长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5反向转录序列1靶向调控微RNA-128-3p对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移的影响

目的探究长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5反向转录序列1(lncRNA OIP5-AS1)在结直肠癌中的表达情况及靶向调控微RNA-128-3p(miR-128-3p)对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)定量分析2017年1月至2018年12月在郑州大学人民医院住院并进行手术治疗的38例结直肠癌病人癌组织及相应癌旁组织、结直肠癌细胞系(SW480、SW620、HT-29和LoVo)及人正常结直肠黏膜细胞FHC中lncRNA OIP5-AS1和miR-128-3p的表达。将SW620细胞设为si-OIP5-AS1组、si-NC组、miR-128-3p mimic组、mimic-NC组、miR-128-3p inhibitor+si-OIP5-AS1组和inhibitor-NC+siOIP5-AS1组,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用划痕实验和transwell实验检测细胞侵袭与迁移能力,采用蛋白质印迹法检测E2F1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达,采用双萤光素酶报告实验验证lncRNA OIP5-AS1与miR-128-3p的靶向关系。结果与癌旁组织相比较,lncRNA OIP5-AS1在结直肠癌组织中表达显著升高(1.42±0.40比0.98±0.29,P<0.05),miR-128-3p表达显著降低(0.72±0.21比1.52±0.39,P<0.05),且两者在结直肠癌组织中的表达呈负相关;与FHC细胞(1.05±0.10)相比较,lncRNA OIP5-AS1在结直肠癌细胞株[SW480(1.60±0.25)、SW620(2.19±0.33)、HT-29(1.62±0.23)和LoVo(1.95±0.20)]中的表达显著增高(均P<0.05),miR-128-3p表达(0.70±0.15、0.46±0.03、0.59±0.14、0.74±0.09比1.02±0.11)显著降低(均P<0.05)。lncRNA OIP5-AS1与miR-128-3p为相互作用靶基因,lncRNA OIP5-AS1表达下调或miR-128-3p表达上调均能降低vimentin、N-cadherin、E2F1和cyclin D1蛋白表达,增高E-cadherin蛋白表达,抑制SW620细胞的增殖、侵袭和迁移。在转染si-OIP5-AS1的同时转染miR-128-3p inhibitor可增加vimentin、N-cadherin、E2F1和cyclin D1蛋白表达,降低E-cadherin蛋白的表达,逆转lncRNA OIP5-AS1表达下调对SW620细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论lncRNA OIP5-AS1在结直肠癌中高表达,并靶向调控miR-128-3p参与结直肠癌的增殖、侵袭和迁移过程,lncRNA OIP5-AS1和miR-128-3p能为结直肠癌的诊断和靶向治疗提供潜在的应用价值。

血清miRNA-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1水平与脑胶质瘤患者术后复发的关系

目的检测脑胶质瘤患者的血清微小RNA(miRNA)-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1(A1BG-AS1)水平,并分析其与患者术后复发的关系。方法选取94例接受手术治疗的脑胶质瘤患者和84例健康体检者,分别作为研究组和对照组。术后所有脑胶质瘤患者均随访2年,依据是否复发分为复发组(n=71)和非复发组(n=23)。采用聚合酶链反应(PCR)检测血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平,比较研究组和对照组、复发组和非复发组的血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平。采用Spearman相关分析法分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1单独及联合检测对脑胶质瘤患者术后复发的评估价值。结果研究组患者血清miRNA-199a-5p水平明显低于对照组,血清A1BG-AS1水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。复发组患者血清miRNA-199a-5p水平低于非复发组,血清A1BG-AS1水平高于非复发组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。血清miRNA-199a-5p水平与脑胶质瘤患者术后复发呈负相关(r=-0.382,P﹤0.05),血清A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发呈正相关(r=0.423,P﹤0.05)。ROC曲线显示,血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1联合检测评估脑胶质瘤患者术后复发的AUC和灵敏度均高于二者单独检测。结论脑胶质瘤患者血清miRNA-199a-5p水平降低,血清A1BG-AS1水平升高,且其表达水平与脑胶质瘤患者术后复发有关,联合检测对术后复发具有较好的评估价值。

糖尿病肾病患者血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p与白蛋白尿短期进展及预后的关系

目的分析糖尿病肾病(DN)患者血清长链非编码RNA KCNQ1反向链/反义转录物1(LncRNA KCNQ1OT1)、微小核糖核酸-192-5p(miR-192-5p)与白蛋白尿短期进展及预后的关系。方法选取2021年4月—2022年12月康复大学青岛中心医院/青岛市中心医院内分泌风湿免疫科收治的DN患者102例为观察组,根据2次检测(间隔6个月)24 h尿白蛋白及SCr水平分为未进展亚组(n=78)和进展亚组(n=24),根据随访1年预后情况分为预后良好亚组(n=84)和预后不良亚组(n=18),选择同期医院健康体检者58例为健康对照组。采用qRT-PCR检测血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p相对表达量;Pearson法分析LncRNA KCNQ1OT1与miR-192-5p的相关性;多因素Logistic回归分析患者白蛋白尿短期进展的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA KCNQ1OT1,miR-192-5p对患者预后的预测价值。结果与健康对照组比较,观察组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=17.619/<0.001、16.120/<0.001);与未进展亚组比较,进展亚组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=7.698/<0.001、9.485/<0.001);与未进展亚组比较,进展亚组患高血压比例降低及FPG、HbA_(1c)、BUN、SCr升高,差异均有统计学意义(χ^(2)/P=9.835/0.002,t/P=2.593/0.011、2.356/0.020、4.582/<0.001、3.139/0.002);与预后良好亚组比较,预后不良亚组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=7.602/<0.001,9.380/<0.001);LncRNA KCNQ1OT1与miR-192-5p呈负相关(r/P=-0.452/<0.001);高血压、血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高为患者白蛋白尿短期进展的危险因素[OR(95%CI)=1.532(1.058~2.219)、1.638(1.100~2.438)],miR-192-5p水平升高为患者白蛋白尿短期进展的保护因素[OR(95%CI)=0.671(0.517~0.871)];LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p以及二者联合预测患者预后的AUC分别为0.808、0.822、0.896,联合预测显著优于各自单独预测(Z/P=2.030/0.042、2.116/0.034)。结论DN患者血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低,两者均为DN患者发生白蛋白尿短期进展的影响因素,且对患者预后具有一定辅助预测价值。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1靶向微小RNA-339-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1(lncRNA CDKN2B-AS1)对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法 收集南阳市中心医院2017年1月2019年1月收治的37例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织。将MDA-MB-453细胞分为CDKN2B-AS1阴性对照(si-NC组)、CDKN2B-AS1小分子干扰RNA(si-CDKN2B-AS1组)、CDKN2B-AS1小分子干扰RNA+miR-339-5p阴性对照(si-CDKN2B-AS1+anti-miR-NC组)以及CDKN2B-AS1小分子干扰RNA+miR-339-5p特异性寡核苷酸抑制剂(si-CDKN2B-AS1+anti-miR-339-5p组)。采用RT-qPCR法对CDKN2B-AS1及微小RNA-339-5p(miR-339-5p)表达水平进行检测;细胞周期及增殖活性检测分别采用流式细胞术及MTT实验;采用Transwell小室技术对细胞迁移和侵袭进行检测;采用Western blotting法对增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki67)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达进行检测;荧光素酶报告实验检测CDKN2BAS1对miR-339-5p的靶向调控。结果 在乳腺癌组织中CDKN2B-AS1表达水平上调[(2.23±0.08)比(1.00±0.06)](P<0.05)。抑制CDKN2B-AS1可增加G0期细胞比例[(43.29±3.76)%比(30.25±3.01)%]、P21表达水平升高,S期细胞比例[(21.91±3.10)%比(34.19±3.32)%]、细胞存活率[(53.02±5.38)%比(100.00±7.12)%]、迁移、侵袭数以及Ki67、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05)。CDKN2B-AS1靶向调控miR-339-5p,抑制miR-339-5p逆转抑制CDKN2B-AS1对MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论 抑制CDKN2B-AS可抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭,且靶向调控miR-339-5p表达。

长链非编码RNA alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1靶向微小RNA-106b-5p调控氧化型低密度脂蛋白诱导的人脑微血管内皮细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1(A2M-AS1)靶向微小RNA(miR)-106b-5p对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的影响。方法用ox-LDL诱导人脑微血管内皮细胞设为ox-LDL组,正常培养细胞为对照(Ctrl)组;A2M-AS1过表达(pcDNA-A2M-AS1组)、空载体(pcDNA组)、miR-106b-5p抑制剂(anti-miR-106b-5p组)、阴性对照(anti-miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与对照mimic NC(miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与miR-106b-5p模拟物(miR-106b-5p mimics组)转染细胞后加ox-LDL处理,n=9;Real-time PCR检测A2M-AS1与miR-106b-5p表达;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测A2M-AS1与miR-106b-5p靶向关系;Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达量。结果与Ctrl组比较,ox-LDL组A2M-AS1表达水平、SOD和CAT活性、Bcl-2蛋白水平降低,miR-106b-5p表达水平、MDA水平、凋亡率、Bax蛋白水平升高(P<0.05);过表达A2M-AS1或干扰miR-106b-5p降低ox-LDL诱导细胞后MDA水平、凋亡率与Bax蛋白水平,升高SOD、CAT活性和Bcl-2蛋白水平(P<0.05);A2M-AS1靶向miR-106b-5p;上调miR-106b-5p逆转过表达lncRNA A2M-AS1对ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的作用。结论A2M-AS1通过靶向miR-106b-5p减轻ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤。

沉默血小板反应蛋白-1基因对亚溶解型C5b-9诱导肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响

目的研究沉默血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)基因对于亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)分泌细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响。方法设计合成针对TSP-1基因4个靶点的小发夹RNA(small hair RNA,shRNA),并构建相应的表达质粒,筛选沉默效率最佳的TSP-1shRNA(shTSP-1)后,将shTSP-1转染体外培养的大鼠GMC,再给予sublytic C5b-9刺激。以Westernblot检查TSP-1、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ)的表达情况。另用ELISA法测定培养上清中总转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和活化TGF-β1的含量。结果核酸序列分析证明,4种TSP-1shRNA重组质粒均构建成功。Western blot实验证实,构建的shTSP-1-3(Thbs1-3)具有最佳的沉默效率。将shTSP-1-3转染大鼠GMC后,在沉默TSP-1基因表达的同时,能明显抑制由sublytic C5b-9诱导的TGF-β1活化及细胞外基质(FN和collagenⅣ)的合成。结论 TSP-1基因表达在sublytic C5b-9刺激大鼠GMC诱导TGF-β1活化及ECM分泌的过程中,发挥了重要的促进作用。

LncRNAHOTAIR靶向miR-17-5p/TXNIP对狼疮性肾炎进展的机制研究

目的探讨长链非编码RNA同源盒基因转录反义RNA(LncRNAHOTAIR)靶向miR-17-5p/硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)对狼疮性肾炎(LN)进展的机制。方法取60只MRL/lpr雌性小鼠,随机分为模型组、LncRNAHOTAIR敲低组、miR-17-5p agomir组、阴性对照组和LncRNAHOTAIR敲低+miR-17-5p antagomir组,每组12只,另取12只C57BL/6J雌性小鼠作为对照组,检测各组小鼠肾功能、免疫器官指数;以HE染色实验检测各组小鼠肾组织病理形态;以酶联免疫吸附测定(ELASA)法测定各组小鼠血清抗双链DNA(dsDNA)、免疫细胞因子免疫球蛋白G(IgG)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;以实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)和免疫印迹法检测各组小鼠肾组织LncRNAHOTAIR、miR-17-5p及TXNIP表达。以双荧光素酶报告基因实验检测小鼠肾小球系膜细胞中LncRNAHOTAIR对miR-17-5p、miR-17-5p对TXNIP的靶向调节。结果与对照组比较,模型组小鼠肾组织发生严重病理损伤,胸腺指数、脾脏指数、miR-17-5p表达降低(P<0.05),尿蛋白浓度、血尿素氮(BUN)、血清抗dsDNA及IgG、IL-6、MCP-1、TNF-α、肾组织LncRNAHOTAIR及TXNIP表达升高(P<0.05)。与模型组比较,Ln⁃cRNAHOTAIR敲低组、miR-17-5p agomir组小鼠肾组织病理损伤减轻,胸腺指数、脾脏指数、miR-17-5p表达升高(P<0.05),尿蛋白浓度、BUN、血清抗dsDNA及IgG、IL-6、MCP-1、TNF-α、肾组织LncRNAHOTAIR及TXNIP表达降低(P<0.05)。下调miR-17-5p可减弱敲低LncRNAHOTAIR组对模型组小鼠各指标的作用。结论敲低LncRNAHOTAIR可通过上调miR-17-5p而降低TXNIP表达,进而减少LN小鼠免疫炎性因子产生,增强其免疫功能,抑制体内炎症发生发展,最终减轻小鼠肾组织损伤并改善其肾功能。

LncRNA OIP5-AS1通过调节miR-186-5p/KIF14信号轴来促进神经母细胞瘤的增殖

目的:神经母细胞瘤(NB)是儿童最常见的实体瘤。本研究旨在确定长链非编码RNA(LncRNA)Opa相互作用蛋白5反义RNA 1(OIP5-AS1)在NB中的作用及其可能的分子机制。方法:体外培养神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH和人神经母细胞BE2C。通过定量实时聚合酶链式反应测定OIP5-AS1、miR-186-5p和驱动蛋白分子14(KIF14)的表达。使用CCK-8测定法、平板克隆形成法和EdU掺入法评估细胞增殖。蛋白质印迹法检测KIF14蛋白水平。通过在线数据库Starbase3.0预测靶基因,并通过双荧光素酶报告基因测定进行验证。结果:OIP5-AS1在SK-N-SH细胞中的表达水平较BE2C细胞显著上调(1.88±0.14 vs 1.00±0.07),P<0.05。shOIP5-AS1组下调OIP5-AS1表达后,SK-N-SH细胞活力、克隆形成能力(111.33±15.57个vs 154.67±20.74个vs 149.33±17.01个,P<0.05)和DNA合成能(EdU阳性细胞比例:35.09±8.02%vs 67.87±7.21%vs 63.33±7.17%,P<0.05)弱于NC组和shCtrl组。经生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证,OIP5-AS1与miR-186-5p以及miR-186-5p与KIF143'-UTR具有靶向调控作用。与NC组和shCtrl组相比,shOIP5-AS1组KIF14 mRNA相对表达量(0.41±0.09,P<0.05)和KIF14蛋白表达(0.20±0.02,P<0.05)均下调。相反,shOIP5-AS1+miR-186-5p inhibitor组KIF14 mRNA相对表达量和KIF14蛋白表达量分别为0.83±0.12和0.62±0.04,较shOIP5-AS1+miR-NC组升高。RNA结合蛋白免疫共沉淀结果也显示,与对照(IgG)相比,Ago2抗体可以富集OIP5-AS1和miR-186-5p。与shOIP5-AS1+miR-NC组相比,shOIP5-AS1+miR-186-5p inhibitor组细胞活力和克隆形成能力(180.0±11.36 vs 136.0±14.53)显著增加(P<0.05)。在挽救性实验中,与shOIP5-AS1+miR-186-5p inhibitor+siNC组相比,shOIP5-AS1+miR-186-5p inhibitor+siKIF14组细胞活力和克隆形成能力(139.33±8.96 vs 183.03±18.0,P<0.05)明显降低(P<0.05)。结论:SK-N-SH细胞中OIP5-AS1表达水平显著上调,并且作为ceRNA竞争性地抑制miR186-5p,上调KIF14表达,从而促进NB进展。

慢病毒载体介导RNA结合蛋白-5对肺腺癌细胞系H1299的增殖和凋亡的影响

目的探讨慢病毒载体介导RNA结合蛋白-5(QKI-5)对肺腺癌细胞凋亡的影响。方法应用GV358(过表达)和GV248(抑制表达)载体分别构建针对QKI-5基因的慢病毒过表达载体和抑制表达载体,转染293T细胞产生慢病毒颗粒,收集并测定慢病毒滴度。将经测序鉴定的QKI-5过表达的慢病毒或抑制表达的慢病毒转染到肺腺癌细胞H1299,Real-time PCR检测QKI-5 mRNA表达,集落形成实验检测H1299细胞增殖情况,膜联蛋白V(annexin V)、碘化丙啶(PI)检测H1299细胞凋亡情况,Western blotting检测促凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8表达。结果成功构建QKI-5过表达慢病毒载体和抑制表达慢病毒载体,与对照组比较,QKI-5过表达后,QKI-5mRNA表达增加,细胞集落形成减少,肺腺癌细胞早期凋亡增加,促凋亡蛋白Caspase-8表达增加;QKI-5抑制表达后,QKI-5 mRNA表达降低,细胞集落形成增加,但肺腺癌细胞凋亡无明显变化,然而促凋亡蛋白Caspase-8表达减少。结论慢病毒介导QKI-5抑制增殖,可能通过Caspase-8促进肺腺癌细胞系H1299的凋亡。

鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2和miR-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系研究

目的探讨鼻咽癌癌组织中长链非编码RNA羧基末端结合蛋白1反义RNA2(long non-coding RNA C-terminal binding protein 1 antisense RNA2,LncRNA CTBP1-AS2)、微小核糖核酸(microRNA,miR)-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系。方法选取2018年3月~2020年3月于南通市肿瘤医院确诊的222例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,记录患者临床资料,评估放疗疗效及预后,并分为生存组(n=194)和死亡组(n=28);另选取同期219例鼻咽炎患者为对照组。采用Pearson相关分析检验鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2,miR-140-5p表达水平与患者预后的关系;采用COX比例风险回归模型对鼻咽癌患者预后进行多因素分析。结果鼻咽癌组患者组织中LncRNA CTBP1-AS2表达水平(2.25±0.46)高于对照组(1.02±0.22),miR-140-5p表达水平(0.67±0.19)低于对照组(1.01±0.23),差异具有统计学意义(t=35.742,16.934,均P<0.001)。鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平呈负相关(r=-0.624,P<0.001)。LncRNA CTBP1-AS2高表达的鼻咽癌患者放疗后总有效率(74.11%)和三年生存率(77.68%)低于低表达患者(93.64%,97.27%),差异具有统计学意义(χ^(2)=15.578,19.331,均P<0.001);miR-140-5p高表达患者放疗后总有效率(93.58%)和三年生存率(96.33%)显著高于低表达患者(74.34%,78.76%),差异具有统计学意义(χ^(2)=15.119,15.538,均P<0.001)。死亡组磁共振酰胺质子转移(amide proton transfer,APT)值(2.10±0.26)、放疗无效(85.71%)、LncRNA CTBP1-AS2高表达(89.29%)及miR-140-5p低表达(85.71%)患者比例高于生存组(1.82±0.31,6.19%,44.85%,45.88%),差异具有统计学意义(t/χ^(2)=4.551,108.127,19.331,15.538,均P<0.001)。LncRNA CTBP1-AS2表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的危险因素(HR=2.762,95%CI:1.510~5.051,P=0.001),miR-140-5p表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的保护因素(HR=0.817,95%CI:0.718~0.930,P=0.002)。结论鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2高表达,miR-140-5p低表达,二者与放疗疗效及预后关系密切。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-16-5p/CREB1轴减轻缺氧/复氧诱导大鼠H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)FGD5反义RNA1(FGD5-AS1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响以及对微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1(miR-16-5p/CREB1)轴的调节机制。方法:将H9c2细胞分为对照组和H/R组(缺氧6 h,复氧6 h),然后将H/R组细胞分别进行转染,分为oe-NC组、oe-FGD5-AS1组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic-NC组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测细胞中FGD5-AS1、miR-16-5p、CREB1的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定裂解凋亡蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;CCK-8法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶活性实验分别验证miR-16-5p和FGD5-AS1、CREB1的靶向关系。结果:与对照组比较,H/R组细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),miR-16-5p mRNA水平、细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组和oe-NC组比较,转染过表达FGD5-AS1基因的H9c2细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达增高,凋亡率及miR-16-5p、cleaved Caspase-3、Bax水平下降(P<0.05)。双荧光素酶活性实验验证了FGD5-AS1、CREB1均与miR-16-5p有结合位点。结论:过表达FGD5-AS1可能通过靶向下调miR-16-5p表达,上调CREB1表达,抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡。

肿瘤蛋白翻译控制1的反义RNA 1在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨肿瘤蛋白翻译控制1的反义RNA 1(TPT1-AS1)在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和作用机制。方法 收集于2017年1月至2018年12月在信阳市中心医院心胸外科行手术治疗的46例肺癌组织和对应的癌旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测组织中TPT1-AS1和微小RNA-671-5p(miR-671-5p)表达,Pearson相关性分析肺癌组织中TPT1-AS1和miR-671-5p表达的相关性。同时,于2019年5月至2020年4月期间,通过体外培养肺癌细胞A549,双荧光素酶报告基因实验验证了细胞中TPT1-AS1和miR-671-5p调控关系。另将A549细胞分为对照组、小干扰RNA阴性序列(si-NC)组、TPT1-AS1小干扰RNA(si-TPT1-AS1)组、si-TPT1-AS1+抑制剂阴性序列(anti-miR-NC)组和si-TPT1-AS1+miR-671-5p抑制剂(anti-miR-671-5p)组,甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹实验检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。结果 肺癌组织中TPT1-AS1表达量较癌旁组织显著升高[(1.88±0.12)比(1.01±0.08),P<0.05],miR-671-5p表达量较癌旁组织显著降低[(0.45±0.04)比(1.01±0.06),P<0.05]。Pearson相关性分析显示,肺癌组织中TPT1-AS1和miR-671-5p呈负相关(r=-0.63,P<0.05)。TPT1-AS1在A549细胞中负调控miR-671-5p表达。si-TPT1-AS1组A549细胞存活率、迁移数和侵袭数分别为(53.24±2.81)%、(63.11±6.51)个和(33.78±3.23)个,均低于si-NC组[分别为(98.78±2.57)%、(147.44±11.08)个和(101.67±9.95)个,均P<0.05]。CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白在si-TPT1-AS1组的表达量分别为(0.43±0.05)、(0.21±0.03)、(0.43±0.04),较si-NC组均降低[分别为(0.86±0.04)、(0.55±0.05)、(0.48±0.07),均P<0.05]。si-TPT1-AS1+anti-miR-671-5p组A549细胞存活率、迁移数和侵袭数及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达分别为(85.43±2.94)%、(125.78±10.59)个、(88.78±7.19)个、(0.75±0.03)、(0.48±0.03)、(0.43±0.04),较si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组均升高[分别为(54.36±2.95)%、(63.78±6.48)个、(33.56±3.54)个、(0.41±0.03)、(0.22±0.03)、(0.21±0.04),均P<0.05]。对照组与si-NC组、si-TPT1-AS1组与si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组各检测指标比较均差异无统计学意义(P>0.05)。结论 肺癌组织中TPT1-AS1表达升高,miR-671-5p表达降低,且两者呈负相关。TPT1-AS1可能通过靶向下调miR-671-5p的表达促进肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

lncRNA OIP5-AS1调节miR-942-5p/CHEK1轴对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)OPA相互作用蛋白5反义转录本1(OIP5-AS1)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响机制。方法 收集33例胶质瘤患者(低级别胶质瘤14例、高级别胶质瘤19例)和33例颅脑损伤患者的组织标本。实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织和细胞中OIP5-AS1、微小RNA-942-5p(miR-942-5p)和检查点激酶1(CHEK1)mRNA表达,分析胶质瘤组织中OIP5-AS1、miR-942-5p和CHEK1 mRNA表达水平的相关性。体外培养人脑胶质瘤细胞系U87、SHG-44、U251、H4和正常人星形胶质细胞NHA,Western blot检测细胞中CHEK1蛋白表达。将U87细胞分为对照(NC)组、siRNA阴性对照(si-NC)组、OIP5-AS1 siRNA(si-OIP5-AS1)组、siOIP5-AS1+inhibitor阴性对照(si-OIP5-AS1+anti-NC)组、si-OIP5-AS1+miR-942-5p抑制剂(si-OIP5-AS1+anti-miR-942-5p)组,采用Lipofectamine 3000试剂进行转染。转染后,qPCR和Western blot检测细胞中OIP5-AS1、miR-942-5p和CHEK1 mRNA和蛋白表达水平;MTT法测定细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。最后通过双荧光素酶和RNA免疫沉淀(RIP)实验验证OIP5-AS1和miR-942-5p以及CHEK1和miR-942-5p的相互作用。结果 OIP5-AS1和CHEK1在脑胶质瘤组织和细胞中过表达,miR-942-5p呈低表达(均P<0.05);相关分析显示,脑胶质瘤组织中OIP5-AS1与miR-942-5p的表达水平呈负相关,miR-942-5p与CHEK1mRNA的表达水平呈负相关,CHEK1与OIP5-AS1 mRNA的表达水平呈正相关;且OIP5-AS1、CHEK1 mRNA在高级别胶质瘤组织中的表达明显高于低级别组织,而高级别胶质瘤中的miR-942-5p水平明显低于低级别组织(P<0.01)。沉默OIP5-AS1可显著上调miR-942-5p,抑制CHEK1的mRNA和蛋白表达(均P<0.05);沉默OIP5-AS1可显著抑制U87细胞增殖、迁移和侵袭,促进U87细胞凋亡(均P<0.05);下调miR-942-5p可上调CHEK1表达,阻断OIP5-AS1沉默对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响(均P<0.05)。双荧光素酶和RIP实验证实miR-942-5p是OIP5-AS1的靶基因,CHEK1是miR-942-5p的下游靶基因。结论 沉默OIP5-AS1可能通过上调miR-942-5p抑制CHEK1表达,抑制脑胶质瘤细胞的侵袭和迁移,并促进细胞凋亡。

长链非编码RNA ZFAS1和SNHG5在鼻咽癌组织中的表达及对预后的影响分析

目的探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)锌指蛋白反义链1(zinc?nger antisense 1,ZFAS1和核仁小RNA宿主基因5(small nucleolar RNA host gene 5,SNHG5)在鼻咽癌组织中的表达及对预后的影响。方法选择2013年6月至2015年6月本院收治的109例鼻咽癌患者为研究对象,所有患者均行鼻咽活检且经病理检查证实为鼻咽癌。采用实时定量PCR和荧光定量PCR检测并比较鼻咽癌组织、癌旁组织以及不同临床病理特征、不同预后患者ZFAS1和SNHG5的相对表达量。结果鼻咽癌组织中ZFAS1的相对表达量显著高于癌旁组织(P <0.05),而SNHG5的相对表达量显著低于癌旁组织(P <0.05)。不同性别、年龄患者ZFAS1和SNHG5的相对表达量比较均无显著差异(P_均> 0.05)。TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者ZFAS1的相对表达量显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P <0.05),有淋巴结转移患者ZFAS1的相对表达量显著高于无淋巴结转移患者(P <0.05);TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者SNHG5的相对表达量显著低于Ⅰ～Ⅱ期患者(P <0.05),有淋巴结转移患者SNHG5的相对表达量显著低于无淋巴结转移患者(P <0.05)。107例患者完成随访,随访率为98.17%。随访3年,死亡19例,存活90例。死亡患者ZFAS1的相对表达量显著高于存活患者(P <0.05),且SNHG5的相对表达量显著低于存活患者(P <0.05)。结论在鼻咽癌组织中,lncRNA ZFAS1表达上调,且预后越差,其表达水平越高;lncRNA SNHG5表达下调,且预后越差,其表达水平越低。lncRNA ZFAS1和SNHG5在评估鼻咽癌预后方面具有重要的研究意义。

lncRNA SH3BP5-AS1单核苷酸多态性与中国汉族人缺血性中风血瘀证显著相关

目的研究旨在探讨中国汉族人群中lncRNA SH3BP5-AS1多态性rs11713836与缺血性中风(ischemic stroke,IS)遗传易感性及中医证候的关系。方法研究包括774例IS患者和793例对照组。采用Massarray SNP基因分型方法进行基因分型。采用《中风病中医辨证诊断标准》量表对IS患者进行中医证候鉴定。所有统计分析采用SPSS 17.0统计软件进行。结果在隐性模型下,lncRNA SH3BP5-AS1多态性rs11713836与缺血性中风血瘀证显著相关[OR(95%CI)=0.52(0.29-0.93),P=0.028],在校正了包括性别和年龄在内的协变量后,结果依然有统计学意义;而rs11713836与缺血性中风易感性及风、痰、火热、气虚证等中医证候易感性无相关性。此外,rs11713836与血清APO-B[隐性模型:OR(95%CI)=0.09(0.02-0.17),P=0.032]、VLDL[加性模型:OR(95%CI)=0.09(0.04-0.14),P<0.001;显性模型:OR(95%CI)=0.09(0.02-0.16),P=0.011;隐性模型:OR(95%CI)=0.19(0.09-0.30),P<0.001]、TG[加性模型:OR(95%CI)=0.15(0.05-0.24),P=0.003;显性模型:OR(95%CI)=0.14(0.01-0.27),P=0.041;隐性模型:OR(95%CI)=0.31(0.11-0.50),P=0.003]、FIB[显性模型:OR(95%CI)=0.20(0.04-0.35),P=0.012]显著相关,调整性别年龄后以上关联依然有统计学意义。结论lncRNA SH3BP5-AS1多态性rs11713836可能影响缺血性中风血瘀证的发生,有望作为缺血性中风血瘀证的生物标志物与潜在治疗靶点,并且可能影响缺血性中风患者的血脂代谢和凝血功能。

TPT1-AS1靶向调控微小RNA-30c-5p及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA肿瘤蛋白翻译调节因子1反义RNA 1(TPT1-AS1)对微小RNA-30c-5p(miR-30c-5p)的靶向调控作用及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测结直肠癌组织相较于癌旁组织及结直肠癌细胞(DLD-1、HCT116、SW480和LoVo)相较于人正常结肠上皮细胞HCoEpiC的TPT1-AS1水平。脂质体法向LoVo细胞转染TPT1-AS1特异性siRNA(si-TPT1-AS1组)并设转染si-NC的阴性对照组和未转染的空白对照组,qPCR检测TPT1-AS1和miR-30c-5p水平,MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞活性、划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶3(MMP-3)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)及其磷酸化形式p-STAT3的水平,在线预测并结合双荧光素酶报告实验验证miR-30c-5p与TPT1-AS1的相互作用关系。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织的TPT1-AS1水平升高至2.020±0.080,而miR-30c-5p水平降低至0.597±0.044(P<0.05),且结直肠癌组织的TPT1-AS1水平与miR-30c-5p水平呈负相关(r=-0.801,P<0.001)。4株结直肠癌细胞的TPT1-AS1水平均表现为异常高表达(P<0.05),功能验证实验选择TPT1-AS1表达最高的LoVo细胞。与空白对照组和阴性对照组相比,si-TPT1-AS1组LoVo细胞活力减弱,TPT1-AS1水平降低而miR-30c-5p水平升高(P<0.05)。si-TPT1-AS1组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(18.650±3.346)%和(108.326±17.383)个,均低于空白对照组的(90.963±4.328)%和(275.675±21.078)个及阴性对照组的(93.165±4.317)%和(281.431±23.880)个(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,si-TPT1-AS1组的STAT3水平无显著变化,而p-STAT3和MMP-3水平降低(P<0.05)。MiR-30c-5p模拟物降低了野生型TPT1-AS1的荧光素酶活性(P<0.05),而不影响突变型TPT1-AS1的荧光素酶活性。空白对照组和阴性对照组上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论结直肠癌中TPT1-AS1高表达,且增强了结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,TPT1-AS1可能通过靶向miR-30c-5p来发挥促癌作用。TPT1-AS1的发现为结直肠癌的诊治和预后评估及下一步的转化研究提供了新的思路。

AFAP1-AS1靶向调控微小RNA-139-5p及对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA 1(AFAP1-AS1)对胰腺癌细胞增殖和侵袭迁移的影响。方法使用GEPIA分析来自TCGA数据库和GTEx项目中胰腺癌和正常组织的AFAP1-AS1水平,Kaplan-Meier Plotter数据库分析AFAP1-AS1与胰腺癌患者临床预后的关系。采用实时定量PCR(qPCR)检测人胰腺导管细胞(hTERT-HPNE)和胰腺癌细胞(AsPC-1、PANC-1、CFPAC-1、BxPC-3和SW1990)的AFAP1-AS1水平,脂质体介导AFAP1-AS1特异性小干扰RNA(si-AFAP1-AS1)转染SW1990细胞(si-AFAP1-AS1组)并设转染阴性对照无关序列的si-NC组和仅经脂质体处理而未行转染的对照组;MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测SW1990细胞增殖、迁移和侵袭情况,双荧光素酶报告基因实验验证AFAP1-AS1与微小RNA-139-5p(miR-139-5p)的靶向关系。结果胰腺癌组织的AFAP1-AS1水平高于正常组织(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据库分析结果显示,AFAP1-AS1水平与胰腺癌的总生存期无关(HR=1.53,95%CI:0.98~2.39,P=0.057),而与无复发生存期有关(HR=10.08,95%CI:1.35~75.19,P=0.006),其中AFAP1-AS1高水平者的复发风险升高。胰腺癌细胞的AFAP1-AS1水平均高于hTERT-HPNE细胞(P<0.05),选取AFAP1-AS1水平最高的SW1990细胞进行后续的干扰实验。与对照组和si-NC组相比,si-AFAP1-AS1组SW1990细胞的增殖活性在处理72 h后降低而miR-139-5p水平升高(P<0.05);si-AFAP1-AS1组的穿膜细胞数和划痕愈合率分别为(61.818±5.036)个和(21.542±2.310)%,低于对照组的(182.851±11.027)个和(81.849±4.473)%及si-NC组的(190.352±11.228)个和(78.764±3.291)%,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和si-NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。野生型AFAP1-AS1序列和miR-139-5p模拟物共转染细胞较突变型AFAP1-AS1和miR-139-5p模拟物共转染的荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论胰腺癌组织和细胞中AFAP1-AS1高表达且可能通过靶向miR-139-5p来促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,进而加速癌症进程,AFAP1-AS1/miR-139-5p轴有望成为胰腺癌诊治的潜在靶点。

lncRNA RBM5-AS1在急性髓系白血病中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA结合基序蛋白5-反义链1(lncRNA RBM5-AS1)在急性髓系白血病(AML)中的表达及其临床意义。方法选取2017年1月—2019年1月南阳市中心医院AML患者72例(AML组),其中经化疗得到完全缓解(CR)43例(AML-CR组);另选取缺铁性贫血患者45例(贫血组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组骨髓lncRNA RBM5-AS1水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNA RBM5-AS1对AML的诊断价值;采用Kaplan-Meier曲线分析lncRNA RBM5-AS1水平与AML患者预后的关系;采用Cox回归分析评估AML患者预后的影响因素。体外培养人AML细胞系HL-60,并将其随机分为对照组、sh-NC组、sh-lncRNA RBM5-AS1组,采用RT-qPCR检测各组HL-60细胞中lncRNA RBM5-AS1水平;采用CCK-8和Transwell试验检测各组HL-60细胞的增殖、侵袭、迁移情况;采用免疫印迹法检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白(Wnt5a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1)表达。结果AML组lncRNA RBM5-AS1表达高于AML-CR组和贫血组(P<0.05),AML-CR组与贫血组lncRAN RBM5-AS1表达差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,lncRNA RBM5-AS1诊断AML的曲线下面积为0.853,敏感性为87.50%,特异性为84.40%。根据AML患者lncRNA RBM5-AS1水平的平均值分为高表达组(37例)和低表达组(35例),2个组法美英合作组(FAB)分型、骨髓原始细胞比例、白细胞计数差异均有统计学意义(P<0.05)。lncRNARBM5-AS1高表达组3年累计生存率显著低于低表达组(P<0.05)。多因素分析结果显示,FAB分型M4和M5型、lncRNA RBM5-AS高表达是影响AML患者预后的危险因素(P<0.05)。干扰lncRNA RBM5-AS1表达后,HL-60细胞的增殖、侵袭、迁移能力和Wnt5a、β-catenin、c-Myc、CyclinD1蛋白表达均被抑制(P<0.05)。结论AML患者骨髓中lncRNA RBM5-AS1水平呈高表达,可能通过调控Wnt/β-catenin通路影响细胞的增殖、迁移和侵袭,在AML诊断和预后评估中有一定的作用。

HSPA1A受HOTAIR/miR-590-3p轴调控促进I/R诱导的心肌梗死大鼠体内NF-κB介导的炎症反应

目的:探讨热休克70 kDa蛋白1A(HSPA1A)受长链非编码RNA(lncRNA)高温转录物反义RNA(HOTAIR)/微小RNA(miR)-590-3p轴的调控,对心肌缺血/再灌注(I/R)诱导的急性心肌梗死大鼠模型的调控作用。方法:建立大鼠心肌I/R损伤模型,将SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组、I/R组、I/R联合siRNA沉默的HSPA1A组(I/R+si-HSPA1A组)、I/R联合siRNA沉默的HOTAIR组(I/R+si-HOTAIR组)、I/R联合si-HSPA1A的阴性对照组(I/R+si-NC组)、I/R联合siRNA沉默的HOTAIR的阴性对照组(I/R+si-NC2组)。建立H9C2细胞缺氧/复氧(H/R)模型,将H9C2细胞随机分为Ctrl组、H/R组、H/R联合si-HOTAIR组(H/R+si-HOTAIR组)、H/R联合si-HOTAIR和过表达HSPA1A组(I/R+si-HOTAIR+pc-HSPA1A组)4组。将常规培养的H9C2细胞分为miR-590-3p的拟似物组(mimic组)、mimic阴性对照组(mimic-NC组)、si-NC2组和si-HOTAIR组4组。用苏木素-伊红(HE)染色进行心肌组织病理学检查。用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测心肌组织中肌酸激酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)的表达以及血清中白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测H9C2细胞的活力。用Western blot分析HSPA1A、核因子-κB(NF-κB)P65、磷酸化的NF-κB P65(p-NF-κB P65)、IL-6、IL-1β、TNF-α的表达。用实时定量PCR(RT-qPCR)法分析HOTAIR和miR-590-3p的表达。利用双荧光素酶报告实验检测miR-590-3p与HSPA1A的3′非翻译区(UTR)以及HOTAIR与miR-590-3p的结合作用。结果:与假手术组比,I/R诱导后明显增加了心肌组织损伤和炎症(均P<0.05)。与I/R+si-NC组比,I/R+si-HSPA1A组的HSPA1A、NF-κB P65、p-NF-κB P65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达水平都下调(均P<0.05),缓解了心肌损伤和炎症反应。与假手术组比,I/R诱导后明显增加了HOTAIR表达并下调了miR-590-3p的表达(均P<0.05)。与I/R+si-NC2组比,I/R+si-HOTAIR组的HSPA1A、NF-κB P65、p-NF-κB P65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达水平都下调(均P<0.05),miR-590-3p的表达水平上调(P<0.05),缓解了心肌损伤和炎症反应。与H/R组比,H/R+si-HOTAIR组上调了H/R诱导下的H9C2细胞的增殖率(P<0.05),而H/R+si-HOTAIR+pc-HSPA1A组的细胞增殖率明显低于H/R+si-HOTAIR组(P<0.05)。与H/R组比,H/R+si-HOTAIR组H/R诱导的H9C2细胞中HOTAIR、HSPA1A、IL-1β、IL-6和TNF-α的表达显著降低(均P<0.05),而H/R+si-HOTAIR+pc-HSPA1A组IL-1β、IL-6和TNF-α的表达则显著增加(均P<0.05)。双荧光素酶报告实验检测发现HSPA1A的3′-UTR可直接结合miR-590-3p(P<0.05),且在H9C2细胞中,与mimic-NC组比,mimic组中的HSPA1A蛋白表达明显下调(P<0.05)。另外,HOTAIR也可直接结合miR-590-3p(P<0.05)。在H9C2细胞中,与si-NC2组相比,si-HOTAIR组的miR-590-3p表达水平上调(P<0.05)。结论:HSPA1A受HOTAIR/miR-590-3p轴调控促进I/R诱导的心肌梗死大鼠体内NF-κB介导的炎症反应。

MBNL1-AS1通过微小RNA-574-5p/QKI轴对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA盲肌样蛋白1反义RNA 1(MBNL1-AS1)在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的生物学作用及其机制。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测宫颈癌细胞中MBNL1-AS1和微小RNA-574-5p(miR-574-5p)的水平。将HeLa细胞分为对照组(转染pcDNA3.1空载体)、MBNL1-AS1过表达组(转染MBNL1-AS1过表达载体pcDNA3.1-MBNL1-AS1)、miR-574-5p过表达组(转染pcDNA3.1-MBNL1-AS1和miR-574-5p模拟物mimics)和QKI干扰组(转染pcDNA3.1-MBNL1-AS1和QKI干扰质粒si-QKI)。通过MTT、划痕实验和Transwell小室实验检测MBNL1-AS1、miR-574-5p和QKI对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响,荧光素酶报告法鉴定MBNL1-AS1/miR-574-5p/QKI间的相互作用关系。结果与正常宫颈上皮细胞相比,宫颈癌细胞的MBNL1-AS1水平降低,而miR-574-5p水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。MBNL1-AS1过表达组HeLa细胞的增殖活力较对照组的1.518±0.092降低至0.932±0.104,划痕愈合率较对照组的(87.532±3.697)%降低至(24.680±4.180)%及穿膜细胞数较对照组的(262.734±12.706)个减少至(77.914±4.503)个,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-574-5p过表达组和QKI干扰组的增殖活力为1.466±0.061和1.359±0.068,划痕愈合率为(79.054±2.447)%和(83.825±5.689)%及穿膜细胞数为(252.802±23.896)和(244.139±21.023)个,均高于MBNL1-AS1过表达组(P<0.05),且与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。生物信息学预测和荧光素酶报告实验表明miR-574-5p能够靶向结合QKI的3′端非翻译区且MBNL1-AS1是miR-574-5p的潜在靶点。HeLa细胞转染miR-574-5p inhibitor后的QKI mRNA和蛋白水平较转染miR-NC的升高(P<0.05),转染pcDNA3.1-MBNL1-AS1后的miR-574-5p水平较转染pcDNA3.1的降低(P<0.05)。结论宫颈癌细胞中MBNL1-AS1低表达,且过表达MBNL1-AS1能够通过靶向miR-574-5p/QKI轴来抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭,在宫颈癌中发挥抑癌作用。