U937-ASPI3K的建立

为进一步研究DNA损伤杀灭肿瘤细胞的机制 ,为增强肿瘤治疗疗效提供一种有价值的细胞模型 ,构建了高效表达ATM基因编码羧基端 10 0kD功能片段的反义cDNA ,通过转染和筛选建立稳定表达反义ATM PI3KcDNA的细胞系U937 ASPI3K。结果显示 ,构建的ATM PI3KcDNA经测序证明反向定位于表达载体 pZeoSV2 (+ )中。经转染和筛选得到稳定表达 pZeoSV(+ ) ATM PI3K的细胞系U937 ASPI3K和对照细胞系U937 pZeoSV (- ) ,前者ATM蛋白表达极度受抑制 ,后者以及淋巴瘤细胞系U937ATM蛋白的高表达未受影响。本实验为阐明细胞周期关卡 (checkpoint)在DNA损伤信号传导通路中的作用机制 。

反义ATM在体外对喉鳞状细胞癌ATM蛋白表达影响的研究

目的:用ATM反义多核苷酸作用于喉鳞状细胞癌以研究其对ATM蛋白表达的影响,进而推测其对放射治疗的敏感性。方法:用Western blot对AS、Sen、Misl、ipo与hep-2组的ATM蛋白进行分析。结果:AS、Sen、Misl、ipo与hep-2组(对照组)的ATM蛋白相对表达量以AS-lipo组最低,为48.14±5.53%,AS组与Sen、Misl、ipo、hep-2组比较有显著性差异。结论:ATM反义多核苷酸降低了喉鳞状细胞癌细胞中ATM蛋白的表达,其可能使喉鳞状细胞癌细胞对放射治疗的敏感性增强。

反义ATM多核苷酸对喉鳞状细胞癌ATM mRNA、蛋白影响的体外研究

目的:设计反义ATM多核苷酸作用于喉鳞状细胞癌以探讨其对ATM mRNA、蛋白表达的影响。方法:用Westernblot和real-time quantitative PCR对AS-ODNs、Sen-ODNs、Mis-ODNs、lipo与hep-2组的ATM蛋白和ATM mRNA进行分析。结果:AS-ODNs、Sen-ODNs、Mis-ODNs、lipo与hep-2组(对照组)的ATM蛋白及ATM mRNA相对表达量以AS-lipo组最低,分别为(48.14±5.53)%和(11.03±2.51)%,AS组与Sen、Mis、lipo、hep-2组比较有差异(P<0.05)。结论:反义ATM多核苷酸降低了喉鳞状细胞癌细胞中ATM mRNA、蛋白的表达,其可能使喉鳞状细胞癌细胞对放射治疗的敏感性增强。

反义ATM核苷酸转染对放射线照射后喉鳞癌细胞凋亡影响的体外研究

目的设计共济失调毛细血管扩张症突变基因(ATM)反义多核苷酸作用于喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)细胞以减少ATM表达,进而分析在体外其对放射线照射后喉鳞癌细胞凋亡的影响。方法实验分为反义ATM核苷酸(AS-Lipo)、正义ATM核苷酸(Sen-Lipo)、错配ATM核苷酸(Mis-Lipo)、Lipo与Hep-2组。用实时荧光定量PCR对各组Hep-2细胞的ATM mRNA进行分析。转染后18h,各组细胞分别接受0、2、4、6、8Gy照射,24h后计算细胞存活分数(SF)检测Hep-2细胞放射线照射后的生存能力。选择4Gy的照射剂量,用流式细胞仪分析各组Hep-2细胞的凋亡情况。结果 AS-Lipo、Sen-Lipo、Mis-Lipo、Lipo与Hep-2组的ATM mRNA相对表达量以AS-Lipo组最低,为(11.03±2.51)%(P<0.05)。在同等剂量的放射线照射下,AS-Lipo组的SF最低,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测发现,AS-Lipo组的凋亡率为(30.7±1.31)%,高于其他各组(P<0.05)。结论在体外,ATM反义多核苷酸降低了喉鳞癌细胞中ATM mRNA的表达,同时增加了放射线照射后喉鳞癌细胞的凋亡。

下调ATM表达对喉鳞状细胞癌放射敏感性影响的体内研究

目的设计反义ATM(共济失调毛细血管扩张症突变基因)多核苷酸作用于裸鼠移植瘤以探讨其对喉鳞状细胞癌(Hep-2)放射治疗敏感性的影响。方法①雌性BALB/c-nu/nu裸鼠,分成对照组、ATM AS-ODNs(ATM反义多核苷酸)组、单独放疗组、ATM AS-ODNs+放疗4组(联合治疗组),每组8只,于裸鼠背侧部皮下注射105个Hep-2细胞悬液并对各组进行相应处理;②3周后用Western blot对各组瘤体的ATM蛋白进行分析;③用TUNEL染色法检测各组瘤体中细胞凋亡情况。结果①与ATM AS-ODNs组比较,AS-ODNs+放疗组的ATM蛋白表达量降低[(76.84±3.12)%vs(48.19±3.98)%,P<0.05]。②ATM AS-ODNs+放疗组的细胞凋亡数显著高于单独放疗组、AS-ODNs组及对照组[(17.12±4.2)%vs(8.17±3.5)%,(4.13±2.3)%,(3.09±5.3)%],差异有统计学意义。③采用AS-ODNs+放疗组的肿瘤生长较ATM AS-ODNs组、放疗组及对照组慢。结论反义ATM多核苷酸在体内增强了喉鳞状细胞癌对放射治疗的敏感性。

下调ATM表达对裸鼠喉鳞状细胞癌移植瘤放射敏感性影响的研究

目的探讨反义ATM多核苷酸(AS-Lipo)作用于裸鼠移植瘤对喉鳞状细胞癌(Hep-2)放射治疗敏感性的影响。方法用克隆生存率来检测喉鳞状细胞癌放射治疗后的生存能力;用流式细胞仪来分析喉癌细胞的凋亡情况;用Tunel染色法检测各组瘤体中细胞凋亡情况。结果在同等剂量的放射治疗下,AS-Lipo组的生存分数最低。接受4 Gy放射治疗后,行流式细胞仪检测,结果发现AS-Lipo组的凋亡率为(30.7±1.31)%,远高于转染Sen-Lipo、Mis-Lipo、Lipo组。ATM AS-Lipo+放疗组的细胞凋亡数显著高于单独放射治疗组;ATM AS-Lipo+放射治疗组裸鼠瘤体内的凋亡指数为(17.12±4.2)%,与其他组比较差异有统计学意义。结论反义ATM多核苷酸增强了裸鼠喉鳞状细胞癌对放射治疗的敏感性。