叶酸靶向anti-miR-221阴离子脂质体的制备及体外抗肿瘤作用

目的基于阴离子脂质体制备一种叶酸靶向miR-221反义寡核苷酸(anti-miR-221)递送系统,并初步评价其体外抗肝癌效果。方法采用薄膜分散水化法制备叶酸靶向anti-miR-221脂质体(FRL),测定其粒径、Zeta电位和包封率。以钙黄绿素为模型药物,通过体外细胞摄取实验观察所制叶酸靶向阴离子脂质体在人肝癌HepG_(2)细胞中的靶向递送效果。利用流式细胞术检测FRL对HepG_(2)细胞凋亡和周期的影响。结果所制FRL的粒径为(172.70±3.76)nm,Zeta电位为(-1.16±0.15)mV,包封率为(83.53±1.85)%。体外细胞摄取实验结果显示,叶酸靶向阴离子脂质体成功将模型药物钙黄绿素递送至HepG2细胞中,且递送效率高于普通非靶向脂质体(P<0.01)。细胞凋亡检测结果显示,FRL作用后细胞的凋亡率显著高于普通非靶向脂质体作用后的细胞(P<0.01)。细胞周期检测结果显示,FRL可使细胞的S期缩短,并将细胞阻滞于G_(0)/G_(1)、G_(2)/M期。结论FRL可以较好地包封anti-miR-221,并成功将其递送至肝癌HepG_(2)细胞中,而且在诱导细胞凋亡和细胞周期调控方面呈现出良好的体外抗肝癌效果。

Anti-microRNA-221通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射增敏性

目的探讨下调microRNA-221(miR-22 1)表达对人结直肠癌细胞的放射敏感性的影响及其分子机制。方法常规培养人结直肠癌Caco2细胞系,以脂质体转染反义miR-221(anti-miR-221)后,应用实时荧光定量PCR(Real-time Q-PCR)检测Caco2细胞中miR-221和PTEN mRNA表达水平,应用Western-blot分析肿瘤细胞中PTEN蛋白表达变化;不同处理组的肿瘤细胞经照射后,流式细胞仪检测各处理组细胞的死亡情况。结果 Real-time Q-PCR显示转染anti-miR-221后miR-221的表达水平明显下调(P<0.05),同时PTEN蛋白表达增高(P<0.05);流式细胞仪检测可见anti-miR-221转染组及anti-miR-221转染联合照射组死亡细胞比例均明显增多(P均<0.01),转染anti-miR-221可明显提高Cac02细胞的放射敏感性,且此效应能被PTEN-siRNA部分但不完全阻断。结论 Anti-miR-221可通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射敏感性。