应用蛋白质组学技术研究反义Cyclin B1的抗肿瘤作用机制

背景与目的:先前研究发现采用反义技术下调cyclin B1基因表达水平,可产生抗肿瘤的作用,但其抗肿瘤机制有待进一步研究。本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法来探讨反义cyclin B1抗肿瘤作用的分子机制。方法:首先用含有小鼠cyclin B1反义全长cDNA的重组质粒转染小鼠CT26结肠癌细胞,经双向凝胶电泳(2-DE)分离转染组和未转染组的总蛋白,再用PDQuest图像分析识别2-DE胶图像,然后对差异表达的蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF-MS)质谱分析,再经Mascot软件搜索数据库鉴定这些差异蛋白。最后根据被鉴定肽段的可信度,从这些蛋白质中选出肽段可信度最高的2个,用Western blot对其丰度差异进行了验证。结果:初步鉴定出7个差异表达蛋白,其中Axin2、CCTθ、DR5和HPCM27蛋白质在实验组上调,RFP17、mKIAA1195及LOC77035蛋白在实验组下调,而可信度最高的Axin2和DR5的蛋白质表达丰度差异为Western blot所证实。结论:多种蛋白质在反义cyclin B1后表达有明显差异,这些差异蛋白质参与细胞的增殖、分化、迁移、凋亡及转录调控等多条信号通路,提示反义cyclin B1的抗肿瘤机制可能与上述蛋白质的作用有关。