反义寡聚脱氧核苷酸抑制HL－60细胞中bcl－2基因表达的研究

目的：研究ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因的表达并探索ｂｃｌ－２基因ｍＲＮＡ特异的反义寡聚脱氧核苷酸（反义ＯＤＮ）对ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因表达的影响．方法：采用细胞原位杂交和免疫细胞化学染色技术检测ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因的表达，人工合成ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ特异性反义ＯＤＮ片段与ＨＬ－６０细胞共培养，在作用一定时间后分别测定细胞中ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ和Ｂｃｌ－２蛋白表达的变化．结果：ｂｃｌ－２基因在ＨＬ－６０细胞中既有转录水平的高表达，又有翻译水平的高表达，人工合成的反义ＯＤＮ片段在一定浓度范围内，作用一段时间后细胞内ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达无显著改变，而蛋白表达却呈现了显著下降，与浓度和作用时间呈正相关．结论：人工合成的反义ＯＤＮ片段可以抑制ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２的转录作用．在进行白血病基因治疗的实验研究中，ｂｃｌ－２基因可以作为基因治疗的一个有用的靶基因．

c-myb对大鼠黄体细胞孕酮和雌二醇生成的影响

本文观察了反义ｃ－ｍｙｂＯＤＮ对黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和Ｅ。产生的影响，并探讨了与二了酰ｃＡＭＰ和ｖｅｒａｐａｍｉｌ的关系。结果发现，反义０．ｍｙｂＯＤＮ能呈剂量相关方式抑制黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和民的产生，同时使ｃ．ｍｙｂ蛋白染色阳性的黄体细胞百分数下降：而无义ｔａｔＯＤＮ没有相应的作用。当１０４ｍｏｌｌＬ二丁酰ｃＡＭＰ与反义ｃ．ｍｙｂＯＤＮ共同作用时能明显逆转反义Ｃ．ｍｙｂＯＤＮ对产生和ｃ．ｍｙｂ表达的抑制作用。而１０‘ｍｏｌｌＬｖｅｒａｐｍｉｌ与反义０．ｍｙｂＯＤＮ共同作用时，对反义０．ｍｙｂＯＤＮ对产生和０．ｍｙｂ表达的抑制作用具有协同效应。表明，０．ｍｙｂ与黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和产生密切相关；ｃＡＭＰ和Ｃａ２”能通过调节ｃ。

葡萄糖对表皮葡萄球菌生物被膜形成的影响及调节机制的研究

生物被膜(Biofilm)是条件致病菌表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)的主要致病因素,生物被膜的形成依赖多糖PIA合成,合成PIA的糖基转移酶由icaADBC基因编码。以生物被膜形成能力不同的菌株为对象,通过研究不同环境对生物被膜形成、细菌总糖量及相关基因表达的变化,探索外界环境对生物被膜形成的影响及葡萄糖对生物被膜诱导的分子机制。有利于生物被膜形成培养条件促进生物被膜形成及多糖的表达,葡萄糖能诱导ica基因的表达和生物被膜形成,ica基因的反义寡核苷酸(ODN)能对抗葡萄糖的作用;葡萄糖作用下不同生长周期生物被膜形成相关基因ica、icaR、AtlE表达不同。表皮葡萄球菌生物被膜的形成与细菌糖代谢有关,葡萄糖通过上调ica表达诱导生物膜形成,但不需要ica基因的持续表达;

子宫内膜癌细胞雌激素受体亚型的调控和功能的初步研究

目的初步建立子宫内膜癌雌激素受体(ER)亚型α或β弱表达的细胞模型,研究雌激素及他莫昔芬(TAM)与ER亚型的关系。方法分别设计针对ERα和ERβ的反义寡脱氧核苷酸(ODN)、正义ODN、错义ODN,并转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa,将Ishikawa细胞分为4组,即未转染组、反义ODN组、正义ODN组及错义ODN组。蛋白印迹法测定转染后细胞ERα和ERβ蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染ODN后,17β雌二醇和TAM对Ishikawa细胞生长的影响。结果(1)分别针对ERα及ERβ的反义ODN可以选择性下调转染的Ishikawa细胞中ERα及ERβ蛋白的表达(分别下调45%和54%)。(2)17β雌二醇及TAM可以促进未转染组Ishikawa细胞的生长。转染ERα反义ODN后,可抑制17β雌二醇及TAM对Ishikawa细胞的促生长作用,以转染后的24、48及72h为著,反义ODN组各时间点分别与未转染、正义ODN、错义ODN组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)转染ERβ反义ODN后,17β雌二醇对Ishikawa细胞的促生长作用的改变不明显。转染ERβ反义ODN可抑制TAM对Ishikawa细胞的促生长作用,以转染后72h为著,反义ODN组分别与未转染、正义ODN、错义ODN组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)反义核酸技术能够特异性地有效下调Ishikawa细胞中ERα和ERβ蛋白的表达,其可作为子宫内膜癌细胞中ER调控的一种有效的实验手段。(2)17β雌二醇促进子宫内膜癌细胞生长的作用主要通过ERα介导;ERα和ERβ均参与TAM促进子宫内膜癌细胞生长的作用。