反义Survivin核酸对荷瘤裸鼠放疗敏感性影响的初步研究

目的探讨反义Survivin核酸(anti-pcDNA3-svv)对荷瘤裸鼠放疗敏感性的影响。方法采用电转染法转染胃癌细胞系SGC7901,观察转染组(SGC7901-SVVanti)和未转染组(SGC7901)在体内(裸鼠)和体外(细胞水平)对放射线敏感性的不同;采用免疫组化SP法对比转染组和未转染组裸鼠肿瘤中Survivin蛋白表达的不同。结果SGC7901-SVVanti组细胞随着照射剂量的升高,细胞存活率明显低于SGC7901组,其IC50分别为(718.7±1.6)cGY和(1654.1±1.2)cGY,差异具有统计学意义(P<0.05);相同剂量的X线照射裸鼠后,SGC7901-SVVanti组裸鼠的肿瘤缩减率明显高于SGC7901组裸鼠,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Survivin反义核酸可以在体内、外水平增加荷胃癌细胞裸鼠对放射线的敏感性;抑制Survivin蛋白在裸鼠肿瘤中的表达。

反义Survivin核酸诱导凋亡及逆转胃癌耐药机制的实验研究

目的:探讨反义Survivin核酸(anti-pcDNA3-svv)对胃癌细胞系SGC7901的凋亡诱导、对泰索帝的化疗增敏作用及对化疗耐药的逆转作用.方法:采用脂质体转染法转染胃癌细胞系SGC7901,并筛选阳性克隆,以Westernblot检测Survivin蛋白的表达,RT-PCR检测MDR-1mRNA的表达,用透射电镜及TUNEL法观察并检测转染后SGC7901的凋亡变化,采用MTT法检测转染细胞对泰索帝的敏感性.结果:转染anti-pcDNA3-svv的SGC7901细胞系(SGC7901-SVVanti)其Survivin蛋白比未转染者明显降低,仅为其29.9%(P<0.01);透射电镜下可见转染组细胞呈凋亡晚期变化,TUNEL显示转染组与未转染组AI分别为0.241和0.083(P<0.01);转染组MDR-1mRNA较未转染组明显降低,转染组与未转染组MDR指数分别为:0.196±0.013和3.126±0.019(P<0.01);转染组对泰索帝的IC50值为16.7±1.98μg/L,而未转染组为55.7±1.89μg/L,差异具有显著的统计学意义(P<0.01).结论:反义Survivin核酸可诱导SGC7901细胞凋亡,增强泰索帝化疗敏感性,逆转耐药.

术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4以及长链非编码核糖核酸SBF2反义RNA1与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤的关系

目的探讨术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4(VSIG4)以及长链非编码核糖核酸(LncRNA)SBF2反义RNA1(SBF2-AS1)与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤(AKI)的关系。方法选择2020年1月—2022年12月本院收治的109例肾结石患者为研究对象。术前检测患者血清VSIG4水平以及LncRNA SBF2-AS1表达,术后记录AKI发生情况。采用多因素Logistic回归模型分析肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析VSIG4、LncRNA SBF2-AS1预测肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的价值。结果本研究中,术后发生AKI者16例。AKI组血清VSIG4水平低于非AKI组,LncRNA SBF2-AS1表达高于非AKI组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,术前高尿酸水平、术前高LncRNA SBF2-AS1表达、较长的手术时间、术中低血压是肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的危险因素(P<0.05),术前高VSIG4水平是保护因素(P<0.05)。术前血清VSIG4、LncRNA SBF2-AS1水平预测肾结石患者经皮肾镜术后发生AKI的曲线下面积分别为0.854、0.705,二者联合预测的曲线下面积为0.948,大于各指标单独预测(Z=1.995、2.958,P<0.05)。结论肾结石患者术前血清VSIG4水平降低、LncRNA SBF2-AS1表达增高与经皮肾镜取石术后AKI的发生有关,联合检测术前VSIG4、LncRNA SBF2-AS1可预测术后AKI的发生风险。

反义survivin核酸增强胃癌细胞对多西他赛敏感性及其逆转耐药机制的探讨

目的探讨反义survivin核酸（anti-pcDNA3-svv）对胃癌细胞系SGC7901的凋亡诱导和化疗增敏作用，及其与多药耐药基因（mdr-1）的相关性。方法采用电转染法转染胃癌细胞系SGC7901，并筛选阳性克隆。以Westernblot法检测survivin蛋白的表达，用透射电镜观察转染后对SGC7901的凋亡诱导作用，RT-PCR检测mdr-1mRNA的表达，MTT法检测转染细胞对多西他赛的敏感性。诱导SGC7901细胞耐药，检测耐药mdr-1和survivin的表达。结果转染anti-pcDNA3-svv的SGC7901细胞中，survivin蛋白表达较未转染组明显降低；透射电镜下，转染组细胞呈凋亡晚期变化；转染组的mdr-1 mRNA较未转染组明显降低，转染组与未转染组的MDR指数分别为0．196±0．013和3．126±0．019；转染组多西他赛的IC50值为（16．7±1．98）μg/L，而未转染组为（55．7±1．89）μg／L，差异有统计学意义。耐药SGC7901细胞的survivin mRNA表达随着mdr-1 mRNA表达增加而明显增强。结论反义survivin核酸可诱导SGC7901细胞凋亡，增强多西他赛化疗敏感性，其逆转耐药的机制与mdr-1低表达有关。

Survivin反义核酸诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡及对docetaxel的增敏作用

背景与目的:Survivin在大多数肿瘤组织中特异性高表达,并与肿瘤细胞的凋亡和耐药密切相关。本研究探讨Survivin反义真核表达载体(anti-pcDNA3-svv)对卵巢癌细胞SKOV3凋亡的诱导作用及对docetaxel的增敏作用。方法:采用Survivin反义核酸瞬时电转染法转染SKOV3细胞,筛选出阳性细胞株。以RT-PCR检测survivinmRNA的表达,Westernblot检测Survivin蛋白的表达。用流式细胞仪和透射电镜观察Survivin反义核酸对SKOV3细胞凋亡的诱导作用,MTT法检测其对docetaxel的增敏作用。结果:稳定表达anti-pcDNA3-svv的SKOV3细胞survivinmRNA及Survivin蛋白均比未转染者明显降低,透射电镜下可见稳定转染组细胞呈凋亡晚期变化,流式细胞仪显示其凋亡率为19%,docetaxel对实验组细胞的IC50值为(13.3±2.2)ng/ml,而对照组为(53.2±2.4)ng/ml,差异具有显著性(P<0.05)。结论:Survivin反义核酸可诱导SKOV3细胞凋亡,增强SKOV3细胞对docetaxel的敏感性。

survivin反义核酸抑制胶质瘤细胞增殖的实验研究

目的探讨survivin反义核酸对胶质瘤细胞增殖的影响。方法用脂质体介导法将survivin反义核酸真核表达载体pIRES2-EGFP-SVVas转染入人胶质瘤SHG-44细胞系中,G418筛选阳性克隆后,用Immunoblot检测survivin蛋白表达,光、电镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果pIRES2-EGFP-SVVas质粒转染SHG-44胶质瘤细胞后细胞survivin蛋白表达水平降低,而细胞由卵圆形变为长梭形,细胞突起明显增多、增长,细胞增殖活性明显降低,细胞生长受到抑制。结论survivin反义核酸能通过抑制SHG-44细胞survivin蛋白表达,抑制该细胞增殖。

Survivin反义核酸对SKOV3细胞生长及Survivin基因表达的影响

目的 :观察Survivin反义核酸对人卵巢癌细胞系SKOV3的生长及Survivin基因表达的影响。方法 :应用基因重组技术 ,将在真核细胞中能稳定表达反义Survivin的pcDNA3 SVVas经脂质体LipofectamineTM2 0 0 0 介导转染人卵巢癌细胞株SKOV3,经G4 1 8筛选得到抗性克隆 (SKOV3/SVVas) ,同时以空载体pcDNA3转染SKOV3作为对照(SKOV3/neo) ;绘制细胞生长曲线 ;采用免疫组化、RT PCR和流式细胞仪检测SKOV3、SKOV3/neo及SKOV3/SVVas细胞的内源性SurvivinmRNA及蛋白的表达和凋亡细胞。结果 :与SKOV3及SKOV3/neo细胞比较 ,SKOV3/SVVas细胞增殖和代谢能力均明显降低 ,Survivin蛋白阳性表达率及mRNA相对表达量明显降低 (P <0 .0 1 ) ,细胞凋亡率显著增加 (P <0 .0 1 )。结论 :稳定表达的反义Survivin能够有效抑制SKOV3细胞内源性Survivin蛋白的表达 ,诱导SKOV3细胞凋亡。

Survivin反义核酸诱导卵巢癌细胞凋亡及逆转多西他赛耐药机制的实验研究

目的构建Survivin反义真核表达载体(anti-pcD-NA3-svv),探讨其对卵巢癌的凋亡诱导作用、对多西他赛的化疗增敏作用及逆转耐药的机制.方法采用Survivin反义核酸瞬时电转染法转染卵巢癌细胞系Skov3,筛选出阳性细胞株.以Westernblot检测Survivin蛋白的表达,用流式细胞仪检测其对Skov3的凋亡诱导作用,采用MTT法检测其对多西他赛的化疗增敏作用,并检测实验组细胞(Skov3-SVVanti)MDR-1mRNA的表达.结果稳定表达anti-pcDNA3-svv的Skov3-SV-Vanti其Survivin蛋白表达比未转染者明显降低,Skov3-SV-Vanti组细胞流式细胞仪检测显示其凋亡率为19%,对多西他赛的IC50值为(13.3±2.25)ng/mL,而对照组(Skov3)为(53.2±2.45)ng/mL,差异具有明显的统计学意义(P<0.01).Skov3-SVVanti组MDR-1mRNA表达较Skov3组明显减少(P<0.01).结论Survivin反义核酸可诱导卵巢癌细胞凋亡,并通过降低MDR-1mRNA表达增强多西他赛化疗敏感性.

Survivin反义核酸与顺铂联合作用诱导人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨特异性封闭Survivin的表达与顺铂联合作用对卵巢癌细胞的凋亡诱导作用,以期为卵巢癌的治疗提供实验依据。方法将已成功构建的Survivin反义核酸真核表达载体的重组体导入人卵巢癌细胞株中,用G418筛选得到表达反义Survivin的细胞,RT-PCR技术检测转染细胞Survivin表达的变化;采用Hoechest核染色分析与顺铂联合作用时人卵巢癌细胞的凋亡情况。结果构建的Survivin反义RNA真核表达载体能有效的抑制卵巢癌细胞中Survivin基因的表达;顺铂诱导转染Survivin反义核酸的卵巢癌细胞的凋亡作用显著强于未转染Survivin反义核酸的卵巢癌细胞株。结论Survivin反义核酸可明显增强顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡,为其联合应用卵巢癌治疗研究提供了实验依据。

Survivin反义核酸影响A549肺癌细胞增殖和凋亡的研究

目的研究Survivin反义寡核苷酸对A549细胞增殖和凋亡的影响。方法针对Survivin mRNA序列设计了反义寡核甘酸,转染A549细胞,PT-PCR检测细胞中survivin基因的mRNA含量;Western印迹显示Survivin蛋白水平;以MTT法检测细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡。结果Survivin反义寡核苷酸可明显降低A549细胞中survivin的mRNA和蛋白水平。MTF比色法结果说明人Survivin反义寡核苷酸抑制A549细胞增殖,抑制率远高于无义寡核苷酸组和空白对照组。TUNEL法检测结果显示,反义寡核苷酸还显著增强A549细胞对抗肿瘤药高三尖杉酯碱的敏感性,在较低高三尖杉酯碱浓度下,反义寡核苷酸转染细胞的凋亡率明显高于其它对照组。结论sur- vivin反义寡核苷酸有望应用于肿瘤的辅助治疗之中。

Survivin与bcl-2基因反义寡核酸联合对人乳腺癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用

目的本研究旨在探讨survivin与bcl-2基因反义寡脱氧核苷酸联合对人乳腺癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用。方法在BALB/c裸鼠上建立MCF-7乳腺癌细胞株模型,然后随机分成阴性对照组和5个实验组[分别为脂质体survivin正义脱氧寡核苷酸(SODN)组、脂质体bcl-2SODN组、脂质体survivin反义寡脱氧核苷酸(ASODN)组、脂质体bcl-2ASODN组、联合反义给药组]。检测裸鼠体重及肿瘤体积变化,计算抑瘤率及肿瘤缩小率。结果给药后,联合反义给药组的肿瘤体积抑瘤率为78.4%,肿瘤重量抑瘤率为75.3%,肿瘤缩小率为41.6%。在给药后,各组裸鼠体重变化无明显统计学差异(P>0.05)。结论survivin与bcl-2基因反义寡核酸联合在体内能明显抑制肿瘤生长。

Survivin基因的克隆及其反义核酸对人喉癌细胞系的作用

目的:克隆survivin基因并鉴定,初步探讨survivin基因反义核酸(AS-ODN)对人喉癌细胞系的生长抑制作用。方法:从培养的人喉癌Hep-2细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得survivin基因;将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,进行测序鉴定。以高表达survivin基因的人喉癌细胞系Hep-2为靶细胞、survivin基因AS-ODN为阻断剂,通过MTT试验观察AS-ODN对喉癌细胞的生长抑制作用,RT-PCR分析survivin基因AS-ODN对survivin基因表达的影响。结果:DNA测序结果证明,获得了survivin基因,其序列与GenBank中报道序列完全一致;MTT试验及RT-PCR分析表明,Hep-2在AS-ODN作用下,细胞数量明显减少,survivin基因AS-ODN明显抑制了喉癌细胞Hep-2的生长及其survivin基因的表达(P<0.05)。结论:Survivin基因的克隆获得了成功,为进一步探讨survivin基因在喉癌及其他恶性肿瘤诊断和治疗中的应用奠定了基础。Survivin基因AS-ODN对人喉癌细胞的生长可能起十分重要的抑制作用,有望成为喉癌基因治疗的新靶点。

Survivin反义核酸对乳腺癌细胞增殖的影响

目的:探讨Survivin反义核酸对乳腺癌细胞增殖的影响.方法:本实验分6组,分别以脂质体介导反义寡核苷酸、无义寡核苷酸及RPMI 1640培养液作为空白的对照组,转染人乳腺癌MCF-7细胞系,采用Real time RT-PCR,Western blot方法检测各组MCF-7细胞Survivin蛋白及mRNA的表达情况,测定转染后细胞贴壁率变化,研究Survivin反义寡核苷酸对MCF-7细胞的生长抑制作用.结果:脂质体介导Sur-vivin反义寡核苷酸转染人乳腺癌MCF-7细胞后,细胞内Survivin蛋白及mRNA表达显著降低,通过Realtime RT-PCR检测MCF-7细胞经作用后其Survivin mRNA起始拷贝数明显下降;同时细胞贴壁率降低达32.96%,细胞生长抑制率最高达73.62%,ASOND/LiP组与NODN/LiP组和LiP组差异有显著性(P<0.05).结论:脂质体介导转染的反义寡核苷酸可在Survivin蛋白及mRNA水平有效地降低乳腺癌MCF-7细胞内Survivin的表达,并能够有效抑制乳腺癌细胞的增殖活性,提示Survivin靶向治疗可能成为乳腺癌综合治疗的一种重要方法.

Survivin反义核酸对大肠癌HT-29细胞侵袭力的影响

目的观察反义Survivin寡核苷酸对人大肠癌HT-29细胞侵袭力的影响。方法应用针对Survivin模板序列的反义寡核苷酸链处理大肠癌HT-29细胞,观察细胞培养生长增殖状况,半定量RT-PCR检测不同组别Survivin基因表达的水平,应用Transwell小室检测体外侵袭力变化。结果反义组细胞数量少,生长稀疏,细胞贴壁缓慢;大肠癌细胞的集落形成能力受到抑制,经过RT-PCR扩增后半定量分析结果显示,反义核酸治疗组的表达量低于对照组和正义组。侵过小室滤膜细胞数减小。结论Survivin反义寡核苷酸作用后的大肠癌HT-29细胞株生长受到抑制,细胞株侵袭力降低。

Survivin反义核酸诱导肝癌细胞凋亡及降低化疗药物耐药的研究

目的构建Survivin反义核酸真核表达载体(anti-pcDNA3-svv),探讨其对肝癌细胞的凋亡诱导作用及降低化疗耐药的机制。方法采用Survivin反义核酸瞬时电转染法转染肝癌细胞系Skov3,筛选出阳性细胞株。以Western-blot检测生存素蛋白的表达,用流式细胞仪检测其对Skov3的凋亡诱导作用,并检测实验组细胞(Skov3-SVVanti)MDR-1mRNA的表达。结果稳定表达an-ti-pcDNA3-svv的Skov3-SVVanti其生存素蛋白表达比未转染者明显降低,Skov3-SVVanti组细胞流式细胞仪检测显示其凋亡率为19%。Skov3-SVVanti组MDR-1mRNA表达较Skov3组明显减少(P<0.01)。结论 Survivin反义核酸可诱导肝癌细胞凋亡,并通过降低MDR-1mRNA表达,降低化疗药物耐药性。

Survivin反义核酸对拓扑替康诱导SKOV3细胞凋亡的影响

目的 :探讨Survivin反义核酸对拓扑替康 (TPT)诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的影响。方法 :在光镜下观察Survivin反义核酸与TPT联合应用后SKOV3凋亡的形态学改变 ,通过DNA电泳检测SKOV3细胞凋亡的情况 ;应用MTT法检测SKOV3细胞对TPT的敏感性。结果 :Survivin反义核酸可明显促进TPT诱导的SKOV3凋亡 ,呈现出特征性的DNA梯状带 ;TPT对SKOV3、SKOV3/neo、SKOV3/SVVas细胞的IC50 值分别为 (1 6 0 .0 0± 6 .36 ) μg/L、(1 5 8.0 0±6 .32 ) μg/L、(4 2 .0 0± 2 .31 ) μg/L ,其差异具有统计学意义 (P <0 .0 1 )。 结论 :Survivin反义核酸可明显促进TPT诱导的卵巢癌细胞SKOV3凋亡 。

Survivin反义核酸真核表达载体的构建及在胶质瘤细胞中的表达

目的 构建survivin反义核酸真核表达载体pIRES2 EGFP SVVas ,并检测其在恶性胶质瘤细胞SHG 44中的表达。方法 构建survivin反义核酸真核表达载体pIRES2 EGFP SVVas ,并用脂质体介导转染入SHG 44细胞 ,通过RT PCR及westernblot检测细胞中survivinmRNA和蛋白的表达。结果 构建了survivin反义核酸真核表达载体pIRES2 EGFP SVVas ,并成功导入SHG 44细胞中 ,且有效表达 ,使SHG 44细胞中survivinmRNA和蛋白表达水平均降低。结论 Survivin反义核酸真核表达载体pIRES2 EGFP SVVas可以降低SHG 44细胞survivin基因的表达。

Survivin反义核酸结合位点的体外筛选及鉴定

合成 2 0mer随机寡核苷酸文库 ,与体外转录出的全长survivincRNA杂交 ,RNaseH酶切割后 ,经引物延伸、放射自显影 ,共筛选出 13个针对survivin基因的反义结合位点 (antisenseaccessiblesites ,AAS) .运用RNADraw软件分析、选定具有显著茎环结构的 4个位点 ,合成互补性反义寡核苷酸AS ODN1、AS ODN2 、AS ODN3 、AS ODN4并转染高表达survivin基因的胃癌细胞株MKN 4 5 .逆转录聚合酶链反应和Western印迹检测发现MKN 4 5细胞的survivinmRNA和蛋白水平均有显著的下降 ;MTT比色法证实 6 0 0nmol LAS ODN1～AS ODN4转染 2 4h后细胞生长受到明显抑制 ,透射电镜、annexinⅤ FITC和PI双染色流式细胞术均检测到细胞凋亡 .说明运用随机寡核苷酸文库 RNaseH酶切割与计算机分析相结合的方法 ,在体外有效筛选出survivin的反义核酸结合位点 ,其相应的反义寡核苷酸能阻断survivin基因的生物学功能 .

survivin反义核酸增强PANC-1细胞对5-Fu敏感性的研究

目的研究survivin反义核酸诱导胰腺癌细胞株PANC1的凋亡和增强对5Fu敏感性的影响。方法我们应用构建的survivin反义核酸真核表达载体电转染PANC1细胞,RTPCR检测survivinmRNA表达,细胞计数和MTT实验测定转染后细胞对5Fu敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果survivin反义核酸可抑制PANC1细胞中survivinmRNA的表达,并能抑制PANC1细胞生长,提高PANC1对5Fu敏感性,流式细胞仪检测凋亡率明显增加。结论survivin反义核酸能增强5Fu诱导的PANC1细胞凋亡,联合survivin反义核酸和5Fu可以改善胰腺癌的治疗效果。

Survivin 反义核酸联合紫杉醇对皮下荷瘤Balb/c 小鼠模型的治疗作用

目的研究survivin反义核酸与紫杉醇联合应用对皮下荷瘤Bal b/c小鼠模型的治疗作用,并初步探讨对其抗癌作用的机制。方法在Bal b/c小鼠皮下注射C26细胞,建立皮下瘤模型,采用瘤内注射的方式,将实验分空白组(C)、lipo2000对照组(L)、紫杉醇组(T)、survivin反义核酸组(A)、survivin反义核酸联合紫杉醇组(A+T)5个不同组,观察肿瘤的生长状态,TUNEL法检测凋亡细胞,Western blot法检测survivin蛋白表达。结果 1各治疗组均达到了(T/C)<60%,与L组比较差异有统计学意义(P<0.05),体内证实给药干预有效;小鼠瘤重的抑瘤率结果显示,与C组比较,T、A、A+T各给药组均能抑制小鼠瘤重,差异具有统计学意义(P<0.05),从抑制肿瘤质量增长方面而言,二者联合用药[瘤重抑瘤率为(54.16±0.32)%]将紫杉醇[瘤重抑瘤率为(21.82±0.84)%]的抗癌活性提高了59%以上;2TUNEL法检测凋亡细胞:空白对照组几乎没有肿瘤细胞凋亡。T组及A组有一定量的凋亡细胞,以上试验结果提示,紫杉醇具有促进肿瘤细胞凋亡的能力,A+T不仅加强了对肿瘤细胞的杀伤作用,而且二者的协同作用可能对肿瘤耐药性有所影响,最终使得其促肿瘤细胞凋亡的作用尤为显著;3survivin蛋白表达:结果显示,A+T组survivin蛋白的表达明显降低,而不影响β-actin的表达,C组和L组相比无明显变化,T组、A组、A+T组A值的比值分别为0.895±0.011、0.704±0.121、0.345±0.019,经方差分析,A+T组与C、L、A、T组的表达量差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 survivin反义核酸与紫杉醇联合用药,可能通过下调survivin蛋白的表达从而促进肿瘤细胞凋亡,联合用药可降低机体耐药性,发挥协同作用。