反义Toll样受体4表达质粒对内毒素刺激小鼠巨噬细胞的影响

目的 研究反义Toll样受体 4 (TLR4 )表达质粒对体外内毒素刺激小鼠巨噬细胞的作用。方法 反义TLR4表达质粒的构建 ,及转染入巨噬细胞株RAW 2 6 4 .7。在不同时间用不同浓度的内毒素刺激转染细胞及对照组细胞。用半定量RT PCR技术检测TLR4mRNA的变化 ,ELISA方法检测TNF α水平的变化。结果 转染细胞的TLR4mRNA水平低于对照组细胞。在体外用不同浓度内毒素及不同时间刺激的两组细胞TNF α水平低于对照组细胞。结论 反义TLR4表达质粒能够下调体外细胞TLR4mRNA的表达 ,降低细胞因子TNF

中药复方干预TLR4/NF-κB相关通路治疗溃疡性结肠炎的研究进展

Toll样受体(TLRs)是一种可以特异性识别病原微生物中的病原相关分子模式(pathogen-associatedmolecular patterns,PAMPs)的受体,是近年来发现的一种模式识别受体,目前在人体中共发现11种,可以识别外源性微生物和内源性有害物质,并通过抗原抗体反应,清除微生物或有害物质^([1])。正常情况下,当TLRs被激活后,通过相关信号通路,调控下游蛋白的表达,介导相应的免疫应答,抵抗或清除病原体,保护脏器组织^([2]);但当免疫应答反应过于强烈时,下游蛋白释放的促炎因子会持续性释放炎性因子,造成各种慢性炎症性损伤,这种损伤广泛存在于各脏腑组织,溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的发病与这种正向调控的免疫反应密切相关^([3-4])。

益心化浊方对急性心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌TLR4/Treg信号通路的影响

目的:探讨益心化浊方对急性心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌TLR4/Treg信号通路的影响。方法:采用左冠状动脉结扎术制备心肌梗死后心力衰竭大鼠模型,观察假手术组、模型组及益心化浊方低、中、高剂量组动物心脏彩超指数、心肌组织病理变化;应用免疫组织化学技术和免疫印迹法检测TLR4、Myd88、Trif、NF-κB、Foxp3在各组心肌的表达程度,ELISA法检测外周循环血中TNF-α和TGF-β1含量。结果:与模型组比较,益心化浊方低、高剂量组左室射血分数值和左室短轴缩短率显著增高(P<0.01,P<0.05),益心化浊方改善模型动物心肌纤维化程度;益心化浊方低、中剂量组NF-κB、Trif及MyD88表达水平及TNF-α含量显著下调(P<0.05,P<0.01);益心化浊方中、高剂量组TLR4表达水平显著下调(P<0.05,P<0.01);而Foxp3表达量显著增高(P<0.05)。结论:益心化浊方可以有效抑制心力衰竭时心肌过度免疫反应、缓解炎症,其作用与该方调控心肌TLR4/Treg信号通路密切相关。

TLR3／NF-κB信号通路在百草枯致急性肺损伤的研究

目的观察Toll样受体3（Toll-1ikereceptor-3，TLR3）、TLR诱导核转录因子（nuclearfactor-κ appaB，NF-κB）及下游炎性因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β、白细胞介素-6（IL-6）的改变，从TLR3／NF-κB信号通路探讨百草枯（paraquat，PQ）致急性肺损伤的发病机制。方法利用PQ暴露构建小鼠的急性肺损伤模型和拟Ⅱ型肺泡上皮细胞（A549）的急性损伤模型；观察小鼠肺组织病理改变，进行支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞计数及细胞分类，酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测炎性因子，阐述PQ对小鼠肺组织的损伤作用；利用CCK8检测细胞存活率，观察PQ致A549细胞损伤；并通过Real-timePCR和Westem-blotting观察小鼠肺组织和A549细胞的TLR3、Phospho-NF-κB p65及下游炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA和蛋白水平表达变化。结果与对照组小鼠相比，PQ组存在小鼠呼吸困难，活动能力下降，进食减少，体质量下降等症状。与对照组比较，PQ组BALF细胞总数明显升高[NS：（0．0188±0．1021）×10-5 vs．PQ：（0．2374±0．1217）×10-5，t=9．804，P〈0．01]，伴有巨噬细胞[NS：（0．1628±0．08653）×10-5 vs．PQ：（1．0633±0．3433）×10-5，t=8．043，P〈0．01]，淋巴细胞[NS：（0．0066±0．0052）×10-5 vs．PQ：（0．1712±0．0991）×10-5，t=5．243，P〈O．01]和中性粒细胞[NS：（0．00004±0．0001）×10-5 vs．PQ：（0．9019±0．6525）×10-5，t=4．370，P〈0．01]显著升高。PQ组小鼠肺组织充血水肿明显，病理HE染色见炎性细胞浸润和肺间质充血。ELISA结果表明，与对照组相比，PQ组支气管肺泡灌洗液的TNF-α、IL-1β、IL-6表达均明显上升[TNF-α：t=3．030，P〈0．05，NS：（2．7821±3．5215） vs．PQ：（7．5126±3．4598）pg／mL；IL-1β：t=5．391，P〈0．01，NS：（22．6875±14．2293） vs．PQ：（163．1004±81．1183）pg／mL；IL-6：t=4．841，P〈0．01，NS：（1．6533±0．4427） vs．PQ：（648．5656±422．6061）pg／mL]。细胞实验中，CCK8结果示在剂量200~400μmol／L PQ处理24h后，A549细胞存活率与对照组相比较分别下降了25．3％和36．4％（均P〈0．05）.Real-timePCR结果提示，PQ组小鼠肺组织和A549细胞TLR3、TNF-α、IL-1β、IL-6在mRNA水平表达均高于对照组（均P〈0．05）.Westem-blotting结果发现PQ组的小鼠肺组织和A549细胞的TLR3、Phospho-NF-κBp65蛋白水平表达明显高于对照组（均P〈0．05）。结论PQ可能通过TLR3／NF-κB信号通路上调炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达而诱导加重急性肺损伤。