反向高效液相色谱测定法同时测定人血浆中5种镇静催眠药浓度

目的:建立人血浆中地西泮、硝西泮、奥沙西泮、艾司唑仑和阿普唑仑的反向高效液相色谱测定法(RP-HPLC)。方法:以血浆为基质,配制含有5种镇静催眠药的混合标准品,取1mL样品加入50mg/L卡马西平10μL为内标,乙酸乙酯萃取后用100μL流动相溶解,进样20μL,通过高效液相色谱仪检测人血浆基质中5种镇静催眠药浓度。色谱条件:色谱柱为C18柱(4.6mm×250mm),柱温30℃,流动相为甲醇:水(65:35),流速1.0mL/min,紫外检测波长为230nm。结果:地西泮、硝西泮、奥沙西泮、艾司唑仑和阿普唑仑在5～1200μg/L范围内线性关系良好(r≥0.9966,P<0.05),加样回收率在95.5%～105.6%,萃取回收率均在75%以上,日内及日间变异相对标准偏差(RSD)均小于10%(n=5)。结论:RP-HPLC方法简便、准确、灵敏,适用于人血浆中地西泮、硝西泮、奥沙西泮、艾司唑仑和阿普唑仑的血药浓度的同时检测。

面粉中过氧化苯甲酰含量的反向高效液相色谱测定法

目的探讨面粉中过氧化苯甲酰含量测定的RP—HPLC法。方法色谱条件：色谱柱为Smmry C18（150mm×4．6mm，id5 μm），流动相为甲醇-0．02mmol／L乙酸铵（10＋90），流速1．0ml／min，检测波长230nm。结果面粉中过氧化苯甲酰被盐酸羟胺还原成苯甲酸，在此色谱条件下，苯甲酸在6min内出峰，峰面积与浓度在0．01～0．1mg/ml范围内成线性，r〉0．9996，平均回收率为96．7％～100．4％，相对标准偏差〈3．5％。结论该方法快速简便，可以满足食品检验的需要。

反向高效液相色谱法测定大鼠血清、组织中加替沙星药物浓度

目的 :建立反向高效液相色谱法测定大鼠血清、组织 (心、肝、肾、胃、肺、大肠、脾、睾丸、大脑、骨骼肌 )匀浆中加替沙星药物浓度。方法 :采用 Sino Chrom C1 8ODS- AP色谱柱 (5 μm i.d.4 .6× 2 5 0 mm) ,流动相为 0 .0 5 mol/ L 磷酸盐缓冲溶液 -甲醇 -三乙胺 (5 5 .0∶ 4 4 .5∶ 0 .5 ) ,p H为 3.1 0 ;流速 1 .0 m l/ min,检测波长为 2 93nm,柱温为 35℃ ,以环丙沙星为内标 ,含药大鼠血清、组织匀浆经二氯甲烷提取 ,于 4 0℃水浴用氮气吹干和盐酸溶解后直接进样。结果 :本测定方法血清加替沙星浓度在 0 .1～ 1 0μg/ ml范围内线性关系良好 ;组织药物浓度在 0 .0 5～ 4 .0μg/ ml范围内线性关系良好。血清中最低检测限为 0 .0 1 μg/ m l,组织中加替沙星的最低检测限均为 0 .0 2 μg/ ml,相对回收率在 88.2 %～ 1 0 8.9%之间 ,绝对回收率在 78.5 %～ 96 .5 %之间 ,日内、日间变异均分别小于 1 0 .4 %和 7.8%。结论 :高效液相色谱法测定大鼠血清、组织中的加替沙星药物浓度精确、灵敏、可靠 。

反向高效液相色谱法测定金诃肝宝胶囊中獐牙菜苦苷的含量

目的:建立反向高效液相色谱法测定金诃肝宝胶囊中獐牙菜苦苷的含量测定方法。方法:采用Waters C18高效液相色谱柱(4.6mm×150mm);CH3CN-H2O-H3PO4(9∶91∶0.091)为流动相;流速:1.0mL/min;检测波长:254nm。结果:该方法的线性范围为0.102～0.110μg/mL(r=0.9997,n=5),平均回收率为98.3%,RSD为1.23%。结论:此方法简便可靠、分离度好,结果准确,可用于该制剂的质量控制。

反向高效液相色谱法同时测定复方氨酚烷胺片中三种主要组分的含量

目的建立复方氨酚烷胺片中三种主要组分含量测定的反向高效液相色谱(RP-HPLC)法。方法色谱柱选用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相选用85∶15的戊烷磺酸钠-甲醇溶液(0.05 mol/L),流速及柱温分别设置为1.0 ml/min、30℃,检测波长选取216 nm,进样量设定20μl,进样测定复方氨酚烷胺片中马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因的含量,并进行方法学考察。结果马来酸氯苯那敏在2.25~42.90 mg/L浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9971),对乙酰氨基酚在30.10~526.71 mg/L浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9983),咖啡因在4.50~96.82 mg/L浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9989)。马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因的加样回收率为分别为98.49%(RSD=0.844%)、99.39%(RSD=0.607%)、99.70%(RSD=0.159%)。结论应用RP-HPLC测定复方氨酚烷胺片中三种主要组分的含量,具有较好的准确性和重现性,且方法简单迅速,可用于其主要组分的含量测定及质量控制。

反向高效液相色谱法检测正心降脂片中丹参酮Ⅱ_(A)、葛根素和大黄素含量

目的建立检测正心降脂片中丹参酮ⅡA、葛根素和大黄素3种成分含量的方法。方法采用反向高效液相色谱(RPHPLC)法。取正心降脂片,除去包衣,研细,取约0.2 g,精密称定,置滤膜滤过,Lichrospher RP-C18色谱柱分离,检测波长为259 nm,流动相A为乙腈,流动相B为0.2%磷酸溶液,梯度洗脱,洗脱程序为0~6 min 12%A、6~15 min 12%~63%A、15~25 min 63%~92%A、25~27 min 91%A、27~30 min 91%~12%A、30~35 min 12%A,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样体积为10µL,二极管阵列检测器定量检测。结果葛根素、大黄素和丹参酮ⅡA分别在0.763~76.3µg/mL、0.768~76.8µg/mL和0.199~19.9µg/mL范围内,线性关系良好,平均加标回收率分别为98.5%,99.3%和99.6%,重复性相对标准偏差(RSD)分别为1.29%、2.05%和1.72%;稳定性RSD分别为2.03%、1.72%和1.33%。结论实验建立的方法具有简便、快速、准确等特点,适用于正心降脂片产品的质量控制,为进一步完善和提高该品种的质量标准提供技术参考。

反向高效液相色谱法测定天麻胶囊中天麻素的含量

目的:建立天麻胶囊中天麻素的含量测定的方法。方法:采用反向高效液相色谱(RP-HPLC)Kromasil ODS-C18(4.6mm×200mm)柱,流动相∶乙腈-0.2%磷酸水溶液(3∶97)检测波长220nm。结果:天麻素的线性范围在0.0092μg^0.046μg,r=0.9995,平均回收率:98.8%,RSD为0.6%。结论:该法灵敏、准确可用于控制天麻胶囊的质量。

意大利科研人员研究反向高效液相色谱法定量乳清蛋白及中红外光谱法快速预测甜乳清中的蛋白成分

在乳品工业中膜过滤技术被用于乳清废弃物减量处理并同时回收乳清蛋白。乳清蛋白成分对乳清过滤处理有较哟影响，乳清蛋白组分快速测定以检测乳清蛋白回收率引导起了乳品制造者的兴趣。

36%丙炔氟草胺·草甘膦悬浮剂中丙炔氟草胺反向高效液相色谱分析

本文采用反向高效液相色谱法,以甲醇+水为流动相,使用Agilent ZORBAX SB-C185μm(4.6×250mm)色谱柱和二极管阵列(DAD)检测器,在215nm检测波长下,对36%氟草·草甘膦悬浮剂中丙炔氟草胺进行定量分析。结果表明:丙炔氟草胺的线性相关系数为0.9996,标准偏差为0.0019,变异系数为0.3014,回收率在99.09%~100.16%,平均回收率为99.67%。

重组结核分枝杆菌Ag85b蛋白原液纯度反向高效液相色谱检测方法的建立及验证

目的 建立检测重组结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)Ag85b蛋白原液纯度的反向高效液相色谱法,并进行验证。方法 设计4因素3水平正交试验,将面积、拖尾因子、峰面积、峰面积RSD作为评价指标进行分析,摸索最适检测条件,并依据《中国药典》四部(2020版)9101药品质量标准分析方法验证指导原则进行专属性、线性范围、精密度、耐用性等验证。结果 当检测条件为有机相洗脱比例30%~95%、检测温度35℃、进样量3μg、95%有机相洗脱时间15 min时,各评价指标结果均较好,在该检测条件下线性相关系数(R2)为0.998 5,线性范围为1.8~4.2μg;重复性RSD为0.01%;中间精密度RSD为0.16%;在柱温与流速细微变动下均具有良好的耐用性。结论 建立了重组MTBAg85b蛋白原液纯度检测的反向高效液相色谱法,该方法专属性强,精密度、耐用性好,可用于重组MTBAg85b蛋白原液质量控制。

高效液相色谱法测定金银花中绿原酸及木犀草苷含量

为同时测定鲜金银花中绿原酸及木犀草苷的含量,建立了一种反向高效液相色谱法,使用超声萃取进行前处理,优化了提取溶剂、提取温度、流动相等条件,并进行了方法学考察。结果表明,绿原酸和木犀草苷在0.5~100.0 mg/mL内呈现良好的线性,R^(2)>0.999,加标回收率为96%~108%,重复性RSD分别为2.05%和2.44%。说明该方法操作简便,结果准确,可用于鲜金银花中绿原酸及木犀草苷含量的测定。

反向离子对高效液相色谱法测定人血浆中尼古丁浓度

目的建立一种简便、准确的高效液相色谱法测定人血浆中尼古丁浓度。方法采用反向离子对高效液相色谱法,Kromasil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),缓冲液(30mmol.L-1磷酸二氢钠,30mmol.L-1柠檬酸三钠,4mmol.L-1辛烷磺酸钠,pH 4.5)-乙腈(85∶15),流速1.0mL.min-1,紫外检测波长260nm,柱温35℃,以2-苯基咪唑为内标。结果尼古丁在0.04～2.56mg.L-1范围内线形关系良好,标准曲线为Y=0.0009X-0.007,r=0.99995,相对回收率95.2～106.36%,提取回收率67.5～77.3%,日内RSD≤3.1%,日间RSD≤6.8%。血样在-20℃下保存30d后尼古丁含量无明显降低。结论本法具有灵敏度高、准确性好、色谱峰分离良好等特点,适用于人血浆样本中尼古丁浓度的测定。

高效液相色谱法测定农田人参中9种人参皂苷单体含量

为评价农田人参质量,建立同时测定农田人参中9种人参皂苷单体含量的方法。采用反相高效液相色谱法(reversed phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)对农田人参与伐林人参中9种人参皂苷单体含量进行比较分析,色谱条件:色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱[0min(18%A)→24min(22%A)→26min(26%A)→30min(32%A)→50min(33.5%A)→55min(38%A)],流速为1.0mL/min,检测波长203 nm,柱温35℃。结果表明:农田人参含有与伐林人参相同种类的9种人参皂苷Rg 1、Re、Rf、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd;6年生农田人参9种皂苷含量均高于6年生伐林人参,但除Rg1含量差异显著外(P<0.05),其他8种皂苷含量均不显著(P>0.05);4年生农田人参除Rg1、Rf显著高于4年生伐林人参(P<0.05)外,其他7种皂苷含量与4年生伐林人参差异均不显著(P>0.05)。农田人参中Rgl、Rb1的含量、Rgl和Re含量之和、Rgl和Re含量之和均超过中国药典、欧洲药典与美国药典的要求。

反向离子对高效液相色谱-电感耦合等离子质谱联用分析富硒食品中硒的形态

建立了利用反向离子对高效液相色谱-电感耦合等离子质谱(RP-HPLC-ICP-MS)联用分离检测富硒食品中硒酸根(SeO42-)、亚硒酸根(SeO32-)、硒代胱氨酸(SeCys2)、硒甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代蛋氨酸(SeMet)5种不同硒元素形态的方法。研究采用胰蛋白酶、蛋白酶K和链霉蛋白酶在Tris-HCl缓冲液中37℃条件下振荡酶解36h提取食品中的硒化物,利用Hypersil GOLD C8作为分离柱,磷酸二氢钾-七氟丁酸-甲醇-水体系作流动相,实现了在800s内完成5种硒元素形态的快速分离,分离效果好。再运用电感耦合等离子质谱(ICP-MS)检测5种硒化物,5种硒化物标准曲线线性良好,5种硒化物检出限分别为0.20,0.25,0.25,0.20,0.50μg/L,使用该方法实测标准样品回收率为100.6%。该方法分离效果好、检出限低,是一种有效可行的对富硒产品中硒元素形态的分析方法。

反相高效液相色谱法测定人血中利培酮及9-羟利培酮及其临床应用

目的：测定人血中利培酮及其活性代谢物９－羟利培酮浓度，探讨其临床意义。方法：采用 Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ－Ｃ１８色谱柱（２５０ ｍｍ × ４．６ ｍｍ ＩＤ，粒度 ５μｍ），以甲醇：水：三乙胺（７３：２６．５：０．５ ｖ／ｖ，冰醋酸调ｐＨ＝８）为流动相，流速 １ｍｌ·ｍｉｎ－１，在ＵＶ２８０ｎｍ处测定了１６例口服利培酮精神病患者血中利培酮及其活性代谢物９－羟利培酮浓度。结果：利培酮及 ９－羟利培酮在 １０－１００ μｇ·Ｌ－１范围内有良好线性关系（ｒ＝０．９９５０及ｒ＝０．９９３５）。方法回收率为９８．３％～１０２．１％，日内及日间变异系数小于 ６．７１％。在每日 ２－６ｍｇ剂量范围内， １６例患者利培酮及 ９－羟利培酮血液浓度分别为 １０．９～３８．８ μｇ·Ｌ－１及 １１．５９－４９．７ μｇ·Ｌ－１。结论：测定方法简便、准确、专一性强，可用于临床治疗药物监测及人体内药代动力学研究。在每日２～５ｍｇ剂量范围内，利培酮及９－羟利培酮血浓度随服药剂量的增加而升高。

海带生长素IAA分离纯化及高效液相色谱分析

对海带(Laminaria japonica Aresch.)中的生长素IAA的分离纯化条件进行优化,结果以超声法破碎细胞、采用体积分数95%乙醇浸提,乙醚萃取,硅胶脱色,然后通过Sephadex LH20柱层析为最佳条件,利用反向高效液相色谱(RP-HPLC)方法对IAA进行了定性和定量分析.实验表明:该方法操作简便、准确,重现性好,毒性较低,通过RP-HPLC结果可初步确定纯化产物中含有IAA,产量可达65～95μg/kg(鲜重).研究结果为进一步生物活性的研究和海带生长素及其他植物生长促进剂的开发和利用奠定了基础.

反相高效液相色谱检测低浓度5-氨基乙酰丙酸

建立了一种柱前衍生反相高效液相色谱检测溶液中低浓度5-氨基乙酰丙酸的方法,填补了低浓度ALA的HPLC法检测的空白。使用Agilent SB-C18型色谱柱（250mm×4.6mmi.d.,5μm）,以50mM甲醇-醋酸钠缓冲溶液（pH4.0）洗脱,流速为1mL/min,柱温30℃,254nm波长下检测10min。在此条件下,5-氨基乙酰丙酸在浓度为1~1000mg/L范围内与色谱峰面积值之间线性关系良好,回归系数均在0.9999以上。发酵液产物的加标回收率平均值为101.7%。将检测结果与分光光度法相比,符合较好。测试数据表明,此方法简单、可靠,对于低浓度的ALA测定效果良好。