反义c-myc寡核苷酸抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖

目的 观察反义 c- myc寡核苷酸对大鼠气道平滑肌增殖的抑制作用 .方法 大鼠气道平滑肌细胞原代培养 ,4～12代用于实验 .利用 L ipofectin将正义、反义及错配 c- myc寡核苷酸导入大鼠气道平滑肌细胞 ,MTT法检测不同寡核苷酸对大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,RT- PCR检测 c- mycm RNA的表达 ,免疫组织化学染色检测 c- Myc蛋白的表达 .结果 反义 c- myc寡核苷酸可抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖 ,且这种抑制作用呈浓度依赖性 ;反义 c- myc寡核苷酸可降低 c- myc m RNA的表达 ,同时降低了 c- myc m RNA的翻译 .结论 反义 c-

反义c-myc寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞生长的抑制作用

目的 探讨反义c myc寡核苷酸 (ASODN)对半乳糖诱导的兔晶体上皮细胞 (LEC)生长的影响。方法 人工合成与c myc基因第二外显子翻译起始区序列互补的寡核苷酸 ,用半乳糖和反义寡核苷酸处理培养的晶体上皮细胞 ,应用细胞计数法和MTT法观察反义c myc寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞增殖的影响。结果 2 5～ 10 0 μmol/L反义c myc寡核苷酸能抑制半乳糖诱导的晶体上皮细胞的增殖 ,10 0 μmol/L时作用较显著。 结论 反义c myc寡核苷酸对半乳糖诱导的白内障晶体上皮细胞的生长增殖有抑制作用。

反义c-myc寡核苷酸对转染FHIT基因胃癌细胞MKN28的影响

目的:探讨脂质体介导的c-myc反义寡核苷酸对导入脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的胃癌细胞增殖及凋亡的影响.方法:通过脂质体将重组FHIT基因PRC/ CMV质粒和空载体转染到人类胃癌细胞系MKN28,并分别转染c-myc反义寡核苷酸,RT- PCR和Westen blot法检测FHIT基因的转染,Western blot法检测细胞c-myc的表达,MTT法分析细胞增殖,AO/EB染色法和流式细胞分析技术检测细胞凋亡.结果:转染FHIT基因后,MKN28细胞检测到FHIT基因片段和FHIT蛋白,而未转染的细胞及转染空载体的细胞未检测到FHIT基因片段及FHIT蛋白.转染c-myc反义寡核苷酸后.对MKN28细胞c-myc的表达有明显的抑制作用,并呈明显的时间依赖性;c-myc asODN对FHIT^+ MKN28细胞抑制率(F=177.480,P<0.05),凋亡率(F=41.500,P<0.05)和凋亡比例明显高于FHIT MKN28细胞。结论:癌基因c-myc的表达抑制联合FHIT基因的表达可以发挥较强的抗肿瘤细胞作用,为多基因治疗肿瘤提供了理论基础.

反义C-myc寡核苷酸抑制血管吻合口狭窄的实验研究

为了探讨局部应用反义C myc寡核苷酸对血管吻合口狭窄的抑制作用 ,将 30只新西兰大白兔颈外静脉间置于同侧颈总动脉后随机分成对照组、胶组、正义组、反义组及错配组 ,以医用生物蛋白胶分别溶解反义、正义及错配的C myc基因片段 (330 μg)直接涂于血管吻合口外周。术后 2 8天取材制片 ,进行形态观察 ,并用计算机图像分析系统测量和计算内膜、中膜厚度及二者之比值 ,内膜、中膜面积及二者之比值。结果发现 ,反义组增生内膜厚度较对照组降低 39%、内膜面积降低 5 1% ,对照组、胶组、正义组及错配组间内膜厚度及内膜面积均无明显差异 (P >0 0 5 ) ;各组间中膜厚度及中膜面积均无明显差异 (P >0 0 5 )。提示医用生物蛋白胶携载反义C myc寡核苷酸局部用于血管吻合口外膜能显著抑制其内膜增生 。

反义c-myc寡核苷酸对骨肉瘤细胞MG-63增殖的影响及机制

目的探讨反义c-myc寡核苷酸对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及机制。方法采用反义核酸技术设计反义c-myc寡核苷酸片段,转染入人骨肉瘤MG-63细胞,MTT法及流式细胞仪法检测瘤细胞体外增殖、细胞周期及c-myc基因蛋白表达情况。结果MTT法示人骨肉瘤MG-63细胞的增殖受抑,10.0μmol/L、作用48 h效果最明显;流式细胞仪示反义c-myc寡核苷酸主要阻止人骨肉瘤MG-63细胞进入S期,c-myc基因蛋白表达受抑。结论反义c-myc寡核苷酸可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖;其机制为在基因水平干扰c-myc基因蛋白的表达。推测用反义策略抑制癌基因表达,或用基因敲除、基因替换的方法去除癌基因,可达到基因治疗的目的。

反义c-myc寡核苷酸诱导骨肉瘤细胞MG-63凋亡的实验研究

目的:研究反义c-myc寡核苷酸诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用。方法:设计反义c-myc寡核苷酸片段,转染入人骨肉瘤MG-63细胞,通过MTT法、流式细胞仪、HE染色及透射电镜方法,观察和分析其对人骨肉瘤MG-63细胞作用的效果。结果:MTT法示反义c-myc寡核苷酸可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,10.0μmol/L、作用48h效果最明显;流式细胞仪检测证实反义c-myc寡核苷酸(终浓度10.0μmol/L)诱导瘤细胞的凋亡率达37.92%,出现明显的凋亡峰,并可抑制c-myc基因蛋白的表达;细胞呈典型凋亡特征。结论:反义c-myc寡核苷酸能有效诱导人骨肉瘤MG-63细胞的凋亡。

反义c-myc寡核苷酸对hTERT蛋白表达抑制作用的研究

目的探讨脂质体LipfectAMINETM(LR)介导的反义c-myc寡核苷酸(ASODN)对乳腺癌MCF-7细胞hTERT蛋白表达的抑制作用。方法应用免疫细胞化学ABC法检测转染反义、正义及未转染细胞中hTERT蛋白的表达情况。结果免疫细胞化学显示转染反义、正义与未转染细胞的hTERT蛋白表达分别为23%、96%、99%(P<0.01),表明转染反义c-myc的MCF-7细胞hTERT蛋白表达明显降低。结论反义c-myc寡核苷酸可以抑制hTERT蛋白的表达。

反义c-myc寡核苷酸抑制大鼠胸腺淋巴细胞增殖

目的 :观察反义c-myc寡核苷酸对大鼠胸腺淋巴细胞增殖的抑制作用。方法 :Ficoll密度梯度离心法分离大鼠胸腺淋巴细胞。利用Iipofectin将正义、反义及错配c -myc寡核苷酸导入大鼠胸腺淋巴细胞 ,[3 H]-TdR掺入法及MTS法检测淋巴细胞增殖 ,RT -PCR检测c-mycmRNA的表达。结果 :反义c-myc寡核苷酸可抑制大鼠胸腺淋巴细胞的增殖 [(0 14± 0 0 3)Avs (0 32± 0 16 )A ,P <0 0 5 ],但此抑制作用无浓度依赖性 ,反义c -myc寡核苷酸可降低胸腺淋巴细胞c-mycmRNA的表达。结论 :反义c -myc寡核苷酸可抑制大鼠胸腺淋巴细胞的增殖。

反义c-myc寡核苷酸对大鼠气道平滑肌细胞周期的阻滞作用

目的 :观察反义c myc寡核苷酸对大鼠气道平滑肌细胞周期的影响 .方法 :大鼠气道平滑肌细胞原代培养后 ,以Lipofectin将反义、正义和错配c myc寡核苷酸导入平滑肌细胞 ,流式细胞技术检测细胞周期 ,免疫组织化学方法检测cy clinD1和cyclinE的表达 .结果 :反义c myc寡核苷酸可明显抑制大鼠气道平滑肌细胞通过S期 ,正义及错配c myc寡核苷酸对细胞周期无明显影响 ;反义c myc寡核苷酸抑制了大鼠气道平滑肌细胞cyclinD1和cyclinE的表达 .结论 :反义c myc寡核苷酸可抑制大鼠气道平滑肌细胞通过S期 ,抑制cy

超声联合反义c-myc寡核苷酸对移植静脉内膜增生的影响

目的观察超声辐照联合局部应用反义c-myc寡核苷酸对移植静脉内膜增生的影响,以期寻找防治内膜增生的新方法。方法将24只兔随机分为4组,对照组、超声辐照组、反义核苷酸组、超声辐照加反义核苷酸组,每组6只,建立兔自体颈内静脉移植替代颈总动脉模型。超声辐照组术后当天至第7天使用超声(2.190 W/cm2,0.8 MHz)辐照移植血管段,反义核苷酸组局部转染反义c-myc寡核苷酸。观察移植静脉的组织形态学改变;增殖细胞核抗原(PCNA);反转录PCR(RT-PCR)检测移植血管段c-myc基因的表达。结果术后第4周超声辐照组、反义核苷酸组、超声辐照加反义核苷酸组内膜厚度、PCNA阳性细胞数、c-myc基因表达均明显低于对照组(P<0.01)。结论超声辐照和局部转染反义c-myc可以降低平滑肌细胞的增殖和减轻内膜增生,可作为静脉移植后再狭窄的防治方法。

反义c-myc寡核苷酸对AVP诱导鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：探讨ＡＶＰ对鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响和反义ｃ－ｍｙｃ寡核苷酸对ＡＶＰ作用的干预效应。方法：以培养的ＳＤ大鼠ＶＳＭＣ为模型，采用培养细胞计数、蛋白质定量和细胞周期分析方法及ｍ ＲＮＡ打点杂交技术，动态观察ＡＶＰ对ＶＳＭＣ增殖的影响和反义ｃ－ｍｙｃ寡核苷酸的干预效果。结果：（１）ＡＶＰ促ＶＳＭＣ数目增加，在４８ｈ 时与对照组比较，有统计学意义（Ｐ＜ ０．０５）；（２）ＡＶＰ促ＶＳＭＣ的Ｓ期百分率增加，与对照组比较有非常显著性差异（Ｐ＜ ０．０１）；（３） ＡＶＰ促单个ＶＳＭＣ的蛋白质含量增加，在４８ｈ 时与对照组比较，差异非常显著（Ｐ＜ ０．０１）；（４）ＡＶＰ使ＶＳＭＣ 的ｃ－ｍｙｃ 的ｍ ＲＮＡ杂交信号比对照组明显地增强；反义ｃ－ｍｙｃ 寡核苷酸与对照组比较，ＶＳＭＣ的ｃ－ｍｙｃ的ｍ ＲＮＡ杂交信号明显地减弱；（５）反义ｃ－ｍｙｃ寡核苷酸与ＡＶＰ共同作用组的ＶＳＭＣ数目和细胞Ｓ期百分率均小于ＡＶＰ组和对照组，并均有非常显著性差异（Ｐ＜ ０．０１）；（６）反义ｃ－ｍｙｃ寡核苷酸与ＡＶＰ共同作用组ＶＳＭＣ的ｃ－ｍｙｃ癌基因ｍ ＲＮＡ杂交信号强度明显地高于对照组，而低于ＡＶＰ组；（７）反义ｃ－ｍｙｃ寡核苷酸?

反义C-myc寡核苷酸对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制

针对C－mycmRNA第二外显子起站码AUG及下游4个密码子设计合成了反斗、正义及错配寡核苷酸（ODNS），并对合成的ODNs进行了疏代磷酸化修饰。在人肝癌细胞SMMC－7721培养体系中，对反义寡核苷酸（ASODN）抑制细胞增殖的作用进行了研究。发现①与正义和错配ODNs相比较，反义C－mycODN有明显抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长的作用;②该生长抑制作用随ASODN剂量增加而增强，随ASODN作用时间而变化;③流式细胞计数仅测定证明反义C－mycODN主要阻断肝癌细胞增殖周期的G1到S期。结果提示：反斗C－mycODN在体外有序列特异性和细胞周期特异性抑制人肝癌细胞的生长作用，且该抑制作用与ASODN作用时间及剂量有关。

反义c-myc寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响

目的研究反义c-myc寡核苷酸(c-mycASODN)对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法设计c-mycASODN片段,转染入人骨肉瘤MG-63细胞,通过MTT检测、HE染色光镜观察、透射电镜超微结构及流式细胞仪(FCM)分析,观察和分析其对瘤细胞体外增殖、凋亡、细胞周期及c-myc基因蛋白的影响。结果MTT示c-mycASODN可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的体外增殖,10.0μmol/L、作用48h效果最明显;形态学观察到典型瘤细胞凋亡特征;流式细胞仪分析证实反义c-myc寡核苷酸主要阻止瘤细胞进入S期,出现明显的凋亡峰,凋亡率达36.82%,并可抑制c-myc基因蛋白的表达。结论反义c-myc寡核苷酸可诱导人骨肉瘤MG-63细胞的凋亡,对瘤细胞的增殖有抑制作用。

ET-1mRNA反义寡核苷酸治疗模式下糖尿病大鼠生存状况及肾脏病理进展研究

目的对糖尿病肾病(DN)大鼠模型利用内皮素反义寡核苷酸(ET-1AS-ODN)技术进行干预治疗,探讨ET-1AS-ODN在糖尿病肾病(DN)早期肾功能的保护作用。方法使用64只健康的SD雄性大鼠,通过腹腔注射链尿佐菌素(STZ)以剂量为55~60 mg/kg的方法制备糖尿病模型。随后,对其中32只大鼠给予ET-1AS-ODN 6 OD/kg/wk的治疗。在治疗过程中,对大鼠的生存状况及肾功能病理进展情况进行动态观察和测量。结果经过2、4、6、8周实验动物饲养后,与生理盐水对照组相比,8周后模型组(DM)生存率极低(P<0.05),肾功能检测血肌酐(Scr)、尿肌酐、尿素氮(BUN)水平、ET-1含量显著增高。ET-1AS-ODN治疗组在8周后效果显著,能够明显降低DN大鼠的血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平,并提高肌酐清除率(Ccr),其差异有统计学意义(P<0.05)。结论经AS-ODN早期干预治疗可以有效改善糖尿病大鼠的生存状态,并对肾功能具有保护作用。

反义寡核苷酸的作用机制及其在运动系统中的研究进展

反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASOs)是一类新型的小分子基因靶向药物,可与目的mRNA结合,ASOs以其与目标序列互补的碱基配对方式,对基因进行靶向调控。随着基因测序技术和分子合成技术的不断发展,ASOs在运动系统中的研究和应用进一步深入。本文阐述了ASOs在基因沉默和表达调控中的作用机制,以及其在基因治疗方面的应用前景。此外,还介绍了ASOs在运动系统疾病中的研究进展和应用情况,并分析此类药物目前所面临的问题,旨在深化医务人员对ASOs的认识,并为其在生物医学研究和临床中的推广应用提供有益参考。

反义寡核苷酸药物在神经系统疾病治疗中的研究与应用

神经系统疾病的病因及病理机制复杂且研究难度大,靶点发现及相应的药物研发困难。随着基因组及转录组测序等技术的发展,有关神经系统疾病的遗传形式、非遗传性或散发性神经系统疾病的靶点发现及分子机制取得了有效进展。基于转录组靶点发现的小核酸药物研发为神经系统疾病的新药开发领域提供了一种新的思路。反义寡核苷酸药物属于小核酸药物的一种,相比于以蛋白为靶点的传统小分子药或抗体药物,靶向mRNA的反义寡核苷酸具有候选靶点范围大、药物靶点筛选快、研发成功率高等优点。目前,反义寡核苷酸药物在神经退行性疾病领域的治疗广受各药物研发企业重点关注,具有良好临床应用前景。本研究总结反义寡核苷酸药物在多种神经系统疾病治疗中的研究与应用,回顾其作用机制、研发优势以及结构修饰方法的发展,并探讨用于治疗神经系统疾病的反义寡核苷酸药物临床用药及研发的最新进展,旨在为神经系统疾病、尤其是罕见病及难治病的新药研发提供借鉴和参考。

阿斯利康反义寡核苷酸药物获FDA批准上市

近日,阿斯利康宣布美国食品药品管理局(FDA)已批准反义寡核苷酸(ASO)疗法Eplontersen(商品名:Wainua)上市,用于治疗成人遗传性转甲状腺素蛋白(TTR)介导的淀粉样变性的多发性神经病(ATTRv-PN)。

联合转染反义c-myc寡核苷酸和组织纤溶酶原激活物基因预防损伤后动脉内膜增生的研究

目的观察血管局部联合转染c-myc反义寡核苷酸(AODN)和组织纤溶酶原激活物(tPA)基因对损伤后动脉内膜增生的影响。方法将同一只兔的左、右髂外动脉(各1·0cm)对换移植,移植血管分别用脂质体、c-myc-AODN和pBudCE4·1/tPA液浸泡,血管吻合口用上述3种液体浸泡过的缝线吻合。实验终点(术后3、7、14、28、56d)分为5个亚组,术后各实验终点取移植血管标本用于病理学检测、发色底物法检测tPA活性实验、3H-TdR掺入实验和免疫组织化学染色检测。结果术后各时间点联合转染组血管的内膜面积、管腔狭窄程度、3H-TdR掺入量和增值细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数均显著低于对照组(P<0·01),而且亦明显低于c-myc-AODN和tPA单独转染组(P(0·05)。结论血管局部联合转染c-myc-AODN和tPA基因能有效抑制内膜增生,防止损伤血管狭窄。