用反向被动血凝抑制试验进行乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的位阻分析

本文报告获得28株分泌抗HBsAg单克隆抗体的杂交瘤细胞系,均为抗HBsAg“a”决定簇抗体。产生鼠IgM抗体的有一个细胞系;IgG1 18个系;IgG 2a 1个系;IgG 2b 6个系;IgG 3两个系。采用反向被动血凝抑制法测定了其中24种McAb的交互抑制现象。24种McAb可分为10个不同的抑制群。并对这种简单易行的位阻分析方法在实用中的价值做了讨论。

鼠疫反向被动血凝试验阳性判断标准的探讨

目的 验证反向被动血凝试验 (RPHA)原判断标准 (≥ 1:10 0 )的制定准确与否。方法 分别在陕、宁、蒙、青等省 (区 )采集人和鼠疫宿主动物 (沙鼠、黄鼠、喜马拉雅旱獭 )健康脏器标本 ,对标本进行RPHA检测 ,并对检测结果进行统计学分析处理。结果 978份健康脏器标本的RPHA结果中 ,出现 32份非特异性反应 ,其反应值均在 1:10及 1:10以下。 33份阳性标本滴度在1:2 0～ 1:5 12 0之间。经统计学百分位数法求得RPHA的阈值为≈ 1:10 (P99) ,从而把≥ 1:2 0稀释度定为RPHA的阳性判断标准。结论 ≥ 1:10 0RPHA阳性判断标准定得过高 ,而以≥ 1:2

新疆出血热病毒反向被动血凝和血凝抑制试验的改进研究

本文报道采用戊二醛、丙酮醛和戊二醛-甲醛双醛化绵羊红细胞;不同株新疆出血热病毒和不同方法免疫家兔;不同方法纯化IgG和用不同方法以抗体致敏血球进行反向血凝和血凝抑制试验。结果表明采用本文报道的方法,以戊二醛处理的绵羊红细胞经鞣酸化后优于丙酮醛或戊二醛-甲醛双醛化的血球。用病毒悬液(感染鼠脑悬液)加福氏完全佐剂,经淋巴结注射免疫的方法所获免疫血清的抗体效价最高(补体结合抗体滴度达1∶1024)。用50%饱和硫酸铵沉淀一次和33%沉淀3次后,再经DEAE纤维素提取的IgG效果优于低温酒精法和SephadexG100及SephadexG200分筛提取法。鞣酸化后用这种IgG致敏的血球效果最好,冻干后在4℃下可保持原效价至少一年以上。作者讨论了本试验方法应用中需注意的各种细节问题,并推荐用反向被动血凝试验检测病毒抗原,用反向被动血凝抑制试验检测抗体具有稳定可靠,操作方便和可以直接检测各种动物标本的优点。可广泛用于临床诊断和流行病学调查研究。

新疆出血热病毒单克隆抗体的应用研究:反向被动血凝和血凝抑制试验

使用6株抗新疆出血热病毒单克隆抗体(单抗)致敏醛化绵羊红血球,以反向被动血凝试验(RPHA)检测病毒抗原;以反向血凝抑制试验(RPHI)检测人和各种动物血清抗体。结果6株单抗致敏血球在检测病毒抗原中以IgM型的14B7单抗的灵敏度最高。比其他5个单抗高16~32倍,而且与正常对照抗原完全没有非特异性凝集,远超过多克隆抗体致敏的血球。用RPHI检测血清抗体中,以13C6和43E5两个单抗的灵敏度高。测定抗体滴度的终点远高于多克隆抗体致敏的血球。RPHA可用于急性期病人血液中病毒抗原的检测,有很好的早期诊断价值,还可用于新分离病毒的血清学鉴定。RPHI可用于人和动物血清抗体的检测。已制出冻干的制剂,可保存1年以上,对于基层和现场防治调查工作非常方便。

流行性出血热反向被动血凝抑制试验诊断试剂盒应用技术

(一)概况流行性出血热(EHF)是由汉坦病毒引起的病毒性疾病,主要临床表现为发热、出血和肾功能损害。本病呈全球性流行,我国除青海和新疆外各省市都有流行。它严重地危害着广大人民群众的身体健康。目前,EHF的诊断主要依靠实验室的血清学诊断和临床诊断。血清学诊断方法有间接免疫荧光试验(IFA)、免疫酶联试验(ELISA),反向被动血凝抑制试验(RPHIA)及聚合酶链法(PCR)等。

免疫荧光试验与反向被动血凝抑制试验测定乙型脑炎抗体对比分析

目的:比较两种乙型脑炎实验室诊断方法。方法:用间接免疫荧光法和反向被动血凝抑制试验检测疑似乙型脑炎患者的血清标本,用SPSS统计软件分析两者的特异性和敏感性。结果:50份临床疑似乙型脑炎患者的血清两种方法检测结果,IgG抗体检出率均为86%,无统计学意义。IgG抗体几何平均滴度RPHI法略高于IFA,但无统计学意义。IgM抗体阳性率IFA为78%;RPHI为76%。RPHI法的几何平均滴度为31.6,IFA的几何平均滴度为30.3,几何平均滴度无统计学意义。两种方法的相关性检测,相关系数分别为0.835和0.696。结论:IFA和RPHI法用于检测乙型脑炎抗体阳性检出率和几何平均滴度差异均无统计学意义。由于RPHI法无需特殊仪器设备,操作简便易行。IFA法除需要一台较好的荧光显微镜外,其操作简便,适于病人的早期诊断。

鼠疫反向间接血凝试验与鼠疫细菌培养结果的对比分析

目的对比鼠疫反向间接血凝试验(RIHA)与鼠疫细菌培养的检菌结果,选择灵敏、简便、快速的鼠疫诊断方法。方法用鼠疫菌感染小鼠、大耳白兔、豚鼠,动物死亡后取肝、脾脏;大耳白兔死亡后,在室温(18～22℃)下自然腐败,并于第0、15、60天取脾脏;取人感染鼠疫尸体的肺脏;将上述样品同时进行RIHA和细菌培养,计算鼠疫菌阳性率,比较两种方法的检菌效果。结果动物和人被鼠疫菌感染后,鼠疫RIHA的阳性率(100％)明显高于细菌培养(87％);对腐败材料鼠疫菌的检测,RIHA诊断效果明显优越于细菌培养,尤其在菌培养阴性的情况下,仍能检查出鼠疫菌抗原(抗体滴度为1:102 400)。结论RIHA在鼠疫诊断中,具有敏感、简便和快速的特点,有助于及时确定疫源的存在和疫情的判定,在实际工作中便于应用和推广,希望早日成为鼠疫实验室诊断标准。

用反向间接血凝试验快速检测轮状病毒抗原和抗体

用兔抗牛轮状病毒(NCDV株)IgG致敏绵羊红细胞进行反向间接血凝(RIHA)试验,直接检测105份犊牛腹泻粪样中的轮状病毒,查出阳性39份,阳性检出率为37.1％,与电镜检查,核酸PAGE和ELISA相比较,符合率分别为83.3％,91.7％和98.1％。同时还建立了用反向间接血凝抑制(RIHI)试验检测人和动物血清轮状病毒抗体的方法。两法特异性好,简便快速,易于推广。

应用反向间接血凝试验检测山羊痘病毒抗原

以兔抗山羊痘病毒IgG致敏绵羊红细胞,采用反向间接血凝试验(RPHA)检测山羊痘病毒抗原.该诊断试剂与山羊痘病毒抗原发生特异性的凝集反应;在PBS中不自凝;与其它动物病病毒抗原无交叉反应.对贵州省8个疫区现场采集山羊痘待检抗原检测结果表明,该方法阳性检出率为87.5%(7/8),与琼脂扩散试验(AGP)阳性检出率为50%(4/8)相比较,RPHA敏感性比AGP高;同时对山羊痘野生强毒H-GZ株F1～F5代细胞培养物进行检测,F1代就可检出RPHA效价,而AGP则不能检测.该诊断试剂可用于兽医临床上山羊痘的快速诊断及作为病毒分离培养的检测指标.

单克隆抗体反向间接血凝试验检测日本血吸虫循环抗原

反向间接血凝试验(RIHA)是一种简单、实用的实验诊断技术,其显著特点是操作简便、快速,无需特殊仪器和试剂,现场应用的适应性高,其检测效果与标记方法相比无显著差异.目前,以单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原的反向间接血凝试验国内文献报道不多,为此,我们拟用该法对日本血吸虫循环抗原进行了检测.

脂多糖-被动血凝试验早期诊断伤寒的价值

为评估脂多糖－被动血凝试验（ＬＰＳ－ＰＨＡ）早期诊断伤寒的应用价值，对病程不同的１０２例伤寒患者用ＬＰＳ－ＰＨＡ、肥达反应和细菌培养进行检测，２００例非伤寒发热患者作为对照。结果显示：伤寒患者病程第一周ＬＰＳ－ＰＨＡ阳性率为８０％（２４／３０），第二周达９７７３％（４３／４４）；细菌培养阳性率２４５１％；肥达反应的伤寒与副伤寒鞭毛抗体交叉阳性率达３７２５％；对照组ＬＰＳ－ＰＨＡ有２％的假阳性。结果表明：ＬＰＳ－ＰＨＡ可早期、简便及快速诊断伤寒，有较高的敏感性和特异性。

被动血凝试验测定伤寒Vi抗体

作者从拘橼酸杆菌中提取纯化获得其Ｖｉ多糖抗原，该抗原具有伤寒沙门氏菌Ｖｉ抗原的免疫学特性，而不含伤寒沙门氏菌０，Ｈ抗原，用其致敏新鲜羊血球作被动血凝试验，特异性敏感性均很好。所需Ｖｉ抗原致敏浓度极低，仅为０．０５ｕｇ／ｍｌ。使用新鲜羊血球凝模式较好，便于观察结果，采用被动血凝试验检测１０６名健康中学生肌肉注射３０ｕｇ伤寒Ｖｉ多糖菌苗前后Ｖｉ抗体的变化情况，发现免疫后血清抗体的四倍增长率达８９％，表明伤寒Ｖｉ多糖苗具有良好的免疫原性。

定量产肠毒素性大肠杆菌黏附素抗原反向间接血凝试验的建立

利用黏附素单因子血清IgG致敏绵羊红细胞,建立了定量产肠毒素性大肠杆菌黏附素抗原的反向间接血凝试验。该试验所用K88、K99、987P和F41单因子血清IgG致敏红细胞的最佳浓度依次为30μg/ml、56μg/ml、28μg/ml和100μg/ml。经交叉试验、抑制试验和敏感性试验证实,该试验具有很高的特异性和敏感性,可用于生物制品中黏附素含量的定量。

应用反向间接血凝试验检测魏氏梭菌α-毒素

采用兔抗魏氏梭菌 α-毒素 Ig G致敏马红细胞建立了反向间接血凝试验 ,该诊断试剂与魏氏梭菌标准株的培养上清液发生特异的凝集反应 ;在 PB缓冲液中不自凝 ;与其他致病菌培养上清无交叉反应。对现场分离样品的检测结果表明 :该方法与其生化试验结果的符合率为 97.2 %,可用于兽医临床上魏氏梭菌病的快速诊断。

ELISA抑制法及被动血凝试验对鼠疫血清标本检测结果的比较分析

为探讨Ｉｎｈｉｂ－ＥＬＩＳＡ法推广应用的可能性，本文采用该法与ＰＨＡ法连续３年对我省各鼠疫疫区送检复判的２２２份血清标本进行了平行检测。结果显示，Ｉｎｈｉｂ－ＥＬＩＳＡ检出阳性血清１５２份，阳性检出率为６８．５％，几何平均滴度为１：４３４．５１；而ＰＨＡ法共检出阳性血清１２８份，阳性检出率为５７．７％，几何平均滴度为１：６８．６０，两者相差均具有非常显著性意义。且ＰＨＡ初判时出现４．５％的假阳性反应，而Ｉｎｈｉｂ－ＥＬＩＳＡ无一例假阳性反应。结果表明，Ｉｎｈｉｂ－ＥＬＩＳＡ比ＰＨＡ法具有结果稳定、检出率高、敏感性好和特异性强等特点。连续三年的应用实践说明，该法若能在我国鼠疫防治工作中推广应用，必将会提高我国鼠疫监测工作的质量。

脊髓灰质炎反向被动血凝抑制试验和中和试验的比较

本文应用反向被动血凝抑制试验和中和试验检测76份血清标本的脊髓灰质炎抗体进行了比较,结果两者无显著性差异;反向被动血凝抑制试验和中和试验的总符合率为Ⅰ型89.47％;Ⅱ型88.16％;Ⅲ型94.74％。为无组织培养条件的基层提供了简便易行、快速的实验方法。

定量产肠毒素性大肠埃希氏菌F_(41)黏附素反向间接血凝试验的建立

利用 F41 单因子血清 IgG 致敏绵羊红细胞,建立了定量产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)F41黏附素的反向间接血凝试验。经致敏的绵羊红细胞能被F41单因子血清特异性地抑制,且不与 ETEC K88、ETEC K99、ETEC 987P、致仔猪水肿病大肠埃希氏菌 O138、鼠伤寒沙门菌和猪链球菌2型菌液出现交叉反应,其敏感性比甘露糖抵抗血凝反应(MRHA)至少高 25 倍。结果表明,该反向间接血凝试验具有很高的特异性和敏感性,可用于生物制品中黏附素含量的定量。

狂犬病反相被动血凝抑制试验的建立和应用

狂犬病反相被动血凝抑制试验的建立和应用浙江省卫生防疫站（杭州３１０００９）翁景清李敏红姚苹苹姜理平陆群英唐汉英朱智勇（指导狂犬病是一种病死率非常高的病毒性传染病。目前，常有因被狂犬咬伤而得病死亡的病人。狂犬病因无特效药治疗，唯一有效的办法就是通过接种...

用氯化铬联结病毒与绵羊红细胞的被动血凝试验

建立的用低浓度氯化铬溶液作联结剂将蛋白质抗原联结于绵羊红细胞表面，用于被动血凝试验（ＰＨＡ）的方法显示，绵羊红细胞在联结前用０．２５％胰酶处理，可显著提高抗原与红细胞的联结效力；用联结蛋白相对应的抗血清检测，滴度可达１：２６２１４４０；被联结蛋白浓度由前人试验所获得的最低３ｍｇ／ｍｌ降低到０．２ｍｇ／ｍｌ，从而可用于低蛋白浓度的病毒的联结。